發(fā)光法測(cè)定菌體atp含量-資料下載頁(yè)
2025-05-09 20:51本頁(yè)面
【正文】 ATP含量 , ATP含量可以轉(zhuǎn)化為微生物的濃度 . 測(cè)量熒光所用的儀器是 TD20/20熒光光度計(jì)，一般將儀器的設(shè)置延遲時(shí)間設(shè)為 60s 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作 ?在測(cè)定管中加入 50 μl一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液和 50 μl緩沖液，測(cè)定管置于樣品室中，加入 100μl熒光素 熒光酶反應(yīng)劑后迅速蓋上樣品室的蓋子，開(kāi)始檢測(cè)。 ? 標(biāo)準(zhǔn)液濃度分別為 107mol/l、 108mol/l、109mol/l、 1010mol/l、 1011mol/l ? 空白值用去 ATP水代替不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行測(cè)定，重復(fù) 3次取平均值。 ?以 ATP濃度的對(duì)數(shù)值 為 橫坐標(biāo) ，熒光反應(yīng)值RLUS的對(duì)數(shù)值 為 縱坐標(biāo) ，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。 ?由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)可見(jiàn)，在一定的范圍內(nèi)， ATP濃度與熒光反應(yīng)發(fā)光值之間有較好的線(xiàn)性關(guān)系，樣品中 ATP濃度與相對(duì)發(fā)光值對(duì)應(yīng)。 樣品測(cè)定及結(jié)果 ?用 50 μl樣品提取液代代替標(biāo)準(zhǔn) ATP試劑， 具體操作與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)一樣 。最后 ATP濃度與微生物濃度之間的轉(zhuǎn)化，是基于每個(gè)微生物包含 5 x1016gATP。 注意 :熒光素酶的活性衰減很快，在室溫下熒光素酶試劑只能保存 8h，如果測(cè)定過(guò)程 8h則應(yīng)將熒光素酶反應(yīng)劑健壯在多支小管中，于 4186。C避光保存。每次使用時(shí)都要提前將酶試劑取出，并室溫下放置一段時(shí)間，使其恢復(fù)到室瘟。如果樣品測(cè)定要持續(xù)較長(zhǎng)的時(shí)間，可分裝酶制劑于 20186。C冷凍保存，保存過(guò)程中要避免反復(fù)解凍。如果峽谷個(gè)樣品量的間隔時(shí)間較長(zhǎng)，就需要重新制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，以得保證測(cè)定的準(zhǔn)確性 。
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