畢業(yè)論文--工業(yè)中應(yīng)用雙酶法制取葡萄糖生產(chǎn)工藝及生產(chǎn)應(yīng)用(編輯修改稿)
2025-07-12 09:07 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 %α 淀粉酶活力的測定 配制實驗試劑如下： ①標準葡萄糖溶液（ 1mg/mL):準確稱取 100mg 葡萄糖，用蒸餾水溶解并定容至 100mL； ② 3， 5二硝基水楊酸試劑：精確稱取 3， 5二硝基水楊酸 1g，溶于 20mL 2mol/L 的 NaOH 溶液中，加入 50mL蒸餾水，再加入 30g酒石酸鉀鈉，待溶解后用蒸餾水定容至 100mL。蓋緊瓶塞，勿使CO2進入。若溶液渾濁可過濾后使用。 ③ A 液（ ）：稱取 C6H8O7 H2O ，用蒸餾水溶解并定容至 1L； B 液（ ）：稱取 Na3C6H5O7 2H2O ,用蒸餾水溶解并定容至 1L； 取 A液 55mL與 B液 145mL混勻，即為 酸鈉緩沖液； ④ 2%淀粉溶液：稱取 2g淀粉溶于 酸鈉緩沖液中； 實驗步驟如下 ： ①葡萄糖標準曲線的制作 取 7 只干凈的試管，編號，按表二加入試劑，做兩份平行。 表 2：葡萄糖標準曲線的制作 搖勻，置沸水浴中煮沸 5min。取出后冷卻接近室溫，加蒸餾水8mL，即總體積 10mL。以 1 號管作為空白調(diào)零點，在 540nm 波長下比色測定光密度。以葡萄糖含量為橫坐標，光密度為縱坐標，繪制標準曲線。 ②酶活力的測定 取干凈的試管，編號，按表三進行操作。 表 3：酶活力測定取樣表 將各試管搖勻，顯色后進行 540nm 比色測定光密度，記錄測定結(jié)果。 糖化酶活力的測定 實驗采取的方法是次碘酸鈉法，即在 ，溫度 40℃的情況 試劑 管號 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖標準液 /mL 0 蒸餾水 /mL 0 3， 5二硝基水楊酸 /mL 1 0 操作項目 淀粉酶活力測定 1 2 3 %淀粉酶液 /mL 預(yù)保溫 將各試管和淀粉溶液置于 70℃恒溫水浴中保溫 10min 3,5二硝基水楊酸 /mL 1 0 0 0 添加 2%淀粉溶液 /mL 保溫 在 70℃恒溫水浴中準確保溫 5min 3,5二硝基水楊酸 /mL 0 沸水浴 5min 定容 加入 8mL 蒸餾水 下每小時催化可溶性淀粉水解生成 1mg 葡萄糖的酶量為一個酶活力單位。 配制實驗試劑如下： ① 2%可溶性淀粉：稱取絕干可溶性淀粉 2g，以少許蒸餾水調(diào)勻，傾入 80mL左 右的沸水中，繼續(xù)煮沸至透明狀。冷卻至室溫后，加蒸餾水定容至 100mL； ② ， ：用 ； ③ ：稱取碘化鉀 36g，溶于 100mL 蒸餾水中，加入碘 ，溶解后定容至 1000mL； ④ ：稱取 4gNaOH，用水溶解后，定容至1000mL； ⑤ 1mol/L硫酸溶液：量取 56mL 濃硫酸（相對密度 ），換換倒入適量水中，定容至 1000mL； ⑥ ： 稱 取 硫 代 硫 酸 鈉（ Na2S2O3 5H2O)，碳酸鈉 ，溶于 1000mL 煮沸后冷卻的蒸餾水中，存于棕色瓶內(nèi)； ⑦ %淀粉指示劑：稱取 可溶性淀粉，用少許水調(diào)勻，傾入 80mL 沸水中，繼續(xù)煮至透明，冷卻后定容至 100mL。 具體實驗步驟如下： ①吸取 2%可溶性淀粉 10mL，加入 5mL，混勻后于 40℃水浴中預(yù)熱 10min； ②加入酶液 1mL（空白實驗以煮沸失活的酶液代替），于 40℃水浴中反應(yīng) 10min。反應(yīng)結(jié)束時，立即于沸水浴中加熱使酶失活； ③取上述反應(yīng) 液 5mL 于碘量瓶，加入 ，搖勻，在暗處放置 15min，加入 2mol/L硫酸溶液 2mL； ④以 %可溶性淀粉為指示劑，用 定至藍色消失為終點。記錄 以及空白滴定所消耗的硫代硫酸鈉的毫升數(shù) B； ⑤計算酶活力。在上述條件下每小時催化可溶性淀粉生成 1mg葡萄糖的酶量定義為 1個酶活力單位，即： 酶活力 =（ BA) N 16/5 60/10 式中： A加酶液組平均消耗的硫代硫酸鈉 溶液的量； B空白組消耗的硫代硫酸鈉溶液的量； N硫代硫酸鈉溶液的當量濃度； 1ml 硫代硫酸鈉標準溶液 (1mol/L)相當?shù)钠咸烟堑馁|(zhì)量 (g/mol)； 16反應(yīng)液的總體積（ ml）； 5吸取反應(yīng)液的體積（ ml）； 60/10反應(yīng) 10min，換算成 1h 的酶活力系數(shù)。 五、實驗數(shù)據(jù)與處理 費林混合溶液的標定 費林混合溶液的標定是以 %的葡萄糖標準液進行的，目的是在于確定費林混合液的濃度，以計算樣品的還原力。 表 4：費林混合溶液標定記錄表 故 而，V1= 最優(yōu)液化條件的正交實驗 液化過程中，淀粉漿液從最開始的白色均勻液體在 75℃水浴鍋中慢慢變稠糊化，白色純度進一步提高。加入α 淀粉酶后置于水浴鍋中繼續(xù)攪拌，料液逐漸變稀變黃，呈黃白色均勻液體。在 100℃的水浴鍋滅活，溶液再度變稠變黃，最終得到淡黃色乳狀均勻膠體。 在表一條件下進行實驗，得到的料液分別用阿貝折射儀測量其干物質(zhì)濃度、量筒與電子天平測量其密度，最后測定其費林滴定消耗體積，測得數(shù)據(jù)如下（表中滴定用樣品已經(jīng)過 8倍稀釋）： 表 5：最優(yōu)液化條件正交實驗記錄表 列號 試驗號 溫度 /℃ 液化時間/min 酶用量 /(g/50g淀粉 ) 料液指標 滴定體積 ml A B C D 5ml 質(zhì)量 /g 干物質(zhì)含量 /% 1 2 1 1（ 55） 1（ 20） 1（ ） 1 24 2 1 2（ 30） 2（ ） 2 3 1 3（ 40） 3（ ） 3 23 4 2（ 65） 1 2 3 5 2 2 3 1 6 2 3 1 2 1 2 3 初讀數(shù) /mL .60 預(yù)加后讀數(shù) /mL 最終讀數(shù) /mL 滴定體積 /mL 平均 /mL 7 3（ 75） 1 3 2 8 3 2 1 3 23 9 3 3 2 1 根據(jù)標準，還原力 RP=? 21 ??? VNV； 葡萄糖當量 DE=DMCRP100?。 式中： 1V — 混合費林試劑在標定時所消耗的 D葡萄糖標準溶液的體積， mL； 2V — 在測定時所消耗的樣品液的體積， mL； N — 所測定樣品液的稀釋倍數(shù)； ? — 樣品的密度， g/mL； DMC — 樣品的干物質(zhì)含量， %。 按以上步驟，整理數(shù)據(jù)，得到
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