sod檢測波長的選擇及含量測定(編輯修改稿)
2025-06-16 23:32 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ， 而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無關(guān)，故可用來測定蛋白質(zhì)含量。測定波長為 540nm，測定范圍為 110mg蛋白質(zhì)。干擾這一測定的物質(zhì)主要有：硫酸銨、 Tris緩沖液和某些氨基酸等。 此法的優(yōu)點是較快速 ，不同的蛋白質(zhì)產(chǎn)生顏色的深淺相近，以及干擾物質(zhì)少。主要的缺點是靈敏度差。因此雙縮脲法常用于需要快速，但并不需要十分精確的蛋白質(zhì)測定。 三、 Folin— 酚試劑法（ Lowry法） 此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即 Folin— 酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測蛋白質(zhì)的靈敏度。這兩種顯色反應(yīng)產(chǎn)生深蘭色的原因是：堿性條件下， 蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)合生成復(fù)合物 。此復(fù)合物將 Folin— 酚試劑中的磷鉬酸鹽 — 磷鎢酸鹽還原，產(chǎn)生深蘭色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。 在一定的條件下，蘭色深度與蛋白的量成正比。 這個測定法的優(yōu)點是 靈敏度高 ，比雙縮脲法靈敏得多，缺點是 費時間較長 ，要精確控制操作時間，標(biāo)準(zhǔn)曲線也不是嚴(yán)格的直線形式，且專一性較差，干擾物質(zhì)較多。 此法也適用于酪氨酸和色氨酸的定量測定。 此法可檢測的最低蛋白質(zhì)量達(dá) 5mg。通常測定范圍是 20250mg。 四、考馬斯亮蘭法（ Bradford法） 1976年由 Bradford建立的考馬斯亮蘭法（ Bradford法），是根據(jù)蛋白質(zhì)與染料相結(jié)合的原理設(shè)計的。這種蛋白質(zhì)測定法具有超過其他幾種方法的突出優(yōu)點，因而正在得到廣泛的應(yīng)用。這一方法是目前靈敏度最高的蛋
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