20xx直腸黏膜修復(fù)敷料生物學(xué)評(píng)價(jià)研究(編輯修改稿)
2025-01-17 01:24 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ，方法同①，貼敷6h。24h后剔除激發(fā)部位及周圍被毛，溫水洗凈擦干，脫毛后至少2h，按表1對(duì)試驗(yàn)部位評(píng)分，并于48h再次評(píng)分。見(jiàn)表1。（MTT法）[3,5,6]試驗(yàn)樣品及試液的制備：①供試液：?C浸提24h后2000r/min離心3min，取上清。②陰性對(duì)照液：取高密度聚乙烯（厚度為1mm）36cm2，剪成5mm25mm的小塊，加12mL細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)液，37?C浸提24h，過(guò)濾除菌。③陽(yáng)性對(duì)照液：5g/L苯酚溶液，過(guò)濾除菌，現(xiàn)用現(xiàn)配。④空白對(duì)照液：同細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)液。方法：取6塊96孔培養(yǎng)板，每板各設(shè)6孔，每孔接種100μL處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期狀態(tài)良好的L929細(xì)胞混懸液，密度為1104個(gè)/mL。置5%CO2培養(yǎng)箱37?C培養(yǎng)24h后，棄去原生長(zhǎng)培養(yǎng)液。13板各加100μL供試液，作為供試品組；4板加100μL空白對(duì)照液，作為空白對(duì)照組；5板加100μL的陽(yáng)性對(duì)照液，作為陽(yáng)性對(duì)照組，6板加100μL的陰性對(duì)照液，作為陰性對(duì)照組，置CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)72h。72h后，取出各板，置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，每孔加入20μL質(zhì)量濃度為5g/L的MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4h后棄去孔內(nèi)液體，每孔加入150μLDMSO，振蕩10min，在酶標(biāo)儀570nm和630nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，按下式計(jì)算相對(duì)增值率（RGR）。RGR=A/A0100%注：RGR——相對(duì)增值率，%；A——供試品組（陽(yáng)性及陰性對(duì)照組）在570nm和630nm波長(zhǎng)下的吸光度的差值；A0——空白對(duì)照組吸光度。根據(jù)RGR按表2判定毒性反應(yīng)分級(jí)。見(jiàn)表2。[4]選取直腸無(wú)明顯刺激癥狀、無(wú)缺陷和無(wú)損傷的家兔12只，供試品組及對(duì)照組各3只。供試品組將受試物原液1mL注入至直腸內(nèi)，對(duì)照
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