如何申請國家自然科學(xué)基金(已改無錯(cuò)字)
2023-06-23 03:17:37 本頁面
【正文】 ) 合成基因 C、 D、 E的探針 ， 做 northern blot。 2）制備基因 C、 D、 E蛋白的抗體，做 western blot。 擬解決的關(guān)鍵問題： 存在問題：未能抓住關(guān)鍵問題或抓得不準(zhǔn)。 撰寫要求：找出關(guān)鍵問題，寫出解決辦法。 什么是關(guān)鍵問題 ？ 研究過程中對達(dá)預(yù)期目標(biāo)有重要影響的 某些研究內(nèi)容或因素。 為達(dá)預(yù)期目標(biāo)所必須掌握的關(guān)鍵技術(shù)或 研究手段。 研究方法 存在問題： 過于簡單：在實(shí)驗(yàn)方案中只有方法名稱而無具體步驟。 過于繁雜：大量羅列一些常規(guī)的實(shí)驗(yàn)方法。 撰寫要求： 以研究項(xiàng)目的需求為前提，盡量采用目前 最先進(jìn)的方法和手段，并將其操作步驟和關(guān)鍵環(huán)節(jié)體 現(xiàn)在技術(shù)路線當(dāng)中。 技術(shù)路線 存在問題： 不清楚，不詳細(xì)。 撰寫要求： 清晰、詳細(xì)、注意邏輯性。 撰寫方法： – 以時(shí)間順序?yàn)橹骶€設(shè)計(jì)技術(shù)路線 – 以研究內(nèi)容為主線設(shè)計(jì)技術(shù)路線 – 分大小標(biāo)題，突出邏輯關(guān)系。 – 詳細(xì)地寫清楚每個(gè)具體步驟。 可行性分析 理論分析 研究手段、方法分析 預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 所用特殊實(shí)驗(yàn)材料（試劑）的分析 對所具備的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行分析 對項(xiàng)目組成員搭配及其運(yùn)用技術(shù)方法的能力分析 CP1250肺炎鏈球菌及質(zhì)粒 pEVP3由 Morrison教授贈送 ， 人肺癌上皮 A549細(xì)胞已從中科院上海細(xì)胞所購得 ， 流式細(xì)胞儀熒光記數(shù)測定在我校兒童醫(yī)院完成 ， PCR引物由北京賽北盛生物有限公司合成 。 研究發(fā)現(xiàn)，肺炎鏈球菌在感受態(tài)產(chǎn)生后可使一些蛋白表達(dá)，其中包括自溶素，這表明其感受態(tài)的產(chǎn)生與細(xì)菌毒力的改變相關(guān)，因此研究轉(zhuǎn)化過程與細(xì)菌致病之間的關(guān)系是有事實(shí)基礎(chǔ)的。 目前的研究表明肺炎鏈球菌的感受態(tài)形成都受到操縱子 CDE的調(diào)控 ， 因此失活基因 C或D或 E可使菌株不能產(chǎn)生感受態(tài) ， 已有通過失活這幾種基因構(gòu)建感受態(tài)缺陷菌株的文獻(xiàn)報(bào)道 。cinA為轉(zhuǎn)化相關(guān)基因 ， 因此用它為報(bào)告基因以確定肺炎鏈球菌在體內(nèi)是否發(fā)生感受態(tài) ， 已有構(gòu)建cinALacZ融合基因菌株的報(bào)道 。 本實(shí)驗(yàn)室已掌握肺炎鏈球菌體外轉(zhuǎn)化的方法 ，而粘附及毒力實(shí)驗(yàn)的方法已有多篇報(bào)道 。 因此本研究的技術(shù)路線從理論上講是合理的 ， 而方法是成熟的 。 創(chuàng)新性 對創(chuàng)新的理解：創(chuàng)新性與先進(jìn)性是有根本區(qū)別的。 原始創(chuàng)新： ? 填補(bǔ)空白或修改傳統(tǒng)的理論； ? 新技術(shù)、新方法的發(fā)明創(chuàng)造。 跟蹤創(chuàng)新： ? 在前人工作基礎(chǔ)上補(bǔ)充、完善現(xiàn)有理論； ? 對原有技術(shù)、方法進(jìn)行修改后產(chǎn)生 1＋ 1＞ 2的 效果。 細(xì)菌在宿主體內(nèi)是處于一個(gè)生存競爭的戰(zhàn)場 ， 其是否致病取決于機(jī)體內(nèi)環(huán)境與細(xì)菌相互斗爭 、 相互適應(yīng)的結(jié)果 。 在體內(nèi)尋找細(xì)菌毒力因子的表達(dá)是目前研究病原菌致病機(jī)理的熱點(diǎn) 。 細(xì)菌致病機(jī)理已研究多年 ， 由環(huán)境信號誘導(dǎo)細(xì)菌感受態(tài)形成影響毒力表達(dá)的路線 ， 國外鮮見報(bào)道 。 本研究從缺失肺炎鏈球菌感受態(tài)形成的關(guān)健環(huán)節(jié) C、 D、 E基因入手 ， 深入探討環(huán)境信號 、 細(xì)菌轉(zhuǎn)化過程與毒力表達(dá)的關(guān)系 ， 這是該項(xiàng)研究的特色和創(chuàng)新之處 。 通過本項(xiàng)研究可完成： 1） 分析肺炎鏈球菌感受態(tài)的形成是否受到CDE操縱子調(diào)控 。 2） 感受態(tài)的形成是否可改變體內(nèi)肺炎鏈球菌毒力 ， 從而導(dǎo)致其致病能力的改變 。 本研究為進(jìn)一步尋找毒力基因 、 理解細(xì)菌的致病機(jī)理提供了理論依據(jù) ， 在研究思路上有所創(chuàng)新 。 年度研究計(jì)劃及預(yù)期研究結(jié)果 年度研究計(jì)劃： 按年度列出：研究內(nèi)容及其階段目標(biāo)； 擬組織 的重要學(xué)術(shù)交流活動、國際合作與交流計(jì)劃等。 預(yù)期研究結(jié)果： 理論成果：建立 /豐富 /補(bǔ)充 /填補(bǔ) ...... 技術(shù)方法：建立 /完善
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