微生物學(xué)實驗總結(jié)大全-預(yù)覽頁
【正文】 載物臺上，先用低倍鏡找到計數(shù)室所在位置，然后換成高倍鏡進行計數(shù)。每個計數(shù)室選5個中格(可選4個角和中央的一個中格)中的菌體進行計數(shù)。5．清洗血細(xì)胞計數(shù)板使用完畢后，將血細(xì)胞計數(shù)板在水龍頭用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風(fēng)機吹干。A表示五個中方格中的總菌數(shù)；B表示菌液稀釋倍數(shù)。統(tǒng)計菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。平板菌落計數(shù)法雖然操作較繁，結(jié)果需要培養(yǎng)一段時間才能取得，而且測定結(jié)果易受多種因素的影響，但是，由于該計數(shù)方法的最大優(yōu)點是可以獲得活菌的信息，所以被廣泛用于生物制品檢驗(如活菌制劑)，以及食品、飲料和水(包括水源水)等的含菌指數(shù)或污染程度的檢測。（四）操作步驟l．編號取無菌平皿9套，分別用記號筆標(biāo)明1010106。將多余的菌液放回原菌液中。用此吸管吸取101菌液lmL，此即為100倍稀釋。的稀釋菌懸液各lmL，對號放入編好號的無菌平皿中。待培養(yǎng)基凝固后，將平板倒置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。由1010106三個稀釋度計算出的每毫升菌液中菌落形成單位數(shù)也不應(yīng)相差太大。二者操作基本相同，所不同的是后者先將牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基融化后倒平板，待凝固后編號，并于37℃左右的溫箱中烘烤30min，或在超靜工作臺上適當(dāng)吹干，然后用無菌吸管吸取稀釋好的菌液對號接種于不同稀釋度編號的平板上，并盡快用無菌玻璃涂棒將菌液在平板上涂布均勻，平放于實驗臺上20～30min，使菌液滲入培養(yǎng)基表層內(nèi)，然后倒置37℃的恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。2．學(xué)習(xí)、掌握光電比濁計數(shù)法的操作方法。然后，以樣品液所測得的光密度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出對應(yīng)的菌數(shù)。但是，由于光密度或透光度除了受菌體濃度影響之外，還受細(xì)胞大小、形態(tài)、培養(yǎng)液成分以及所采用的光波長等因素的影響。圖15—4 比濁法測定細(xì)胞濃度的原理（三）器材1．菌種 釀酒酵母培養(yǎng)液2．儀器或其他用具 721型分光光度計，血細(xì)胞計數(shù)板，顯微鏡，試管，吸水紙，無菌吸管，無菌生理鹽水等。（3）測OD值 將1至7號不同濃度的菌懸液搖均勻后于560nm波長、1cm比色皿中測定OD值。各種操作條件必須與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時的相同，否則，測得值所換算的含菌數(shù)就不準(zhǔn)確。(二)基本原理大多數(shù)細(xì)菌的繁殖速率很快，在合適的條件下，一定時期的大腸桿菌細(xì)胞每20min分裂一次。測定細(xì)菌的生長曲線，了解其生長繁殖規(guī)律，這對人們根據(jù)不同的需要，有效地利用和控制細(xì)菌的生長具有重要意義。如圖15—6所示，只要接種1支試管或1個帶測定管的三角瓶，在不同的培養(yǎng)時間(橫坐標(biāo))取樣測定，以測得的klett units為縱坐標(biāo)，便可很方便地繪制出細(xì)菌的生長曲線。圖15—6 直接用試管測OD值(四)操作步驟1．標(biāo)記取11支無菌大試管，用記號筆分別標(biāo)明培養(yǎng)時間，即0、1116和20h。從早取出的培養(yǎng)液開始依次測定，對細(xì)胞密度大的培養(yǎng)液用LB液體培養(yǎng)基適當(dāng)稀釋后測定，~(測定OD值前，將待測定的培養(yǎng)液振蕩，使細(xì)胞均勻分布)。該方法準(zhǔn)確度高、操作簡便。(3)次生代謝產(chǎn)物的大量積累在哪個時期？根據(jù)細(xì)菌生長繁殖的規(guī)律，采用哪些措施可使次生代謝產(chǎn)物積累更多？評論這張第三篇：微生物學(xué)實驗總結(jié)“O”試驗（ASO test）：鏈球菌侵入體內(nèi)產(chǎn)生SLO，刺激機體產(chǎn)生相應(yīng)抗體ASO，當(dāng)兩者中和后，再加入SLO 乳膠試劑，因病人血清中ASO量很多，未被中和掉的抗體與乳膠試劑反應(yīng)，產(chǎn)生清晰凝集，為陽性；無凝集，為陰性。結(jié)核菌素試驗陰性者應(yīng)接種或補種卡介苗②作為嬰幼兒(尚未接種過卡介苗者)結(jié)核病的輔助診斷③在未接種卡介苗的人群中作結(jié)核桿菌感染的流行病學(xué)調(diào)查,了解人群自然感染率④測定腫瘤患者的細(xì)胞免疫功能：變形桿菌代替相應(yīng)的立克次體抗原進行非特異性凝集反應(yīng)，檢測人類或動物血清中有無相應(yīng)的抗體本質(zhì)：交叉凝集試驗，立克次體病的輔助診斷：制片→涂片→干燥→固定→染色初染（結(jié)晶紫1min）→媒染（碘液1min）→（95%酒精 30sec）→復(fù)染（稀釋復(fù)紅30sec）→印干→油鏡鏡檢第四篇：微生物學(xué)實驗考試題《微生物學(xué)實驗》試題在進行高壓蒸汽滅菌時，是否只要滅菌鍋壓力表到達所需的值時鍋內(nèi)就能獲得所需的滅菌溫度？為什么？在手提式高壓滅菌鍋的蓋上有哪些部件？它們各起什么作用？高壓蒸汽滅菌鍋的操作有哪幾個步驟？每一步驟應(yīng)注意哪些問題？在微生物學(xué)實驗中，常用于配制固體培養(yǎng)基的凝固劑是什么？它有哪些特性？如何使用？環(huán)境樣品梯度稀釋、涂布平板法分離微生物時，如何選擇不同稀釋梯度樣品的涂布順序？為什么？在革蘭氏染色實驗中，為什么會出現(xiàn)假陽性和假陰性？如何避免？在革蘭氏染色實驗中，不經(jīng)復(fù)染這一步，能否區(qū)別革蘭氏陽性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌？為什么？為何用計數(shù)板可以計得樣品中的總菌值？如何計算樣品中的菌體濃度？血球計數(shù)板計數(shù)時，計數(shù)室內(nèi)如有氣泡會對結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？如何避免產(chǎn)生氣泡？試分析血球計數(shù)板計數(shù)法的誤差來源，并提出減少誤差的方法和措施?？己藭r間：每人限6分鐘內(nèi)完成。玻片凝集試驗（1）、要求用傷寒診斷血清，采用玻片凝集試驗的方法檢測待檢細(xì)菌是否為傷寒桿菌。細(xì)菌的劃線分離培養(yǎng)技術(shù)（1）、將細(xì)菌分區(qū)劃線到普通瓊脂平碟上。（2）、要求各環(huán)節(jié)無菌操作正確?？顾崛旧ǎ?）、正確回答抗酸染色的各個步驟（包括用加熱法或不加熱法 初染的時間）。
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