沉淀反應(yīng)與凝集反應(yīng)(編輯修改稿)
2025-06-15 20:20 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 勻一致的膠乳顆粒 ， 吸附抗體后 ， 當(dāng)遇到相應(yīng)抗原時 ， 則發(fā)生凝集 ， 單個膠乳顆粒在入射光波長之內(nèi) ，光線可透過 ， 當(dāng)兩個膠乳凝集時 ， 則使透過光減少 。 這種減少的程度與膠乳凝集成正比 ，與抗原量成正比 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 2. 操作步驟 1) 用稀釋液將待測抗原和抗原標準品稀釋 。 2) 將抗體致敏膠乳溶液和待測抗原 、 不同濃度的抗原標準品反應(yīng)一段時間 ， 測吸光度值 。 3) 以抗原標準品量為橫坐標 ， 吸光度值為縱坐標繪制標準曲線 ， 查出待測抗原量 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 3. 方法評價 敏感度高，試劑穩(wěn)定，因反應(yīng)液中無 PEC沉淀劑的影響，個體 IC對結(jié)果影響也小，所以結(jié)果穩(wěn)定、可靠，特異性好；不需特殊儀器設(shè)備，一般分光光度計、自動化生化分析儀或散射比濁儀均可使用。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 第二節(jié) 凝膠內(nèi)沉淀試驗 凝膠內(nèi)沉淀試驗 (gel phase precipitation)主要是指瓊脂糖擴散或稱凝膠擴散 (gel diffusion)。常用的凝膠有瓊脂 、 瓊脂糖 、 葡聚糖或聚丙稀酰胺凝膠等 。 根據(jù)實驗?zāi)康呐c方法不同 ，可將固相內(nèi)沉淀驗分為 3類： ① 雙相瓊脂擴散試驗 (double gel diffusion test)， ② 單相瓊脂擴散試驗 (single gel diffusion test)， ③ 凝膠免疫電泳 (gel immunoelectrophoresis)。 這是一項凝膠內(nèi)電泳加擴散技術(shù) ， 專門一章介紹 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 一、單相瓊脂擴散試驗 (一 ) 原理 將一定量的抗體混入瓊脂凝膠中 ， 使待測的抗原物質(zhì)在凝膠中自由擴散 ， 與抗體結(jié)合形成沉淀環(huán) ， 沉淀環(huán)的大小與抗原濃度呈正相關(guān) 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 (二 ) 操作步驟 1. 將抗體和 %瓊脂糖 50~56℃ 混合 ， 即刻傾注成平板 。 2. 待凝固后在瓊脂板上打孔 ， 孔中加入已稀釋的抗原溶液和不同濃度的抗原標準品溶液 。 3. 置 37℃ ， 讓其向四周自由擴散 ， 24~48h后可見其孔周圍出現(xiàn)沉淀環(huán) 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 單向免疫擴散試驗示意圖 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 沉淀環(huán)的直徑與待檢標本內(nèi)含量不是直線關(guān)系 ， 有兩種計算方法： (1) Mancini曲線：適用于大分子抗原 ， 擴散時間 48h， 使用普通坐標紙作圖 ， 擴散環(huán)直徑平方和濃度呈線性關(guān)系 。 (2) Fehcy曲線：適用于分子抗原 ， 擴散時間較短 ， 使用半對數(shù)坐標紙作圖 ， 抗原量的對數(shù)和擴散圈直徑之間呈線性關(guān)系 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 雙免疫擴散試驗 （ double immunodiffusion） 雙向免疫擴散試驗是在瓊脂板上按一定距離打數(shù)個小孔，在相鄰的兩孔內(nèi)分別放入抗原和抗體材料。當(dāng)抗原和抗體向四周凝膠中擴散，在兩孔間可出現(xiàn) 2～ 3條沉淀線，本法常用于抗原或抗體的定性或定量檢測，或用于兩種抗原材料的抗原相關(guān)性分析。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 雙向免疫擴散試驗示意圖 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 第三節(jié) 免疫電泳技術(shù) 免疫電泳技術(shù)是電泳分析與沉淀反應(yīng)的結(jié)合產(chǎn)物。這種技術(shù)有兩大優(yōu)點，一是加快了沉淀反應(yīng)的速度，二是將某些蛋白組分利用其帶電荷的不同而將其分開，再分別與抗體反應(yīng)，以此作更細微的分析。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 免疫電泳包括 : 免疫電泳 對流免疫電泳 火箭電泳 免疫印跡等 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 一）、免疫電泳 免疫電泳為區(qū)帶電泳與免疫雙向擴散的結(jié)合。方法是先將樣品加入瓊脂中利用區(qū)帶電泳技術(shù)將抗原各成分依電泳速度不同而分散開。然后在適當(dāng)?shù)奈恢蒙涎仉娪痉较蛲谝恢本€形槽，于槽內(nèi)加入含有針對各種抗原混合抗體液，讓各抗原成分與相應(yīng)抗體進行雙向免疫擴散，可形成多條弧形沉淀線。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 常用此法進行血清的蛋白種類分析。對于免疫球蛋白
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