發(fā)光法測(cè)定菌體atp含量(編輯修改稿)
2025-06-14 20:51 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 的 Tris堿，使定容后的濃度為 ，定容前需要先調(diào)節(jié) PH值。將 PH計(jì)插入 TrisI溶液中，慢慢滴加乙酸溶液，直到 PH值為 ，然后定容，在 4186。C下保存。 采用三氯醋酸（ TCA）作為 ATP提取劑，濃度為 ，在 4186。C下保存。對(duì)于不同的微生物，采用不同的濃度進(jìn)行提取，細(xì)菌和真核細(xì)胞的提取濃度一般為 ，酵母真菌類(lèi)則適當(dāng)高一些。提取結(jié)束后，要用緩沖液將 TCA的濃度稀釋到一定的濃度，再進(jìn)行測(cè)量，以減少 TCA對(duì)反應(yīng)的影響。 四 .實(shí)驗(yàn)材料與儀器 ? TD20/20熒光光度計(jì) ? 抽濾器及真空泵（過(guò)濾微生物進(jìn)，采用 微米的濾膜） ? PH計(jì)。 五 .操作步驟 在測(cè)量微生物的 ATP前，需要將 ATP從微生物內(nèi)提取出來(lái)， ATP的提取效率直接影響生物量測(cè)定結(jié)果。因此， ATP的提取也就成為 ATP生物發(fā)光法測(cè)定生物量和重要步驟之一。 TCA法和 加熱煮沸法 是兩種常用的 ATP提取方法。 TCA法 ?TCA法是目前最常用的 ATP提取方法。 TCA對(duì)活細(xì)胞有兩種作用：一是 破裂細(xì)胞 ，釋放 ATP，二是 ATP水解酶失活 。 ?提取普通微生物中的 ATP時(shí)， TCA濃度為 此濃度下， TCA對(duì) ATP與熒光素酶的生物發(fā)光反應(yīng)較強(qiáng)的抑制作用，必須在反應(yīng)前對(duì)提取液進(jìn)行中和，稀釋。使 TCA濃度 小于或等于 ，此時(shí) TCA對(duì)反應(yīng)的影響基本可以忽略。一般采用 TrisAectate緩沖液進(jìn)行稀釋。 具體操作 取樣品（如河水等，如果是
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