雙重或多重免疫組化標(biāo)記(編輯修改稿)
2025-06-17 20:48 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 AEC(紅色 ):4CN(藍(lán)色 ) AP萘酚 ASMX堅(jiān)固紅 (fast red 紅色 )堅(jiān)固藍(lán) (fast blue 藍(lán)色 ) 雙酶雙底物 HRP(DAB):AP(萘酚 ) HRP(4CN):AP(萘酚 ) （直接法、間接法、橋法均可使用，靈敏度以橋法中的復(fù)合物法最高，特異性則以直接法最佳） 操作方法類同單酶標(biāo)記，有直接法、間接法、復(fù)合物法之分。 間接法與復(fù)合物法較常采用。 ★ 操作舉例 淋巴瘤輕鏈 κ、 λ的雙重酶標(biāo)記（雙酶雙底物） (1)石蠟切片常規(guī)脫蠟進(jìn)水（若用含汞固定液固定的組織則需用 %碘的乙醇溶液脫汞 5min，乙醇濃度為 70％，經(jīng)自來水洗后，以 %硫代硫到鈉浸洗 1min，水洗 )； (2)% H2O2甲醇液浸泡切片 30min,自來水洗，蒸餾水洗 ,入 PBS()。 (3)滴加正羊血清 1:10，濕盒，室溫，10min，不洗； (4)加一抗 (抗人 κ PcAb與抗人 λMcAb的混合液 )1:200，濕盒， 37℃ ， 45min或更長(zhǎng)； (5)PBS液， 5min 3 (6)加二抗 (GARG＋ GAMG混合液 1:200)，溫盒， 37℃ ， 30min； (7)PBS洗， 5min 3。 (8)加酶抗酶抗體復(fù)合物 (兔 PAP＋鼠 APAAP 混合液 1:100)，濕盒， 37℃ ， 30min； (9)PBS洗， 5min 3； (10)過氧化物酶顯色反應(yīng)：以 DAB H2O2液顯色 7～ 10min(鏡下控制顯色程度 )，PBS洗， 5min 3； (11)鹼性磷酸酶顯色反應(yīng)：以萘酚 及堅(jiān)固藍(lán) (fast blue)顯色 10～ 15min(鏡下控制顯色程度 )， PBS洗、自來水洗； (12)緩沖甘油封片，光鏡下觀察 P P P A A A κ λ 圖 2 雙酶雙底物 (復(fù)合物法 )雙重酶標(biāo)染色原理
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