如何申請(qǐng)國(guó)家自然科學(xué)基金(編輯修改稿)
2025-06-16 03:17 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 導(dǎo)表達(dá)的蛋白基因變異時(shí)，肺炎鏈球菌的毒力減弱 [10]。 根據(jù)以上研究背景， 我們的研究思路為：采用插入失活的手段，分別使基因 C、 D、 E失活，從而構(gòu)建一系列感受態(tài)缺陷菌株。通過(guò)體內(nèi)毒力實(shí)驗(yàn)及體外粘附實(shí)驗(yàn)比較其與野生菌株的致病能力，以確定自然條件下形成的感受態(tài)與細(xì)菌致病的關(guān)系。 本研究從轉(zhuǎn)化過(guò)程中感受態(tài)的形成方面探討其對(duì)肺炎鏈球菌毒力影響， 意義在于 : 有關(guān)，而其形成與多種環(huán)境因素相關(guān)，因此本課題為從體內(nèi)研究環(huán)境因素對(duì)于肺炎鏈球菌致病性的影響開(kāi)辟了一條新的途徑。 ，可能會(huì)導(dǎo)致外源基因的整合，使肺炎鏈球菌的生物性狀發(fā)生改變，這也可能與其致病相關(guān)，本研究探討轉(zhuǎn)化過(guò)程對(duì)于肺炎鏈球菌致病能力的影響，為進(jìn)一步深入理解細(xì)菌的致病機(jī)理提供新的依據(jù)。 注意事項(xiàng) 注意邏輯性和層次感，并隨時(shí)點(diǎn)題。 文字表達(dá)要精雕細(xì)琢，避免假大空。 參考文獻(xiàn)必須提供作者全名、出處。 參考文獻(xiàn)必須引用近年的文獻(xiàn)。 要注意參考國(guó)內(nèi)相關(guān)專(zhuān)業(yè)知名專(zhuān)家的論著。 文獻(xiàn)回顧不能回避?chē)?guó)內(nèi)外最新研究進(jìn)展。 三、研究方案 研究目標(biāo) 存在問(wèn)題： 目標(biāo)過(guò)大 撰寫(xiě)要求： 有限目標(biāo) ， 與研究?jī)?nèi)容相呼應(yīng) 如：探索 …… 問(wèn)題，明確 …… 關(guān)系，揭示 …… 規(guī)律， 闡明 …… 原理（機(jī)制），建立 …… 方法等 本研究的目標(biāo)是： 探討 ，重點(diǎn)闡明 : 1） 體內(nèi)環(huán)境是否誘導(dǎo) （ 感受態(tài)的發(fā)生 ） 。 2） 細(xì)菌感受態(tài)形成與轉(zhuǎn)化過(guò)程相關(guān) 。 研究?jī)?nèi)容： 存在問(wèn)題：內(nèi)容過(guò)多，一個(gè)研究周期難以完成； 內(nèi)容分散，不能集中闡明研究目標(biāo)。 撰寫(xiě)要求：內(nèi)容要適當(dāng)，確保研究周期內(nèi)完成； 與目標(biāo)相輔相成，為研究目標(biāo)服務(wù)。 篇幅要適度，注意與技術(shù)路線區(qū)別。 確定研究目標(biāo)、內(nèi)容的依據(jù)： 回答一個(gè)科學(xué)問(wèn)題； 根據(jù)研究周期、資助強(qiáng)度來(lái)確定。 研究?jī)?nèi)容 (一 )：通過(guò) CDE的基因失活及體外轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)得到感受態(tài)缺陷的 。 C、 D、 E的中游 PCR引物，構(gòu)建含有 C、 D、 E中游基因序列的 pEVP3質(zhì)粒。 pEVP3質(zhì)粒轉(zhuǎn)化 陷菌 ， 并通過(guò)體外轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)以確定其感受態(tài)缺陷 。 研究?jī)?nèi)容 (二 )：構(gòu)建可被熒光報(bào)告是否發(fā)生感受態(tài)的菌株。（ cinA是 基因，與外源基因的同源重組有關(guān)，因此將熒光蛋白基因接于其后，熒光表達(dá)可報(bào)告感受態(tài)的發(fā)生）1) 將綠色熒光蛋白（ gfp）基因替代 pEVP3質(zhì)粒中的 LacZ基因，得到熒光報(bào)告質(zhì)粒。 2) 設(shè)計(jì) cinA基因下游的 PCR引物 ， 構(gòu)建含有 cinA基因下游序列的熒光質(zhì)粒 (pEVP4)。 將 pEVP4質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)缺陷和非缺陷的 ， 得到轉(zhuǎn)化菌株 。 研究?jī)?nèi)容 (三 )：體外轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)以驗(yàn)證感受態(tài)缺陷菌不能發(fā)生轉(zhuǎn)化 ， 且熒光表達(dá)的確可報(bào)告感受態(tài)的發(fā)生 。 1) 做體外轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn) ， 驗(yàn)證所構(gòu)建的菌株能被熒光表達(dá)報(bào)告感受態(tài)的發(fā)生 ， 且感受態(tài)缺陷菌不能發(fā)生轉(zhuǎn)化 。 2)檢測(cè)基因 C、 D、 E的表達(dá)情況 ， 進(jìn)一步佐證所構(gòu)建的菌株為需要的菌株 。 研究?jī)?nèi)容 (四 )：通過(guò)感受態(tài)缺陷和非缺陷菌的粘附實(shí)驗(yàn)及體內(nèi)毒力實(shí)驗(yàn)分析細(xì)菌的感受態(tài)發(fā)生是否與其致病毒力相關(guān) 。 1) 分別用感受態(tài)缺陷和非缺陷菌處理 A549細(xì)胞 ,觀察二者處理后細(xì)胞粘附的菌落的多少變化 。 2) 分別將感受態(tài)缺陷和非缺陷菌注射入 BALB/ct小鼠體內(nèi) ， 觀察二者感染小鼠的致死率是否不同 。 3) 分別將感受態(tài)缺陷和非缺陷菌滴入 QS小鼠的鼻黏膜上，觀察二者感染小鼠的致死率是否不同。 研究?jī)?nèi)容 (五 )：檢測(cè)感受態(tài)缺陷及非缺陷菌基因 C、 D、 E在體外和體內(nèi)的表達(dá)情況 ，以進(jìn)一步驗(yàn)證細(xì)菌毒力的改變是否與其感受態(tài)的形成有關(guān) 。 1
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