如何申請國家自然科學基金-預(yù)覽頁
【正文】 起腦膜炎、中耳炎、鼻竇炎和敗血癥等疾病。 尋找體內(nèi)新的毒力基因，揭示肺炎球菌致病機理，才能從根本上解決其感染的治療問題。 ( 撰寫方法：要 緊緊圍繞 本次申請項目的主題。綜合分析 后提出 目前尚未解決的問題 。 要特別注意的問題：必須對項目中所運用的技術(shù)方法的原理、流程及在實際應(yīng)用中可能出現(xiàn)的問題要十分清楚，絕不能是一種簡單的移植。已經(jīng)肯定環(huán)境信號控制著細菌毒力基因表達 [4]。 根據(jù)以上研究背景， 我們的研究思路為：采用插入失活的手段，分別使基因 C、 D、 E失活，從而構(gòu)建一系列感受態(tài)缺陷菌株。 注意事項 注意邏輯性和層次感，并隨時點題。 要注意參考國內(nèi)相關(guān)專業(yè)知名專家的論著。 研究內(nèi)容： 存在問題：內(nèi)容過多，一個研究周期難以完成； 內(nèi)容分散，不能集中闡明研究目標。 研究內(nèi)容 (一 )：通過 CDE的基因失活及體外轉(zhuǎn)化實驗得到感受態(tài)缺陷的 。（ cinA是 基因，與外源基因的同源重組有關(guān)，因此將熒光蛋白基因接于其后，熒光表達可報告感受態(tài)的發(fā)生）1) 將綠色熒光蛋白（ gfp）基因替代 pEVP3質(zhì)粒中的 LacZ基因，得到熒光報告質(zhì)粒。 1) 做體外轉(zhuǎn)化實驗 ， 驗證所構(gòu)建的菌株能被熒光表達報告感受態(tài)的發(fā)生 ， 且感受態(tài)缺陷菌不能發(fā)生轉(zhuǎn)化 。 2) 分別將感受態(tài)缺陷和非缺陷菌注射入 BALB/ct小鼠體內(nèi) ， 觀察二者感染小鼠的致死率是否不同 。 2）制備基因 C、 D、 E蛋白的抗體，做 western blot。 為達預(yù)期目標所必須掌握的關(guān)鍵技術(shù)或 研究手段。 技術(shù)路線 存在問題： 不清楚，不詳細。 可行性分析 理論分析 研究手段、方法分析 預(yù)實驗結(jié)果分析 所用特殊實驗材料（試劑）的分析 對所具備的實驗條件進行分析 對項目組成員搭配及其運用技術(shù)方法的能力分析 CP1250肺炎鏈球菌及質(zhì)粒 pEVP3由 Morrison教授贈送 ， 人肺癌上皮 A549細胞已從中科院上海細胞所購得 ， 流式細胞儀熒光記數(shù)測定在我校兒童醫(yī)院完成 ， PCR引物由北京賽北盛生物有限公司合成 。 本實驗室已掌握肺炎鏈球菌體外轉(zhuǎn)化的方法 ，而粘附及毒力實驗的方法已有多篇報道 。 跟蹤創(chuàng)新： ? 在前人工作基礎(chǔ)上補充、完善現(xiàn)有理論； ? 對原有技術(shù)、方法進行修改后產(chǎn)生 1＋ 1＞ 2的 效果。 本研究從缺失肺炎鏈球菌感受態(tài)形成的關(guān)健環(huán)節(jié) C、 D、 E基因入手 ， 深入探討環(huán)境信號 、 細菌轉(zhuǎn)化過程與毒力表達的關(guān)系 ， 這是該項研究的特色和創(chuàng)新之處 。 年度研究計劃及預(yù)期研究結(jié)果 年度研究計劃： 按年度列出：研究內(nèi)容及其階段目標； 擬組織 的重要學術(shù)交流活動、國際合作與交流計劃等。 4. 本研究完成后可提供一定數(shù)量的較高水平論文在國內(nèi)外發(fā)表 。 工作條件 包括已具備的實驗條件，尚缺少的實驗條件和 擬解決的途徑，包括利用國家重點實驗室和部門開 放實驗室的計劃與落實情況。 ” 選擇課題、確定主攻方向是科學研究中具 有戰(zhàn)略意義的首要問題。 創(chuàng)新性原則：針對科學而言，沒有地域性。 效能性原則：社會效益、經(jīng)濟效益、應(yīng)用價值等。醫(yī)學課題屬此類。 選題的基本方法： A、同步選擇法：與科技發(fā)展前沿、主流同步； B、階段分析選擇法：根據(jù)學科發(fā)展不同階段； C、交叉點選擇法：不同學科的交叉點； D、移植選擇法：將某學科方法移植到另一學科； E、機遇線索捕捉法：偶然發(fā)現(xiàn)、思想火花等； F、經(jīng)驗轉(zhuǎn)移選擇法：用解決某問題的經(jīng)驗去解決 另一問題； G、適應(yīng)需要選擇法： H、缺點列舉選擇法： 謝 謝！
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