微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)總結(jié)大全(存儲(chǔ)版)
【正文】 50ml LB液的三角瓶?jī)?nèi)，混合均勻后分別取5ml混合液放入上述標(biāo)記的11支無菌大試管中。但須注意的是使用的2支試管要很干凈，其透光程度愈接近，測(cè)定的準(zhǔn)確度愈高。要求把題目和答案寫在實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙上，統(tǒng)一收齊后和第一次實(shí)驗(yàn)報(bào)告一起送到我辦公室生科樓104。（2）、要求操作方法、步驟正確，能準(zhǔn)確判斷結(jié)果。細(xì)菌在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)情況及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀察（1）、正確描述固體培養(yǎng)基的菌落、菌苔。補(bǔ)考成績(jī)通過后只計(jì)及格。液體和半固體培養(yǎng)基的細(xì)菌接種方法（無菌操作）（1）、將菌種接種到液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基內(nèi)。（2）、掌握血清對(duì)倍稀釋的原理及方法，能正確使用刻度吸管。：是應(yīng)用結(jié)核菌素進(jìn)行皮膚試驗(yàn)來測(cè)定機(jī)體對(duì)結(jié)核分枝桿菌是否能引起遲發(fā)型超敏反應(yīng)（Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)）的一種試驗(yàn)材料：舊結(jié)核菌素、純蛋白衍生物(PPD)方法：前臂皮內(nèi)注射PPD5單位結(jié)果：注射后72h，紅腫硬節(jié)≤5mm陰性→未感染；＞ 5mm 陽性→已感染（接種BCG等）≥ 15mm 強(qiáng)陽性→活動(dòng)性感染假陰性：感染初期、嚴(yán)重結(jié)核病患者、細(xì)胞免疫功能降低（麻疹、AIDS、腫瘤、免疫抑制劑)應(yīng)用：①選擇卡介苗接種對(duì)象和測(cè)定卡介苗接種后的免疫效果。2．分別在培養(yǎng)0、1116和20h，取出培養(yǎng)物試管按上述方法測(cè)定OD值。3．儀器或其他用具 722型分光光度計(jì)，水浴振蕩搖床，無菌試管，無菌吸管等。不同的細(xì)菌在相同的培養(yǎng)條件下其生長(zhǎng)曲線不同，同樣的細(xì)菌在不同的培養(yǎng)條件下所繪制的生長(zhǎng)曲線也不相同。測(cè)定時(shí)用無菌生理鹽水作空白對(duì)照。另外，對(duì)于顏色太深的樣品或在樣品中還含有其他干擾物質(zhì)的懸液不適合用此法進(jìn)行測(cè)定。因此，可用一系列已知菌數(shù)的菌懸液測(cè)定光密度，作出光密度—菌數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線。平板菌落計(jì)數(shù)法的操作除上述傾注倒平板的方式以外，還可以用涂布平板的方式進(jìn)行。由于細(xì)菌易吸附到玻璃器皿表面，所以菌液加入到培養(yǎng)皿后，應(yīng)盡快倒入融化并于已冷卻至45℃左右的培養(yǎng)基，立即搖勻，否則細(xì)菌將不易分散或長(zhǎng)成的菌落連在一起，影響計(jì)數(shù)。吹吸菌液時(shí)不要太猛太快，吸時(shí)吸管伸人管底，吹時(shí)離開液面，以免將吸管中的過濾棉花浸濕或使試管內(nèi)液體外溢。3．儀器或其他用具lm1無菌吸管，無菌平皿，試管架，恒溫培養(yǎng)箱等。（二）、基本原理平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均數(shù)值來計(jì)算樣品的含菌量。取樣時(shí)先要搖勻菌液；加樣時(shí)計(jì)數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生。圖15—1 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造（一）圖15—2 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造（二）；； 放大后的方格網(wǎng)，中間大方格為計(jì)數(shù)室；；計(jì)數(shù)時(shí)，通常數(shù)五個(gè)中方格的總菌數(shù)，然后求得每個(gè)中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一個(gè)大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成lml菌液中的總菌數(shù)。目前已有一些方法可以克服這一缺點(diǎn)，如結(jié)合活菌染色微室培養(yǎng)（短時(shí)間）以及加細(xì)胞分裂抑制劑等方法來達(dá)到只計(jì)數(shù)活菌體的目的。一 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法（一）目的要求1．明確血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的原理。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后要及時(shí)觀察結(jié)果，過了兩天才去觀察，結(jié)果部分平板已長(zhǎng)出菌苔，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀察造成了很大的困難，所以，結(jié)果觀察同實(shí)驗(yàn)操作一樣重要。在微生物實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，有條件要在超凈工作臺(tái)下操作，降低被污染的概率，相關(guān)操作也要在酒精燈附近進(jìn)行。動(dòng)手能力動(dòng)手操作對(duì)激發(fā)微生物學(xué)學(xué)習(xí)興趣、幫助理解微生物學(xué)知識(shí)、培養(yǎng)解決問題能力、創(chuàng)新能力等具有重要作用。所以我認(rèn)為，要做好微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)要有以下的四個(gè)能力：獨(dú)立思考能力我想，在這個(gè)過程中，其中一個(gè)重要的感悟就是獨(dú)立思考的重要性。需要我們不斷地做實(shí)驗(yàn)，在實(shí)驗(yàn)中觀察、分析相應(yīng)的結(jié)果。我們?cè)谘芯扛倪M(jìn)措施的同時(shí)，也可以借助于現(xiàn)代信息技術(shù)手段制作視頻資料或多媒體課件進(jìn)行輔助學(xué)習(xí)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，接種環(huán)、接種針、移液管口和涂布器等要在酒精燈下灼燒徹底，防止其上面附著著的微生物污染。另外，實(shí)驗(yàn)中模式菌的學(xué)習(xí)和使用為未來科研打好良好基礎(chǔ)，比如典型的革蘭氏陰性菌大腸桿菌和典型的革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌都是實(shí)驗(yàn)室的常用菌，如果未來還要從事微生物相關(guān)工作，這幾種模式菌都必不可少。本實(shí)驗(yàn)主要介紹生產(chǎn)、科研工作中比較常用的顯微鏡直接計(jì)數(shù)法、平板菌落計(jì)數(shù)法和光電比濁計(jì)數(shù)法。但此法的缺點(diǎn)是所測(cè)得的結(jié)果通常是死菌體和活菌體的總和。每一個(gè)大方格邊長(zhǎng)為lmm，則每一個(gè)大方格的面積為lmm2，蓋上蓋玻片后，(萬分之一毫升)。3．加樣品將清潔干燥的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛細(xì)滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動(dòng)進(jìn)入計(jì)數(shù)室，一般計(jì)數(shù)室均能充滿菌液。如遇酵母出芽，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半時(shí)，即作為兩個(gè)菌體計(jì)數(shù)。二平板菌落計(jì)數(shù)法（一）目的要求學(xué)習(xí)習(xí)近平板菌落計(jì)數(shù)的基本原理和方法。2．培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基。另取一支lml吸管插入10?1試管中來回吹吸菌懸液三次，進(jìn)一步將菌體分散、混勻。圖15—3平板菌落計(jì)數(shù)操作步驟4．倒平板．盡快向上述盛有不同稀釋度菌液的平皿中倒入融化后冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基約15毫升/平皿，置水平位置迅速旋動(dòng)平皿，使培養(yǎng)基與菌液混合均勻，而又不使培養(yǎng)基蕩出平皿或?yàn)R到平皿蓋上。一般以三個(gè)連續(xù)稀釋度中的第二個(gè)稀釋度倒平板培養(yǎng)后所出現(xiàn)的
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