【正文】 效能性原則：社會(huì)效益、經(jīng)濟(jì)效益、應(yīng)用價(jià)值等。 4. 本研究完成后可提供一定數(shù)量的較高水平論文在國(guó)內(nèi)外發(fā)表 。 本實(shí)驗(yàn)室已掌握肺炎鏈球菌體外轉(zhuǎn)化的方法 ，而粘附及毒力實(shí)驗(yàn)的方法已有多篇報(bào)道 。 2）制備基因 C、 D、 E蛋白的抗體，做 western blot。 研究?jī)?nèi)容 (一 )：通過(guò) CDE的基因失活及體外轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)得到感受態(tài)缺陷的 。 根據(jù)以上研究背景， 我們的研究思路為：采用插入失活的手段，分別使基因 C、 D、 E失活，從而構(gòu)建一系列感受態(tài)缺陷菌株。 ( 撰寫(xiě)方法：要 緊緊圍繞 本次申請(qǐng)項(xiàng)目的主題。我們可以從腫瘤組織中找到病毒的基因 ， 也可以發(fā)現(xiàn)某些病原體的 DNA在不同宿主之間的傳遞過(guò)程中發(fā)生著變異 ， 例如耐藥性在細(xì)菌中的傳播 ， 這都是 自然界中普遍存在的基因轉(zhuǎn)移現(xiàn)象 。 ⑤ 不具有高職的申請(qǐng)者申請(qǐng)及負(fù)責(zé)的在研面上項(xiàng) 目不超過(guò)一項(xiàng) 。 ⑥ 青年基金只能獲得一項(xiàng)資助。 而細(xì)菌基因的轉(zhuǎn)移包括結(jié)合（ conjugation） 、 轉(zhuǎn)導(dǎo) （ transduction） 、融合 （ fusion） 及轉(zhuǎn)化 （ transformation）四種方式 ， 我們這里所要討論的是轉(zhuǎn)化 。 從疾病切入， 簡(jiǎn)要論述 國(guó)內(nèi)外研究成果， 并引出當(dāng)前的熱點(diǎn)研究方向。通過(guò)體內(nèi)毒力實(shí)驗(yàn)及體外粘附實(shí)驗(yàn)比較其與野生菌株的致病能力，以確定自然條件下形成的感受態(tài)與細(xì)菌致病的關(guān)系。 C、 D、 E的中游 PCR引物，構(gòu)建含有 C、 D、 E中游基因序列的 pEVP3質(zhì)粒。 擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題： 存在問(wèn)題：未能抓住關(guān)鍵問(wèn)題或抓得不準(zhǔn)。 因此本研究的技術(shù)路線從理論上講是合理的 ， 而方法是成熟的 。 四、研究基礎(chǔ) 工作基礎(chǔ) 存在問(wèn)題： 內(nèi)容過(guò)簡(jiǎn)； 與申請(qǐng)項(xiàng)目無(wú)關(guān)。 三、科技人員如何選題 課題的概念： 為探索醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的某個(gè)具體的理 論、方法或技術(shù)問(wèn)題，根據(jù)假說(shuō)設(shè)計(jì)的旨在說(shuō)明三要 素（受試對(duì)象、施加因素、效應(yīng)結(jié)果）及其相互關(guān)系 并在一定時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)設(shè)計(jì)目標(biāo)的最基本的單元。 可行性原則：主要技術(shù)指標(biāo)實(shí)現(xiàn)的可能性。 3. 通過(guò)對(duì)感受態(tài)缺陷菌在小鼠體內(nèi)毒力的研究 ， 為進(jìn)一步尋找毒力因子以及研究轉(zhuǎn)化對(duì)肺炎鏈球菌的致病影響提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù) 。cinA為轉(zhuǎn)化相關(guān)基因 ， 因此用它為報(bào)告基因以確定肺炎鏈球菌在體內(nèi)是否發(fā)生感受態(tài) ， 已有構(gòu)建cinALacZ融合基因菌株的報(bào)道 。 1) 合成基因 C、 D、 E的探針 ， 做 northern blot。 確定研究目標(biāo)、內(nèi)容的依據(jù)： 回答一個(gè)科學(xué)問(wèn)題； 根據(jù)研究周期、資助強(qiáng)度來(lái)確定。而已 有文獻(xiàn)報(bào)道當(dāng) 進(jìn)入感受態(tài)后，可啟動(dòng)一些蛋白包括自溶素的表達(dá) [9]，而自溶素是 子 ,當(dāng)其被激活后可釋放細(xì)胞壁毒力因子和溶血素；最新研究發(fā)現(xiàn)，有三個(gè)可被感受態(tài)刺激蛋白（ Csp）誘導(dǎo)表達(dá)的蛋白基因變異時(shí)，肺炎鏈球菌的毒力減弱 [10]。 對(duì)國(guó)內(nèi)外現(xiàn)狀只是簡(jiǎn)單羅列，缺乏歸納分析， 缺乏邏輯性和針對(duì)性 總結(jié)與表達(dá)不夠 。 基因的轉(zhuǎn)移 ， 是基因重組最原始的方式 。 ④ 高職申請(qǐng)者當(dāng)年申請(qǐng)及承擔(dān)的在研面上項(xiàng)目累 計(jì)不超過(guò) 3項(xiàng) 。 同行評(píng)議（一審）： 由基金委各學(xué)科處組織實(shí)施。 什么叫做轉(zhuǎn)化呢？它是指細(xì)菌在一定狀態(tài)（感受態(tài) 指細(xì)菌能夠攝取外來(lái)游離或質(zhì)粒 DNA的一種狀態(tài)，它可以在實(shí)驗(yàn)室中誘導(dǎo)產(chǎn)生，也可發(fā)生于細(xì)菌自然生長(zhǎng)的某一階段）下攝取外來(lái) DNA的過(guò)程。 從研究方向展開(kāi)， 較詳細(xì)地分析 國(guó)內(nèi)外在 本方向的研究進(jìn)展，引出闡明疾病發(fā)病機(jī)理或發(fā)明 新的治療方法的 關(guān)鍵問(wèn)題 所在。 本研究從轉(zhuǎn)化過(guò)程中感受態(tài)的形成方面探討其對(duì)肺炎鏈球菌毒力影響， 意義在于 : 有關(guān)，而其形成與多種環(huán)境因素相關(guān)，因此本課題為從體內(nèi)研究環(huán)境因素對(duì)于肺炎鏈球菌致病性