如何申請(qǐng)國(guó)家自然科學(xué)基金-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 起腦膜炎、中耳炎、鼻竇炎和敗血癥等疾病。 尋找體內(nèi)新的毒力基因，揭示肺炎球菌致病機(jī)理，才能從根本上解決其感染的治療問(wèn)題。 ( 撰寫(xiě)方法：要 緊緊圍繞 本次申請(qǐng)項(xiàng)目的主題。綜合分析 后提出 目前尚未解決的問(wèn)題 。 要特別注意的問(wèn)題：必須對(duì)項(xiàng)目中所運(yùn)用的技術(shù)方法的原理、流程及在實(shí)際應(yīng)用中可能出現(xiàn)的問(wèn)題要十分清楚，絕不能是一種簡(jiǎn)單的移植。已經(jīng)肯定環(huán)境信號(hào)控制著細(xì)菌毒力基因表達(dá) [4]。 根據(jù)以上研究背景， 我們的研究思路為：采用插入失活的手段，分別使基因 C、 D、 E失活，從而構(gòu)建一系列感受態(tài)缺陷菌株。 注意事項(xiàng) 注意邏輯性和層次感，并隨時(shí)點(diǎn)題。 要注意參考國(guó)內(nèi)相關(guān)專業(yè)知名專家的論著。 研究?jī)?nèi)容： 存在問(wèn)題：內(nèi)容過(guò)多，一個(gè)研究周期難以完成； 內(nèi)容分散，不能集中闡明研究目標(biāo)。 研究?jī)?nèi)容 (一 )：通過(guò) CDE的基因失活及體外轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)得到感受態(tài)缺陷的 。（ cinA是 基因，與外源基因的同源重組有關(guān)，因此將熒光蛋白基因接于其后，熒光表達(dá)可報(bào)告感受態(tài)的發(fā)生）1) 將綠色熒光蛋白（ gfp）基因替代 pEVP3質(zhì)粒中的 LacZ基因，得到熒光報(bào)告質(zhì)粒。 1) 做體外轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn) ， 驗(yàn)證所構(gòu)建的菌株能被熒光表達(dá)報(bào)告感受態(tài)的發(fā)生 ， 且感受態(tài)缺陷菌不能發(fā)生轉(zhuǎn)化 。 2) 分別將感受態(tài)缺陷和非缺陷菌注射入 BALB/ct小鼠體內(nèi) ， 觀察二者感染小鼠的致死率是否不同 。 2）制備基因 C、 D、 E蛋白的抗體，做 western blot。 為達(dá)預(yù)期目標(biāo)所必須掌握的關(guān)鍵技術(shù)或 研究手段。 技術(shù)路線 存在問(wèn)題： 不清楚，不詳細(xì)。 可行性分析 理論分析 研究手段、方法分析 預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 所用特殊實(shí)驗(yàn)材料（試劑）的分析 對(duì)所具備的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行分析 對(duì)項(xiàng)目組成員搭配及其運(yùn)用技術(shù)方法的能力分析 CP1250肺炎鏈球菌及質(zhì)粒 pEVP3由 Morrison教授贈(zèng)送 ， 人肺癌上皮 A549細(xì)胞已從中科院上海細(xì)胞所購(gòu)得 ， 流式細(xì)胞儀熒光記數(shù)測(cè)定在我校兒童醫(yī)院完成 ， PCR引物由北京賽北盛生物有限公司合成 。 本實(shí)驗(yàn)室已掌握肺炎鏈球菌體外轉(zhuǎn)化的方法 ，而粘附及毒力實(shí)驗(yàn)的方法已有多篇報(bào)道 。 跟蹤創(chuàng)新： ? 在前人工作基礎(chǔ)上補(bǔ)充、完善現(xiàn)有理論； ? 對(duì)原有技術(shù)、方法進(jìn)行修改后產(chǎn)生 1＋ 1＞ 2的 效果。 本研究從缺失肺炎鏈球菌感受態(tài)形成的關(guān)健環(huán)節(jié) C、 D、 E基因入手 ， 深入探討環(huán)境信號(hào) 、 細(xì)菌轉(zhuǎn)化過(guò)程與毒力表達(dá)的關(guān)系 ， 這是該項(xiàng)研究的特色和創(chuàng)新之處 。 年度研究計(jì)劃及預(yù)期研究結(jié)果 年度研究計(jì)劃： 按年度列出：研究?jī)?nèi)容及其階段目標(biāo)； 擬組織 的重要學(xué)術(shù)交流活動(dòng)、國(guó)際合作與交流計(jì)劃等。 4. 本研究完成后可提供一定數(shù)量的較高水平論文在國(guó)內(nèi)外發(fā)表 。 工作條件 包括已具備的實(shí)驗(yàn)條件，尚缺少的實(shí)驗(yàn)條件和 擬解決的途徑，包括利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和部門開(kāi) 放實(shí)驗(yàn)室的計(jì)劃與落實(shí)情況。 ” 選擇課題、確定主攻方向是科學(xué)研究中具 有戰(zhàn)略意義的首要問(wèn)題。 創(chuàng)新性原則：針對(duì)科學(xué)而言，沒(méi)有地域性。 效能性原則：社會(huì)效益、經(jīng)濟(jì)效益、應(yīng)用價(jià)值等。醫(yī)學(xué)課題屬此類。 選題的基本方法： A、同步選擇法：與科技發(fā)展前沿、主流同步； B、階段分析選擇法：根據(jù)學(xué)科發(fā)展不同階段； C、交叉點(diǎn)選擇法：不同學(xué)科的交叉點(diǎn)； D、移植選擇法：將某學(xué)科方法移植到另一學(xué)科； E、機(jī)遇線索捕捉法：偶然發(fā)現(xiàn)、思想火花等； F、經(jīng)驗(yàn)轉(zhuǎn)移選擇法：用解決某問(wèn)題的經(jīng)驗(yàn)去解決 另一問(wèn)題； G、適應(yīng)需要選擇法： H、缺點(diǎn)列舉選擇法： 謝 謝！
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