沉淀反應(yīng)與凝集反應(yīng)-預(yù)覽頁
【正文】 的沉淀反應(yīng) 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 第一節(jié) 液體內(nèi)沉淀試驗(yàn) 根據(jù)沉淀現(xiàn)象的不同，液體內(nèi)沉淀又可分為三類： 絮狀沉淀 環(huán)狀沉淀 免疫濁度沉淀 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 一、絮狀沉淀試驗(yàn) 絮狀沉淀試驗(yàn)是一項(xiàng)經(jīng)典實(shí)驗(yàn)技術(shù) 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) (二 ) 操作步驟 1. 抗原稀釋法 (1) 將可溶性抗原作一系列倍比稀釋 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 2. 抗體稀釋法 本法采用抗原量恒定與不同倍比稀釋度的抗體反應(yīng) ， 出現(xiàn)沉淀物最多的管為抗體最適比例管 。 用非常簡便的技術(shù)了解待測血清內(nèi)是否存在某種抗原或抗體 。 2. 將抗原溶液沿管壁緩緩疊加于抗血清液面上，形成清晰的交界面。故用于鑒定血跡和診斷炭疽 (Ascoli試驗(yàn) )。 70年代以來 ， 根據(jù)抗原和抗體所在液相內(nèi)快速結(jié)合并產(chǎn)生濁度的原理 ， 建立了免疫比濁法 。 用抗原標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線 ， 可測出待檢抗原含量 。 從標(biāo)準(zhǔn)曲線可得待檢抗原量 。 又可分為速率散射比濁法 (rate nephelometry)和終點(diǎn)散射比濁法 (endpoint nephelometry)。峰值的高低在抗體過量情況下與抗原的量成正比 。 2) 將稀釋待檢抗原和不同濃度抗原標(biāo)準(zhǔn)品加至試管內(nèi) ， 再加入一定量抗體 ， 立即比濁 ， 記錄速率單位 (RU)。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 2. 終點(diǎn)散射比濁法 (1) 原理： 讓抗原抗體作用一定時(shí)間 ， 使其反應(yīng)達(dá)到平衡后 ， 測定其復(fù)合物的量 。 3) 以抗原標(biāo)準(zhǔn)品量為橫坐標(biāo) ， 濁度值為縱坐標(biāo) ，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 2. 操作步驟 1) 用稀釋液將待測抗原和抗原標(biāo)準(zhǔn)品稀釋 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 第二節(jié) 凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn) 凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn) (gel phase precipitation)主要是指瓊脂糖擴(kuò)散或稱凝膠擴(kuò)散 (gel diffusion)。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 一、單相瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) (一 ) 原理 將一定量的抗體混入瓊脂凝膠中 ， 使待測的抗原物質(zhì)在凝膠中自由擴(kuò)散 ， 與抗體結(jié)合形成沉淀環(huán) ， 沉淀環(huán)的大小與抗原濃度呈正相關(guān) 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)示意圖 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 沉淀環(huán)的直徑與待檢標(biāo)本內(nèi)含量不是直線關(guān)系 ， 有兩種計(jì)算方法： (1) Mancini曲線：適用于大分子抗原 ， 擴(kuò)散時(shí)間 48h， 使用普通坐標(biāo)紙作圖 ， 擴(kuò)散環(huán)直徑平方和濃度呈線性關(guān)系 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)示意圖 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 第三節(jié) 免疫電泳技術(shù) 免疫電泳技術(shù)是電泳分析與沉淀反應(yīng)的結(jié)合產(chǎn)物。然后在適當(dāng)?shù)奈恢蒙涎仉娪痉较蛲谝恢本€形槽，于槽內(nèi)加入含有針對(duì)各種抗原混合抗體液，讓各抗原成分與相應(yīng)抗體進(jìn)行雙向免疫擴(kuò)散，可形成多條弧形沉淀線。只需 1小時(shí)左右即可觀察結(jié)果。隨著泳動(dòng)抗原的減少，沉淀逐漸減少，形成峰狀的沉淀區(qū)，狀似火箭。 1900年， Landsteriner在特異性血凝現(xiàn)象的 基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)了人 ABO血型，并于1930年獲得了諾貝爾獎(jiǎng)。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 玻片法： ABO血型的鑒定 試管法： 肥達(dá)試驗(yàn)（ Widal test） 傷寒 外斐試驗(yàn)（ WeilFelix test） 立克次體 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 二）間接凝集反應(yīng) 將可溶性抗原（或抗體）先吸附于適當(dāng)大小的顆粒性載體的表面，然后與相應(yīng)抗體（或抗原）作用，在適宜的電解質(zhì)存在的條 件下，出現(xiàn)特異性凝集現(xiàn)象，稱間接凝集反應(yīng)（ indirectagglutination）或被動(dòng)凝集反應(yīng)（ passiveagglutination）。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 在間接凝集反應(yīng)中，可用作載體的顆粒種類 很多，常用的有動(dòng)物或人紅細(xì)胞、細(xì)菌和多 種惰性顆粒如聚苯乙烯
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