微生物學(xué)實驗總結(jié)大全(完整版)
【正文】 30 時間如清風(fēng)般從你我指間滑過,無聲無息,快得我們都不曾駐足一望,莫然回首間,本學(xué)期的微生物學(xué)實驗已接近尾聲。突破創(chuàng)新能力實際上，在弄懂了實驗原理的基礎(chǔ)上，我們的時間是充分的，做實驗應(yīng)該是游刃有余的，如果說創(chuàng)新對于我們來說是件難事，那改良總是有可能的。通過這些微生物學(xué)實驗，不僅是對我理論課程的加深，更是對我實驗?zāi)芰Φ?一個顯著的提高。微生物實驗中，平板劃線和涂布是最重要的兩項操作，平板劃線要注意畫的連續(xù)性和可分辨性，平板涂布要涂均勻，否則都會影響后期的實驗觀察和結(jié)果。測定細胞數(shù)目的方法有顯微鏡直接計數(shù)法(direct microscopic count)、平板菌落計數(shù)法(plate count)、光電比油法(turbidity estimation by spectrophotometer)、最大或然數(shù)法(most probable number MPN)以及膜過濾法(membrane filtration)等。后兩種計菌器由于蓋上蓋玻片后，因此可用油浸物鏡對細菌等較小的細胞進行觀察和計數(shù)。該計數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構(gòu)成三個平臺；中間較寬的平臺又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺上各列有一個方格網(wǎng)，每個方格網(wǎng)共分為九個大方格，中間的大方格即為計數(shù)室。（四）操作步驟l．菌懸液制備以無菌生理鹽水將釀酒酵母制成濃度適當(dāng)?shù)木鷳乙?。一般樣品稀釋度要求每小格?nèi)約有5~10個菌體為宜。（五）實驗報告l．結(jié)果將結(jié)果記錄于下表中。為了清楚地闡述平板菌落計數(shù)的結(jié)果，現(xiàn)在已傾向使用菌落形成單位(colonyforming units，cfu)而不以絕對菌落數(shù)來表示樣品的活菌含量。2．稀釋用lmL無菌吸管吸取lmL已充分混勻的大腸桿菌菌縣液(待測樣品)，此即為10倍稀釋。3，取樣用三支1mL無菌吸管分別吸取10105和106。實際工作中同一稀釋度重復(fù)對照平板不能少于三個，這樣便于數(shù)據(jù)統(tǒng)計，減少誤差。(4)當(dāng)你的平板上長出的菌落不是均勻分散的而是集中在一起時，你認為問題出在哪里?(5)用倒平板法和涂布法計數(shù)，其平板上長出的菌落有何不同?為什么要培養(yǎng)較長時間(48h)后觀察結(jié)果?三 光電比濁計數(shù)法一、目的要求1．了解光電比濁計數(shù)法的原理。光電比濁計數(shù)法的優(yōu)點是簡便、迅速，可以連續(xù)測定，適合于自動控制。再分別裝入已編好號的1至7號無菌試管中。2．復(fù)習(xí)光電比濁法測量細菌數(shù)量的方法。也可以直接用試管或帶有測定管的三角瓶(圖155)測定“klett units”值的光度計。4．比濁測定用未接種的LB液體培養(yǎng)基作空白對照，選用600nm波長進行光電比濁測定。2．思考題(1)如果用活菌計數(shù)法制作生長曲線，你認為會有什么不同？兩者各有什么優(yōu)缺點？(2)細菌生長繁殖所經(jīng)歷的四個時期中，哪個時期其代時最短？若細胞密度為103/ml，其密度高達2108/ml，計計算出其代時?？己藘?nèi)容共8項，每位同學(xué)通過抽簽考其中的一項內(nèi)容。革蘭氏染色法（1）、口試回答細菌涂片的制作方法（2）、將一張已涂好的細菌玻片進行革蘭氏染色（3）、要求染色步驟及各項染色時間正確，操作熟練。（3）、正確觀察出鏡下細菌的特殊結(jié)構(gòu)。（2）、操作技術(shù)手法正確熟練（3）、脫色程度控制較好。（2）、要求劃線分區(qū)正確，接種劃線手法正確、熟練?？己说攸c：微免實驗課上課的實驗室考核內(nèi)容及要求如下：顯微鏡（油鏡）的使用和保護方法（1）、提供一張細菌玻片標(biāo)本，要求能正確使用油鏡觀察到細菌的基本形態(tài)。原理：中和試驗方法：間接凝集結(jié)果：效價大于400單位為陽性意義：鏈球菌感染指標(biāo)或風(fēng)濕熱及其活動性的輔助診斷 test原理：用已知傷寒沙門菌O、H抗原，以及引起副傷寒的甲型副傷寒沙門菌、肖氏沙門菌和希氏沙門菌H抗原的診斷菌液與受檢血清作定量凝集試驗，測定受檢血清中有無相應(yīng)抗體及其效價的試驗。本操作步驟也可用簡便的方法代替：1．~5ml LB液的試管中、混勻后將試管直接插入分光光度計的比色糟中，比色糟上方用自制的暗盒將試管及比色暗室全部罩上，形成一個大的暗環(huán)境，另以1支盛有LB液但沒有接種的試管調(diào)零點，測定樣品中培養(yǎng)0h的OD值。如果需要，可根據(jù)公式1 klett units=OD/。將一定量的細菌轉(zhuǎn)入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細胞要經(jīng)歷延遲期，對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個階段。比色測定時，用無菌生理鹽水作空白對照，并將OD值填入下表管號12345678細胞數(shù)106/ml光密度（OD）每管菌懸液在測定OD值時均必須先搖勻后再倒入比色皿中測定(4)以光密度(OD)值為縱坐標(biāo)，以每毫升細胞數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。因此，對于不同微生物的菌懸液進行光電比濁計數(shù)應(yīng)采用相同的菌株和培養(yǎng)條件制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。二、基本原理當(dāng)光線通過微生物菌懸液時，由于菌體的散射及吸收作用使光線的透過量降低。平板菌落計數(shù)法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的。，這樣容易加大同一稀釋度幾個重復(fù)平板間的操作誤差。OptionsEmail Replies將101試管置試管振蕩器上振蕩，使菌液充分混勻。（三）器材1．菌種 大腸桿菌菌懸液。各中格中菌數(shù)AB二室平均值菌數(shù)/ml12345第一室第二室2．思考題(1)根據(jù)你的體會，說明用血細胞計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自哪些方面?應(yīng)
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