王鏡巖生化課件06核酸(編輯修改稿)
2025-06-15 08:35 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 rRNA 轉(zhuǎn)運(yùn) RNA： tRNA 信使 RNA： mRNA 核內(nèi)小 RNA： snRNA （ small nuclear RNA ） P344 表 57 大腸桿菌中的 RNA 三 、 tRNA的結(jié)構(gòu) ① 7090b， 分子量在 25kd左右 ， 沉降系數(shù) 4S左右 ② 有較多稀有堿基 圖 ③ 3’末端為 … CpCpAOH， 用來(lái)接受活化的氨基酸 ， 此末端稱接受末端 。 ④ 5’末端大多為 pG… 或 pC… ⑤ 二級(jí)結(jié)構(gòu)是三葉草形 P496 圖 4618 tRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)（三葉草模型） 四 、 mRNA的結(jié)構(gòu) 真核 mRNA的結(jié)構(gòu) （ 1） 、 3’端有一段約 30300核苷酸的 polyA。 PolyA是 mRNA由核進(jìn)入胞質(zhì)所必需的形式 。 PolyA大大提高 mRNA在胞質(zhì)中的穩(wěn)定性 。 polyA與mRNA半壽期有關(guān) ， 新合成的 mRNA， 其 polyA較長(zhǎng)；而衰老的 mRNA， 其 polyA較短 。 （ 2） 、 5’帽子 P346 帽子結(jié)構(gòu)： 帽子結(jié)構(gòu)： 3’mG5’ppp5’Nm3’P 5’末端的鳥(niǎo)嘌呤 N7被甲基化 ， 鳥(niǎo)嘌呤核苷酸經(jīng)焦磷酸與相鄰的一個(gè)核苷酸相連 ， 形成 5’5’磷酸二酯鍵 。 帽子的功能： ★ 可抵抗 5’核酸外切酶降解 mRNA。 ★ 可為核糖體提供識(shí)別位點(diǎn)，使 mRNA很快與核糖體結(jié)合，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成起始復(fù)合物的形成。 原核 mRNA的結(jié)構(gòu) （ 多順?lè)醋?） 由先導(dǎo)區(qū) 、 插入序列 、 翻譯區(qū)和末端序列組成 。 沒(méi)有5’帽子和 3’polyA。 SD序列： 5’端先導(dǎo)區(qū)中 ， 有一段富含嘌呤的堿基序列 ，典型的為 5’AGGAGGU3’， 位于起始密碼子 AUG前約 10核苷酸處 ， 此序列由 Shine和 Dalgarno發(fā)現(xiàn) ，稱 SD序列 。 SD序列和核糖體 16S的 rRNA的 3’末端富含嘧啶堿基的序列互補(bǔ) 。 六 、 rRNA的結(jié)構(gòu) rRNA與核糖體蛋白結(jié)合一起構(gòu)成核糖體 。 大腸桿菌中有三類 rRNA： 5S rRNA， 16S rRNA， 23S rRNA 真核細(xì)胞有四類 rRNA： 5S rRNA， rRNA， 8SrRNA 28S rRNA P346 圖 514 大腸桿菌 5S rRNA 結(jié)構(gòu) 第四節(jié) 核酸的性質(zhì) 一 、 解離性質(zhì) 磷酸和堿基能發(fā)生兩性解離 。 DNA等電點(diǎn) 4— RNA 等電點(diǎn) 2— 二 、 水解性質(zhì) 堿水解 室溫 ， ， 得到 2’或3’磷酸核苷的混合物 。 圖 在相同條件下 ， DNA不被水解 。 這是因?yàn)?RNA中C’2OH的存在 ， 促進(jìn)了磷酸酯鍵的水解 。 DNA、 RNA水解難易程度的不同具有極為重要的生理意義： DNA穩(wěn)定 ， 遺傳信息 。 RNA是 DNA的信使 ， 完成任務(wù)后迅速降解 。 酶水解 RNA水解酶 RNase DNA水解酶 DNase 核酸外切酶 核酸內(nèi)切酶 ：限制性核酸內(nèi)切酶 三 、 光吸收性 堿基 、 核苷 、 核苷酸和核酸在 240~290nm的紫外波段有強(qiáng)烈的光吸收 ， λmax=260nm 鑒定純度 純 DNA的 A260/A280應(yīng)為 （ ） ， 若大于 ，表示污染了 RNA。 純 RNA的 A260/A280應(yīng)為 。 若溶液中含有雜蛋白或苯酚 ， 則 A260/A280比值明顯降低 。 含量計(jì)算 1 ABS值相當(dāng)于： 50ug/mL雙螺旋 DNA 或： 40ug/mL單鏈 DNA（ 或 RNA） 或： 20ug/mL核苷酸 增色效應(yīng)與減色效應(yīng) P347 圖 515 DNA的紫外吸收光譜 增色效應(yīng)：在 DNA的變性過(guò)程中 ， 摩爾吸光系數(shù)增大 減色效應(yīng)：在 DNA的復(fù)性過(guò)程中 ， 摩爾吸光系數(shù)減小 。 四 、 沉降特性 （ DNA） 不同構(gòu)象的核酸 （ 線形 、 環(huán)形 、 超螺旋 ） ， 密度和沉降速率不同 ， 用 CsCl密度梯度離心就可以將它們區(qū)分開(kāi)來(lái) ， 這一方法常用于質(zhì)粒 DNA的純化 。 P348 圖 5— 16 CsCl密度梯度離心純化質(zhì)粒 DNA 相對(duì)沉降常數(shù) 線型雙螺旋分子 松馳雙鏈閉環(huán) 切刻雙鏈環(huán) 單鏈環(huán)
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