如何申請(qǐng)國(guó)家自然科學(xué)基金-文庫(kù)吧
2025-04-21 03:17 本頁(yè)面
【正文】 定狀態(tài)（感受態(tài) 指細(xì)菌能夠攝取外來(lái)游離或質(zhì)粒 DNA的一種狀態(tài)，它可以在實(shí)驗(yàn)室中誘導(dǎo)產(chǎn)生，也可發(fā)生于細(xì)菌自然生長(zhǎng)的某一階段）下攝取外來(lái) DNA的過(guò)程。已發(fā)現(xiàn)有五種細(xì)菌可以在自然狀態(tài)下產(chǎn)生感受態(tài)而發(fā)生轉(zhuǎn)化： 肺炎鏈球菌 (， )、枯草桿菌（ ）、流感嗜血桿菌（ ）、血鏈球菌（ ）和淋病奈瑟氏菌（ ）， 其中肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化效率最高 ,轉(zhuǎn)化的結(jié)果是細(xì)菌的遺傳特征發(fā)生變化，表現(xiàn)出與親代不同的遺傳性狀。 1928年 Griffth發(fā)現(xiàn)了肺炎鏈球菌 (S. pneumoniae)莢膜轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象， 1944年 Arery等證實(shí)了轉(zhuǎn)化物的化學(xué)本質(zhì)是 DNA，證明生命的遺傳物質(zhì)是 DNA。 細(xì)菌轉(zhuǎn)化不僅是許多重要生命現(xiàn)象的起始和源頭，轉(zhuǎn)化機(jī)理的研究也一直是生命科學(xué)中一個(gè)非常重要的問(wèn)題。 本研究從肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化入手來(lái)探討其對(duì)細(xì)菌毒力表達(dá)的影響。 盡管肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化機(jī)制尚不十分清楚， 但其過(guò)程大致可分為 6個(gè)階段： 1）肺炎鏈球菌被誘導(dǎo)成為感受態(tài)； 2）外來(lái) DNA吸附于細(xì)菌壁上； 3）核酸酶與外來(lái) DNA結(jié)合； 4）核酸酶降解其中一條鏈，使之成為單鏈（ ssDNA）； 5） ssDNA被攝入細(xì)菌胞內(nèi) 6）進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的 ssDNA以同源重組的方式整合于肺炎鏈球菌的染色體上。 肺炎鏈球菌作為一種 自然界廣泛存在 的致病菌，肺炎鏈球菌可引起腦膜炎、中耳炎、鼻竇炎和敗血癥等疾病。 在 70年代，未經(jīng)治療肺炎球菌感染死亡率為 3035%[1]，經(jīng)幾十年的研究，其感染引起的菌血癥死亡率仍高達(dá) 2530%[2]?？股氐膽?yīng)用由于耐藥菌的迅速增加而越來(lái)越失去治療價(jià)值。而最新的肺炎鏈球菌多價(jià)結(jié)合疫苗的特異性和有效性遠(yuǎn)遠(yuǎn)未達(dá)到令人滿(mǎn)意的程度 [3]。 尋找體內(nèi)新的毒力基因，揭示肺炎球菌致病機(jī)理，才能從根本上解決其感染的治療問(wèn)題。 國(guó)內(nèi)外現(xiàn)狀分析（綜述） 存在問(wèn)題： 文獻(xiàn)復(fù)習(xí)不夠，對(duì)國(guó)內(nèi)外現(xiàn)狀缺乏真正了解， 提出的問(wèn)題別人已解決 低水平重復(fù) 。 對(duì)研究方法不熟悉，簡(jiǎn)單移植或夸大其作用， 缺乏實(shí)際應(yīng)用的可行性 無(wú)法實(shí)現(xiàn)預(yù)期目標(biāo) 。 對(duì)國(guó)內(nèi)外現(xiàn)狀只是簡(jiǎn)單羅列，缺乏歸納分析， 缺乏邏輯性和針對(duì)性 總結(jié)與表達(dá)不夠 。 ( 撰寫(xiě)方法：要 緊緊圍繞 本次申請(qǐng)項(xiàng)目的主題。 從疾病切入， 簡(jiǎn)要論述 國(guó)內(nèi)外研究成果， 并引出當(dāng)前的熱點(diǎn)研究方向。 從研究方向展開(kāi)， 較詳細(xì)地分析 國(guó)內(nèi)外在 本方向的研究進(jìn)展，引出闡明疾病發(fā)病機(jī)理或發(fā)明 新的治療方法的 關(guān)鍵問(wèn)題 所在。 圍繞關(guān)鍵問(wèn)題， 詳細(xì)論述 國(guó)內(nèi)外以往的研 究結(jié)果、當(dāng)前的現(xiàn)狀及今后的發(fā)展趨勢(shì)。綜合分析 后提出 目前尚未解決的問(wèn)題 。 對(duì)擬采用的技術(shù)方法進(jìn)行介紹和分析。 成熟的方法要簡(jiǎn)要介紹，重點(diǎn)闡明可以應(yīng)用于本研究的依據(jù)。 新方法要詳細(xì)介紹其原理，并闡明可以應(yīng)用于本研究的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 要特別注意的問(wèn)題：必須對(duì)項(xiàng)目中所運(yùn)用的技術(shù)方法的原理、流程及在實(shí)際應(yīng)用中可能出現(xiàn)的問(wèn)題要十分清楚，絕不能是一種簡(jiǎn)單的移植。 例如：蛋白質(zhì)的融合表達(dá)，理論上可以實(shí)現(xiàn)融合， 但存在“活性、表達(dá)載體選擇、純化”等問(wèn)題。 提出本項(xiàng)目的研究設(shè)想。 肺炎鏈球菌在正常情況下并不致病， 40%的健康人咽喉部都有寄生 [2]，其只是在一定條件下引起疾病，如病毒引起上呼吸道感染時(shí)、小兒高燒時(shí)常轉(zhuǎn)為肺炎。已經(jīng)肯定環(huán)境信號(hào)控制著細(xì)菌毒力基因表達(dá) [4]。 問(wèn)題是肺炎鏈球菌致病是否與環(huán)境因素誘導(dǎo)其感受態(tài)的形成和轉(zhuǎn)化有關(guān)？從我們目前掌握的資料來(lái)看，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)到類(lèi)似報(bào)道或想法。 目前對(duì)肺炎鏈球菌轉(zhuǎn)化機(jī)理的研究概況：操縱子 CDE為多種環(huán)境因素如 Ca2+、 O2濃度、生長(zhǎng)階段、細(xì)菌密度等調(diào)節(jié)其感受態(tài)發(fā)生的唯一共同調(diào)控點(diǎn) [5， 6， 7]，也是肺炎鏈球菌控制許多蛋白質(zhì)基因表達(dá)的開(kāi)關(guān) [8]。而已 有文獻(xiàn)報(bào)道當(dāng) 進(jìn)入感受態(tài)后，可啟動(dòng)一些蛋白包括自溶素的表達(dá) [9]，而自溶素是 子 ,當(dāng)其被激活后可釋放細(xì)胞壁毒力因子和溶血素；最新研究發(fā)現(xiàn)，有三個(gè)可被感受態(tài)刺激蛋白（ Csp）誘
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