酵母雙雜交技術(shù)及其在蛋白質(zhì)組(編輯修改稿)
2025-06-19 23:23 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 激活因子 ,從而激活相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)。這個(gè)被激活的、能顯示“誘餌”和“獵物”相互作用的基因稱之為 報(bào)道基因 (reporter gene) 。通過(guò)對(duì)報(bào)道基因表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè) ,反過(guò)來(lái)可判別作為“誘餌”和“獵物”的 2 個(gè)蛋白質(zhì)之間是否存在相互作用。在此基礎(chǔ)上 Fields 等人采用編碼 β 半乳糖苷酶的 LacZ作為報(bào)道基因 ,并且在該基因的上游調(diào)控區(qū)引入受 GaL4 蛋白調(diào)控的 GAL1 序列。這個(gè)改造過(guò)的 LacZ 基因 被整合到酵母染色體 URA3 位上。而酵母的 GAL4 基因和GAL80 基因 (GaL80 是 GaL4 的負(fù)調(diào)控因子 ) 被缺失 ,從而排除了細(xì)胞內(nèi)源調(diào)控因子的影響。已經(jīng)知道在 Snf1 和 Snf2 之間存在相互作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有同時(shí)轉(zhuǎn)化了 Snf1 和 Snf2 融合表達(dá)載體的酵母細(xì)胞才有 β 半乳糖苷酶活性 ,單獨(dú)轉(zhuǎn)化其中任何一個(gè)載體都不能檢測(cè)出 β 半乳糖苷酶活性。 酵母雙雜交系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)基本過(guò)程 Sos恢復(fù)系統(tǒng) ? 原理： ? 正常情況下，當(dāng)有生長(zhǎng)信號(hào)刺激的時(shí)候，酵母的 Ras鳥(niǎo)苷酸交換因子 Cdc25會(huì)富集到細(xì)胞膜上；這時(shí) Cdc25 能夠促使Ras蛋白的 GDP與 GTP的交換，啟動(dòng)下游的信號(hào)，促進(jìn)酵母細(xì)胞的生長(zhǎng)。在酵母溫度敏感缺陷株 CDC252中， Cdc25 由于突變喪失了上述功能，使得此菌株只能在 25攝氏度下生長(zhǎng)，而在限制溫度 37攝氏度無(wú)法生長(zhǎng)。 Sos 是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的 Ras 鳥(niǎo)苷酸交換因子，與酵母的 Ras 鳥(niǎo)苷酸交換因子Cdc25 同源；研究發(fā)現(xiàn)人 Sos 能夠替代酵母 Cdc25，使酵母細(xì)胞存活和增殖。于是在酵母溫度敏感缺陷株 Cdc252 中，當(dāng)人的 Sos 與膜定位信號(hào)（肉豆蔻?；蚍仵セ盘?hào)）融合后，就會(huì)富集到細(xì)胞膜上，從而以不依賴配
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