多糖分離純化及含量測(cè)定(編輯修改稿)
2025-06-20 01:59 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 微波協(xié)助浸取過程中 ， 萃取劑種類 、 微波劑量 、 物料含水量 、 溫度 、 萃取時(shí)間及 pH值等都對(duì)萃取效果產(chǎn)生影響 。 其中 ， 萃取劑種類 、 微波作用時(shí)間和溫度對(duì)萃取效果影響較大 。 ? 微波輔助提取多糖和其他的萃取方法比較 ， 微波萃取效率高 ， 操作簡(jiǎn)單 ， 且不會(huì)引入雜質(zhì) ， 多糖純度高 ，能耗小 ， 操作費(fèi)用低 ， 符合環(huán)境保護(hù)要求 ， 是很好的多糖提取方法 。 物理強(qiáng)化法：高壓脈沖法 ? 高壓脈沖法 是對(duì)兩電極間的流態(tài)物料反復(fù)施加高電壓的短脈沖 （ 典型為 20～ 80 kV/cm） 進(jìn)行處理 。 ? 動(dòng)物 、 植物 、 微生物的細(xì)胞 ， 在外加電場(chǎng)作用下 ， 產(chǎn)生 橫跨膜電位 ， 絕緣的生物膜由于電場(chǎng)形成了微孔 ，通透性發(fā)生變化 ， 當(dāng)整個(gè)膜電位達(dá)到極限值 (約為 1V)時(shí) ， 膜破裂 ， 膜結(jié)構(gòu)變成無序狀態(tài) ， 形成細(xì)孔 ， 滲透能力增強(qiáng) 。 電位差達(dá)到臨界點(diǎn) ， 細(xì)胞破裂 。 從而有利于多糖的提取 。 二、多糖的分離純化 ? 1. 除蛋白 Sevage 法 、 三氯乙酸法 、 三氟三氯乙烷法 ? 2. 色素的去除 吸附法 （ DEAE纖維素 、 硅藻土等 ） 、 氧化法 （ 過氧化氫 ） 、 離子交換法 ? 3. 多糖的純化 超濾法 、 季胺鹽沉淀法 、 柱層析法和色譜法等 1. 除蛋白 ? 采用醇沉或其它溶劑沉淀得到的粗多糖中常含有較多的蛋白質(zhì) , 需要除蛋白 。 ? 除蛋白的方法傳統(tǒng)上有 Sevage 法 、 三氯乙酸法 、 三氟三氯乙烷法 等 。 Sevage 法 ? 根據(jù)蛋白質(zhì)在氯仿等有機(jī)溶劑中變性的特點(diǎn) ， 用 V(氯仿 )∶ V(戊醇或正丁醇 )為 5∶ 1 或 4∶ 1， 混合物劇烈振搖 20～ 30 min， 蛋白質(zhì)變性生成凝膠 ， 離心分離 ， 分去水層和溶劑層交界處的變性蛋白質(zhì) 。 ? 一般按多糖水溶液的 1/5~1/4體積加入 。 ? 此種方法只能除去少量蛋白質(zhì) ， 須反復(fù)多次 ， 多糖有損失 ，得率不高 , 且氯仿對(duì)人體也有一定毒性 , 操作時(shí)應(yīng)注意 。 ? 該法優(yōu)點(diǎn)是條件溫和 , 可避免多糖的降解 。 利用蛋白酶可水解蛋白質(zhì)的特性 , 在多糖樣品溶液中加入一些蛋白質(zhì)水解酶如中性蛋白酶和糜蛋白酶 , 再用 Sevage 法效果更佳 。 ? 此法不能除去脂蛋白 ， 因?yàn)橹鞍兹苡诼确?。 三氯乙酸法 ? 三氯乙酸 是一種有機(jī)酸 ， 使多糖提取液中的蛋白質(zhì)與有機(jī)酸作用而變性沉淀 。 ? 該法是在多糖水提液中滴加 5%～ 10%與多糖水提取液等體積的三氯乙酸 ， 混勻靜置過夜 ， 離心除去膠狀沉淀 ， 重復(fù)以上的操作直至溶液不再繼續(xù)混濁為止 ， 得無蛋白質(zhì)的多糖 。 ? 三氯乙酸濃度越大 ， 除蛋白質(zhì)效果越好 ， 但對(duì)多糖的影響也越大 ， 可能是三氯乙酸 對(duì)多糖結(jié)構(gòu)具有破壞作用 ， 使多糖降解 ， 而且這種破壞作用隨著三氯乙酸濃度增大而增強(qiáng) 。 三氟三氯乙烷法 ? 將多糖溶液與三氟三氯乙烷等體積混合 ， 低溫?cái)嚢?10 min 左右 ， 離心分離得上層水層 ， 水層繼續(xù)用上述方法反復(fù)處理幾次 ， 得無蛋白質(zhì)的多糖溶液 ， 此法效率較 Seavg 法高 ， 但溶劑沸點(diǎn)低 ， 易揮發(fā) ， 不宜大量應(yīng)用 。 2. 色素的去除 ? 中草藥來源的多糖 , 可能含有酚型化合物而顏色較深 , 這類色素大多呈負(fù)性離子 ,不能用活性炭吸附劑脫色 , 可以用弱堿性樹脂 DEAE纖維素來吸附色素 ,這樣不僅可以達(dá)到脫色的目的 , 而且可以進(jìn)行多糖的分離 。 ? 若多糖與色素結(jié)合 , 易被 DEAE 纖維素吸附 , 不能被水洗脫 , 這類色素可用 低溫氧化法脫色 ， 溫度較高下氧化易引起多糖的降解 。 ? 對(duì)于同時(shí)含有游離蛋白質(zhì)和色素的多糖 , 可通過 生成金屬絡(luò)合物的方法以同時(shí)除去蛋白和色素 , 方法是加入菲林試劑 、 氯化銅 、 氫氧化鋇和醋酸鉛等與多糖生成不溶性絡(luò)合物 , 經(jīng)分離后用陰離子交換樹脂分解絡(luò)合物得到多糖 。 3. 多糖的純化 ? 超濾法 ? 季胺鹽沉淀法 ? 柱層析法 ? 色譜法 ? 其他方法 超濾法 ? 膜分離技術(shù) （ membrane separation technology， MST） 是一種高效分離技術(shù) ， 分離過程以選擇透過性膜作為分離介質(zhì) ， 通過在膜兩側(cè)施加某種推動(dòng)力 （ 壓力差、 化學(xué)位差 、 電位差等 ） ， 使原料液中組分有選擇性的通過膜 。 目前應(yīng)用較多的是超濾和微濾技術(shù) 。 如采用中空纖維超濾膜 , 對(duì)多糖去蛋白質(zhì)后的提取
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