【文章內(nèi)容簡介】 /2混合型試劑進(jìn)行檢測，如果呈陰性反應(yīng)，則報告hiv抗體陰性；如果呈陽性反應(yīng)，則報告hiv1抗體陽性；如果不滿足陽性標(biāo)準(zhǔn)，則判為hiv抗體檢測結(jié)果不確定。如果出現(xiàn)hiv2型的特異性指示條帶，需用hiv2型免疫印跡試劑再做hiv2的抗體確認(rèn)試驗(yàn)，呈陰性反應(yīng)，報告hiv2抗體陰性；呈陽性反應(yīng)則報告hiv2抗體血清學(xué)陽性，并將樣品送國家參比實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行核酸序列分析，wb的敏感性一般不低于初篩實(shí)驗(yàn)，但它的特異性很高，這主要是基于hiv不同抗原組分的分離以及濃縮和純化，能夠檢測針對不同抗原成分的抗體，因而能夠用wb方法鑒別初篩實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。從wb確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果看出，初篩試驗(yàn)盡管選擇質(zhì)量較好的試劑，如第三代elisa，仍會有假陽性出現(xiàn)，必須通過確認(rèn)試驗(yàn)才能得出準(zhǔn)確結(jié)果。（二）免疫熒光實(shí)驗(yàn)（ifa）ifa法經(jīng)濟(jì)、簡便、快速，曾被fda推薦用于wb不確定樣品的診斷。但需要昂貴的熒光顯微鏡，需要受過良好訓(xùn)練的技術(shù)人員、觀察和解釋結(jié)果易受主觀因素的影響，結(jié)果不宜長期保存，ifa不宜在一般的實(shí)驗(yàn)室開展和應(yīng)用。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試臨檢基礎(chǔ)知識輔導(dǎo)：重視血常規(guī)的復(fù)檢工作目前血細(xì)胞分析儀己經(jīng)普及到縣醫(yī)院或衛(wèi)生院，這對提高血細(xì)胞常規(guī)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，減輕工作人員勞動強(qiáng)度起促進(jìn)作用。但是我們應(yīng)該認(rèn)識到血細(xì)胞分析儀還是一個過篩工具，至今最先進(jìn)的全自動血細(xì)胞分析儀還不能完全取代人工檢查，仍然有部分標(biāo)本需要復(fù)檢。據(jù)我所知有的醫(yī)院有了血細(xì)胞分析儀，把人工操作的工具、試劑全丟棄，基本上不再復(fù)檢了。有的單位即使復(fù)檢，也沒有復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)，隨心所欲，其復(fù)檢率只有百分之幾，這顯然是不負(fù)責(zé)任的?，F(xiàn)就此問題談?wù)剛€人看法。一、為什么要復(fù)檢？考試用書 血細(xì)胞分析儀測定原理雖有不同，但它的各種項(xiàng)目的閾值是人設(shè)定的，而且是固定的，可是病人血細(xì)胞變化是千姿百態(tài)，有部分細(xì)胞難以識別或認(rèn)錯干擾其它細(xì)胞計(jì)數(shù)，如有核紅細(xì)胞可影響白細(xì)胞計(jì)數(shù)；細(xì)胞碎片、血小板聚集可影響血小板計(jì)數(shù)等。尤其是白細(xì)胞形態(tài)學(xué)分類與血細(xì)胞分析儀的白細(xì)胞分類有本質(zhì)上的不同，三分群僅僅是根據(jù)細(xì)胞大小來分而己，即使先進(jìn)的五分類也與形態(tài)學(xué)也有很大差異，又如中性粒細(xì)胞毒性病變、變異淋巴細(xì)胞、瘧原蟲等臨床需要的指標(biāo)無法顯示；有的幼稚細(xì)胞、有核紅細(xì)胞也不能區(qū)分；各參數(shù)之間有時還存在互相干擾?？傊?xì)胞分析儀的結(jié)果僅僅是屬于過篩而己，不能完全代替人工鏡檢。根據(jù)1987年我赴日本考察時，日本對三分群儀器白細(xì)胞分類是不收費(fèi)的，而且每一例仍然需要涂片染色，在顯微鏡下重新分類后才能報告。1989年coulter公司制定了復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)，調(diào)查了11個床位及性質(zhì)不同的醫(yī)療單位，它們均使用該公司的三分群血細(xì)胞分析儀，根據(jù)該公司的復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)，其復(fù)檢率為15%～60%，平均為40%，使手工分類減少40～85%，平均減少了60%，也就是說用節(jié)省下來的時間好好為40%需要分類的病人服務(wù)。最近日本名古屋大學(xué)醫(yī)學(xué)部附屬醫(yī)院報告，他們用sysmexxe2100（五分類）%.再次證明當(dāng)前最先進(jìn)血細(xì)胞分析儀也不能完全替代人工檢查。由于沒有復(fù)檢而產(chǎn)生的漏檢白血病、異常淋巴細(xì)胞、瘧原蟲，還有edta依賴性血小板假性降低等己引起的醫(yī)療糾紛，應(yīng)該引起我們深思。二、復(fù)檢內(nèi)涵尚待統(tǒng)一有人認(rèn)為“復(fù)檢”就是要在鏡下重新進(jìn)行白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)而己，這是偏面的。復(fù)檢內(nèi)涵應(yīng)包據(jù)：對血細(xì)胞分析儀測定的全部結(jié)果進(jìn)行評估，必要時包括原標(biāo)本重查，或重新用人工復(fù)查等。因此血常規(guī)手工操作不能丟；2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試臨檢基礎(chǔ)知識輔導(dǎo)：精液檢查的具備條件受檢者，經(jīng)歷一段經(jīng)常排精過程后，禁房事5－7天（上次排精到取標(biāo)本間隔時間至少不得少于100小時）；備大口有蓋清潔干燥容器一個，以手淫方式獲取精液，一次全部射入容器，蓋上蓋，記錄標(biāo)本離體時間；貼身保溫，30分鐘內(nèi)送到化驗(yàn)室，并向檢驗(yàn)員提供標(biāo)本取出時間。精液常規(guī)觀察：精液總?cè)萘浚ê辽?，精子活動情況，精子密度（個/毫升），精液液化時間（標(biāo)本取出到精液液化的時間），不動精子（個/高倍視野）等。見不動精子，須染色方可區(qū)分：不活動的精子、死精子、未成熟精子等。找不到精子必須離心后檢驗(yàn)，仍然找不到精子；方可報告無精。經(jīng)三次取樣化驗(yàn)，結(jié)果仍然找不到精子方可確認(rèn)無精子癥。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試免疫檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血漿的鑒別方法血漿是血液的液體成分，血細(xì)胞懸濁于其中。人體含有27503300毫升血漿，約占血液總體積的55%.血漿的絕大部分是水（體積的90%），其中溶解的物質(zhì)主要是血漿蛋白，還包括葡萄糖、無機(jī)鹽離子、激素以及二氧化碳。血漿的主要功能是運(yùn)載血細(xì)胞，同時也是運(yùn)輸分泌產(chǎn)物的主要媒介。將新鮮血液離心，使血細(xì)胞沉降，上層淡黃色清液即是血漿。血漿與血清的區(qū)別是血清中不含纖維蛋白原等凝血因子。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試免疫檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血漿的主要作用提供基本營養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細(xì)胞生長必須的物質(zhì)。提供激素和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素（氫化可的松、地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長因子如成纖維細(xì)胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過程中起重要作用。提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷。對培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用：有一些細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，現(xiàn)在則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因?yàn)橐鹊鞍酌敢呀?jīng)被廣泛用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時，粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子，他們在代謝解毒中起重要作用，如seo3，硒等。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：離心技術(shù)的工具離心機(jī)（centrifuge）是實(shí)施離心技術(shù)的裝置。離心機(jī)的種類很多，按照使用目的，可兩類，即制備型離心機(jī)和分析型離心機(jī)。前者主要用于分離生物材料，每次分離樣品的容量比較大，后者則主要用于研究純品大分子物質(zhì)，包括某些顆粒體如核蛋白體等物質(zhì)的性質(zhì)，每次分析的樣品容量很小，根據(jù)待測物質(zhì)在離心場中的行為（可用離心機(jī)中的光學(xué)系統(tǒng)連續(xù)地監(jiān)測），能推斷其純度、形狀和相對分子質(zhì)量等性質(zhì)。兩類離心機(jī)由于用途不同，故其主要結(jié)構(gòu)也有差異。通常所使用的離心機(jī)根據(jù)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速大小的不同可分為普通離心機(jī)、高速離心機(jī)和超速離心機(jī)三類2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：離心技術(shù)的概況離心技術(shù)是利用物體高速旋轉(zhuǎn)時產(chǎn)生強(qiáng)大的離心力，使置于旋轉(zhuǎn)體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達(dá)到濃縮或與其他顆粒分離之目的。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細(xì)胞、細(xì)胞器、病毒和生物大分子等。離心機(jī)轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)時，當(dāng)懸浮顆粒密度大于周圍介質(zhì)密度時，顆粒離開軸心方向移動，發(fā)生沉降；如果顆粒密度低于周圍介質(zhì)的密度時，則顆粒朝向軸心方向移動而發(fā)生漂浮。常用的離心機(jī)有多種類型，一般低速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速不超過6000rpm，高速離心機(jī)在25000rpm以下，超速離心機(jī)的最高速度達(dá)30000rpm以上。根據(jù)離心原理，可設(shè)計(jì)多種離心方法，常見下列三大類型：。通過逐步增加相對離心力，使一個非均相混合液內(nèi)形狀不同的大小顆粒分步沉淀。離心前，離心管內(nèi)先裝入分離介質(zhì)（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質(zhì)，然后加入樣品進(jìn)行離心，具體又可分為：1）速度區(qū)帶離心法。離心前，離心管內(nèi)先裝入蔗糖、甘油、cscl、percoll等密度梯度介質(zhì)，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內(nèi)，達(dá)到彼此分離的目的。本法可分離各種細(xì)胞、病毒、染色體、脂蛋白、dna和rna等生物樣品。2）預(yù)制梯度等密度離心法。要求在離心前預(yù)先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質(zhì)，常用介質(zhì)有蔗糖、cscl、cs2so4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調(diào)節(jié)樣品液密度。離心后，不同密度的樣品顆粒到達(dá)與自身密度相等的梯度層，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。3）自成梯度等密度離心法。某些密度介質(zhì)經(jīng)過離心后會自成梯度，例percoll，可迅速形成梯度，cscl、cs2so4和三碘甲酰葡萄糖胺經(jīng)長時間離心后也可產(chǎn)生穩(wěn)定的梯度。需要離心分離的樣品可和梯度介質(zhì)先均勻混合，離心開始后，梯度介質(zhì)由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時，可以帶動原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達(dá)與其自身密度相等的梯度層里，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。根據(jù)被分離物質(zhì)的浮力密度差別進(jìn)行分離，所用的介質(zhì)起始密度約等于被分離物質(zhì)的密度，介質(zhì)在離心過程中形成密度梯度，被分離物質(zhì)沉降或上浮到達(dá)與之密度相等的介質(zhì)區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：離心技術(shù)的概況離心技術(shù)是利用物體高速旋轉(zhuǎn)時產(chǎn)生強(qiáng)大的離心力，使置于旋轉(zhuǎn)體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達(dá)到濃縮或與其他顆粒分離之目的。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細(xì)胞、細(xì)胞器、病毒和生物大分子等。離心機(jī)轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)時，當(dāng)懸浮顆粒密度大于周圍介質(zhì)密度時，顆粒離開軸心方向移動，發(fā)生沉降；如果顆粒密度低于周圍介質(zhì)的密度時，則顆粒朝向軸心方向移動而發(fā)生漂浮。常用的離心機(jī)有多種類型，一般低速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速不超過6000rpm，高速離心機(jī)在25000rpm以下，超速離心機(jī)的最高速度達(dá)30000rpm以上。根據(jù)離心原理，可設(shè)計(jì)多種離心方法，常見下列三大類型：。通過逐步增加相對離心力，使一個非均相混合液內(nèi)形狀不同的大小顆粒分步沉淀。離心前，離心管內(nèi)先裝入分離介質(zhì)（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質(zhì)，然后加入樣品進(jìn)行離心，具體又可分為：1）速度區(qū)帶離心法。離心前，離心管內(nèi)先裝入蔗糖、甘油、cscl、percoll等密度梯度介質(zhì)，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內(nèi)，達(dá)到彼此分離的目的。本法可分離各種細(xì)胞、病毒、染色體、脂蛋白、dna和rna等生物樣品。2）預(yù)制梯度等密度離心法。要求在離心前預(yù)先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質(zhì)，常用介質(zhì)有蔗糖、cscl、cs2so4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調(diào)節(jié)樣品液密度。離心后，不同密度的樣品顆粒到達(dá)與自身密度相等的梯度層，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。3）自成梯度等密度離心法。某些密度介質(zhì)經(jīng)過離心后會自成梯度，例percoll，可迅速形成梯度，cscl、cs2so4和三碘甲酰葡萄糖胺經(jīng)長時間離心后也可產(chǎn)生穩(wěn)定的梯度。需要離心分離的樣品可和梯度介質(zhì)先均勻混合，離心開始后，梯度介質(zhì)由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時，可以帶動原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達(dá)與其自身密度相等的梯度層里，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。根據(jù)被分離物質(zhì)的浮力密度差別進(jìn)行分離，所用的介質(zhì)起始密度約等于被分離物質(zhì)的密度，介質(zhì)在離心過程中形成密度梯度，被分離物質(zhì)沉降或上浮到達(dá)與之密度相等的介質(zhì)區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：動脈血?dú)鈽?biāo)本采集方法一、抗凝劑的配制首先推薦使用市場上有售的專用采血針，愿意自己配制抗凝采血針的用戶，%ns50ml+肝素鈉針劑2支（12500u）配制成肝素稀釋液備用，并做好無菌儲藏。每抽血?dú)馇?，?ml注射器抽取肝素稀釋液2ml，完全濕潤整個針管后棄去肝素液，殘留在針頭及針管頭部死腔內(nèi)的肝素液即可起到抗凝作用?？鼓齽┥倭藭寡耗氯?dú)夥治鰞x的流路系統(tǒng)，抗凝劑多了會影響血?dú)夂碗x子的檢測結(jié)果，大劑量的抗凝劑會嚴(yán)重使離子鈣偏低，誤導(dǎo)臨床。二、采血方法的選擇成人：用肝素化的玻璃注射器或一次性注射器穿刺，采血部位首選橈動脈，次選股動脈小兒：首選用顳淺動脈或頭皮小動脈，嚴(yán)格消毒后，用肝素化的5號頭皮針連接2ml注射器，待動脈血流至注射器乳頭時，立即用小止血鉗分別夾住頭皮針?biāo)芰宪浌苁孜矁啥耍ǎ?，然后拔出針頭立即混勻送檢。用肝素化的注射器穿刺，采血部位首選小兒橈動脈，小嬰兒可用顳淺動脈取血，取完血一定要密封。因技術(shù)條件限制，不能反復(fù)動脈穿刺時，早產(chǎn)兒與小嬰兒可在足后跟用肝素化毛細(xì)管采取動脈化毛細(xì)血管的血亦可。動脈化毛細(xì)血管采血，用不超過42～45℃的濕巾熱敷采血部位皮膚5～15分鐘，使血液增加，血流加速，達(dá)到動脈化，然后穿刺，穿刺要深，使血流快速自動流出，棄去第一滴血，不能擠壓，用肝素化的毛細(xì)管吸取（建議采用廠家配套提供的專用毛細(xì)管），吸滿后一定要密封，混勻后立即送檢。未充分動脈化的毛細(xì)管血的po2偏低，對ph、pco2和hco3—的測定結(jié)果影響不明顯。三、采血后處理采血后針尖或毛細(xì)吸血管兩端立即用橡皮帽或橡皮泥封住，防止空氣氣泡進(jìn)入，并立即充分混勻達(dá)到抗凝目的，并立即送檢，從采血到送檢不宜超過20分鐘，以免血細(xì)胞代謝耗氧，使po2和ph值下降pco2升高。若不能立即測定，應(yīng)將血?dú)鈽?biāo)本保存在2～8℃容器內(nèi)，但即使這樣待測時間也不宜超過2小時。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：vc影響血糖尿糖檢測解放軍總醫(yī)院檢驗(yàn)中心主任叢玉隆指出