如何申請國家自然科學基金-文庫吧
2025-04-21 03:17 本頁面
【正文】 定狀態(tài)（感受態(tài) 指細菌能夠攝取外來游離或質(zhì)粒 DNA的一種狀態(tài)，它可以在實驗室中誘導產(chǎn)生，也可發(fā)生于細菌自然生長的某一階段）下攝取外來 DNA的過程。已發(fā)現(xiàn)有五種細菌可以在自然狀態(tài)下產(chǎn)生感受態(tài)而發(fā)生轉(zhuǎn)化： 肺炎鏈球菌 (， )、枯草桿菌（ ）、流感嗜血桿菌（ ）、血鏈球菌（ ）和淋病奈瑟氏菌（ ）， 其中肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化效率最高 ,轉(zhuǎn)化的結(jié)果是細菌的遺傳特征發(fā)生變化，表現(xiàn)出與親代不同的遺傳性狀。 1928年 Griffth發(fā)現(xiàn)了肺炎鏈球菌 (S. pneumoniae)莢膜轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象， 1944年 Arery等證實了轉(zhuǎn)化物的化學本質(zhì)是 DNA，證明生命的遺傳物質(zhì)是 DNA。 細菌轉(zhuǎn)化不僅是許多重要生命現(xiàn)象的起始和源頭，轉(zhuǎn)化機理的研究也一直是生命科學中一個非常重要的問題。 本研究從肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化入手來探討其對細菌毒力表達的影響。 盡管肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化機制尚不十分清楚， 但其過程大致可分為 6個階段： 1）肺炎鏈球菌被誘導成為感受態(tài)； 2）外來 DNA吸附于細菌壁上； 3）核酸酶與外來 DNA結(jié)合； 4）核酸酶降解其中一條鏈，使之成為單鏈（ ssDNA）； 5） ssDNA被攝入細菌胞內(nèi) 6）進入細胞內(nèi)的 ssDNA以同源重組的方式整合于肺炎鏈球菌的染色體上。 肺炎鏈球菌作為一種 自然界廣泛存在 的致病菌，肺炎鏈球菌可引起腦膜炎、中耳炎、鼻竇炎和敗血癥等疾病。 在 70年代，未經(jīng)治療肺炎球菌感染死亡率為 3035%[1]，經(jīng)幾十年的研究，其感染引起的菌血癥死亡率仍高達 2530%[2]?？股氐膽糜捎谀退幘难杆僭黾佣絹碓绞ブ委焹r值。而最新的肺炎鏈球菌多價結(jié)合疫苗的特異性和有效性遠遠未達到令人滿意的程度 [3]。 尋找體內(nèi)新的毒力基因，揭示肺炎球菌致病機理，才能從根本上解決其感染的治療問題。 國內(nèi)外現(xiàn)狀分析（綜述） 存在問題： 文獻復習不夠，對國內(nèi)外現(xiàn)狀缺乏真正了解， 提出的問題別人已解決 低水平重復 。 對研究方法不熟悉，簡單移植或夸大其作用， 缺乏實際應用的可行性 無法實現(xiàn)預期目標 。 對國內(nèi)外現(xiàn)狀只是簡單羅列，缺乏歸納分析， 缺乏邏輯性和針對性 總結(jié)與表達不夠 。 ( 撰寫方法：要 緊緊圍繞 本次申請項目的主題。 從疾病切入， 簡要論述 國內(nèi)外研究成果， 并引出當前的熱點研究方向。 從研究方向展開， 較詳細地分析 國內(nèi)外在 本方向的研究進展，引出闡明疾病發(fā)病機理或發(fā)明 新的治療方法的 關鍵問題 所在。 圍繞關鍵問題， 詳細論述 國內(nèi)外以往的研 究結(jié)果、當前的現(xiàn)狀及今后的發(fā)展趨勢。綜合分析 后提出 目前尚未解決的問題 。 對擬采用的技術(shù)方法進行介紹和分析。 成熟的方法要簡要介紹，重點闡明可以應用于本研究的依據(jù)。 新方法要詳細介紹其原理，并闡明可以應用于本研究的理論依據(jù)和實驗依據(jù)。 要特別注意的問題：必須對項目中所運用的技術(shù)方法的原理、流程及在實際應用中可能出現(xiàn)的問題要十分清楚，絕不能是一種簡單的移植。 例如：蛋白質(zhì)的融合表達，理論上可以實現(xiàn)融合， 但存在“活性、表達載體選擇、純化”等問題。 提出本項目的研究設想。 肺炎鏈球菌在正常情況下并不致病， 40%的健康人咽喉部都有寄生 [2]，其只是在一定條件下引起疾病，如病毒引起上呼吸道感染時、小兒高燒時常轉(zhuǎn)為肺炎。已經(jīng)肯定環(huán)境信號控制著細菌毒力基因表達 [4]。 問題是肺炎鏈球菌致病是否與環(huán)境因素誘導其感受態(tài)的形成和轉(zhuǎn)化有關？從我們目前掌握的資料來看，國內(nèi)外尚未見到類似報道或想法。 目前對肺炎鏈球菌轉(zhuǎn)化機理的研究概況：操縱子 CDE為多種環(huán)境因素如 Ca2+、 O2濃度、生長階段、細菌密度等調(diào)節(jié)其感受態(tài)發(fā)生的唯一共同調(diào)控點 [5， 6， 7]，也是肺炎鏈球菌控制許多蛋白質(zhì)基因表達的開關 [8]。而已 有文獻報道當 進入感受態(tài)后，可啟動一些蛋白包括自溶素的表達 [9]，而自溶素是 子 ,當其被激活后可釋放細胞壁毒力因子和溶血素；最新研究發(fā)現(xiàn)，有三個可被感受態(tài)刺激蛋白（ Csp）誘
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