第七章可見分光光度法(編輯修改稿)
2024-08-28 12:47 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 %????TT今假設(shè)大多數(shù)分光光度計(jì)的適宜測(cè)量范圍~%20~%65：：AT 測(cè)定結(jié)果相對(duì)誤差較小?25 2）訊號(hào)噪音 —— 與光訊號(hào)有關(guān) 表明測(cè)量誤差較小的范圍 一直可延至較高吸光度區(qū)，對(duì)測(cè)定有利 26 167。 124 分光光度計(jì)簡(jiǎn)介 一、主要部件 光源 單色器 樣品室 檢測(cè)器 顯示 27 1．光源： 2． 單色器： 包括狹縫 、 準(zhǔn)直鏡 、 色散元件 棱鏡 —— 對(duì)不同波長(zhǎng)的光折射率不同 色散元件 分出光波長(zhǎng)不等距 光柵 —— 衍射和干涉 分出光波長(zhǎng)等距 鎢燈或鹵鎢燈 —— 可見光源 350~1000nm 氫燈或氘燈 —— 紫外光源 200~360nm 28 3． 吸收池： 玻璃 —— 能吸收 UV光 ， 僅適用于可見光區(qū) 石英 —— 不能吸收紫外光 ， 適用于紫外和可見光區(qū) ? 要求：匹配性 （ 對(duì)光的吸收和反射應(yīng)一致 ） 4． 檢測(cè)器： 將光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)的裝置 5．記錄裝置：訊號(hào)處理和顯示系統(tǒng) 光電池 光電管 光電倍增管 二極管陣列檢測(cè)器 29 30 167。 125 分光光度法的建立 一、顯色反應(yīng)及顯色條件的選擇 將試樣中被測(cè)組分轉(zhuǎn)化成有色化合物的反應(yīng)。 ?配位化學(xué)反應(yīng)： 如： Fe3+與 CNS反應(yīng) ?氧化還原反應(yīng)： 如： Mn2+轉(zhuǎn)化 MnO4 31 在顯色反應(yīng)中與被測(cè)組分生成有色化合物的試劑。 ?無機(jī)顯色劑： 硫氰酸鹽、鉬酸銨、過氧化氫等。 ?有機(jī)顯色劑： 如 三苯甲烷類有鉻天青 S、 二甲酚橙等； 偶氮 類有 偶氮胂 Ⅲ 、 PAR等。 32 ?與金屬離子生成極其穩(wěn)定的螯合物 ?選擇性和靈敏度高 ?應(yīng)用廣泛 其特性與有機(jī)顯色劑的分子結(jié)構(gòu)有密切的關(guān)系： （ 1） 生色團(tuán) （ 發(fā)色團(tuán) ） ： 能吸收紫外 可見光的基團(tuán) ? 有機(jī)化合物：具有不飽和鍵和未成對(duì)電子的基團(tuán) ,具有 n電子和 π 電子的基團(tuán)產(chǎn)生 n→ π* 躍遷和 π→π* 躍遷躍遷 E較低 ?例： C＝ C； C＝ O； C＝ N； — N＝ N— 33 （ 2） 助色團(tuán)： 本身無紫外吸收 ， 但可以使生色團(tuán)吸收峰加強(qiáng)同時(shí)使吸收峰長(zhǎng)移的基團(tuán) ?有機(jī)物：連有雜原子的飽和基團(tuán) ?例： — OH， — OR， — NH— ， — NR2— ， — X （ 3） 紅移和藍(lán)移： 由于化合物結(jié)構(gòu)變化 （ 共軛 、 引入助色團(tuán)取代基 ） 或采用不同溶劑后 吸收峰位置向長(zhǎng)波方向的移動(dòng) ， 叫紅移 （ 長(zhǎng)移 ） 吸收峰位置向短波方向移動(dòng) ， 叫藍(lán)移 （ 紫移 ，短移 ） 34 （ 4） 增色效應(yīng)和減色效應(yīng) 增色效應(yīng)：吸收強(qiáng)度增強(qiáng)的效應(yīng) 減色效應(yīng)：吸收強(qiáng)度減小的效應(yīng) （ 5） 強(qiáng)帶和弱帶： ε max105 → 強(qiáng)帶 ε max103 → 弱帶 選擇顯色反應(yīng)時(shí)應(yīng)考慮的因素： 1）靈敏度高 2）選擇性高 3）生成物穩(wěn)定 4）顯色劑在測(cè)定波長(zhǎng)處無明顯吸收，與有色 物最大吸收波長(zhǎng)之差（對(duì)比度），應(yīng)滿足 ?? 60nm。 35 顯色條件的選擇 （ 1）顯色劑用量： 固定待測(cè)組分 的濃度和其他條件 只改變顯色劑濃度 測(cè)定吸光度。做 A劑用量 cR的關(guān)系曲線如圖。 選擇曲線變化平坦處作為顯色條件。 （ 2）溶液的 pH值 固定待測(cè)組分的濃度和其他條件只改變?nèi)芤旱?pH值測(cè)定吸光度。做 ApH曲線，選擇曲線中吸光度較大且恒定的平坦區(qū)所對(duì)應(yīng)的 pH范圍。 吸光度與顯色劑用量關(guān)系曲線 cR cR cR A A A 36 （ 3）顯色溫度 固定待測(cè)組分的濃度和其他條件只改變反應(yīng)溫度，測(cè)定吸光度。做 AT曲線，選擇曲線中吸光度較大且恒定的平坦區(qū)所對(duì)應(yīng)的溫度范圍。 （ 4）顯色時(shí)間及穩(wěn)定時(shí)間 固定待測(cè)組分的濃度和其他條件只改變反應(yīng)的時(shí)間，測(cè)定吸光度。做 At曲線，選擇曲線中吸光度較大且恒定的平坦區(qū)所對(duì)應(yīng)的時(shí)間范圍。 pH A 圖 129 吸光度與 pH關(guān)系曲線 37 二、干擾的消除
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