【正文】 9 （十一） 實(shí)驗(yàn)步驟…………………………………………………… 10 （十二） 實(shí)驗(yàn)結(jié)果以及分析… ……………………………………… 15 項(xiàng)目三 革蘭氏染色 （一） 實(shí)驗(yàn)器 材 …………………………………………………… 18 （二） 實(shí)驗(yàn)步驟 …………………………………………………… 18 （三） 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 …………………………………………………… 18 四 實(shí)驗(yàn)感想 實(shí)驗(yàn)報(bào)告 黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院 3 項(xiàng)目一 食品中菌落總數(shù)的測(cè)定 前言 隨著生活人們生活水平的提高，和社會(huì)的發(fā)展與進(jìn)步食品安全問(wèn)題越來(lái)越受到人們的關(guān)注，然而食品方面的問(wèn)題這幾年也越來(lái)越突出，食品安全問(wèn)題屢見(jiàn)不鮮。 三、實(shí)驗(yàn)器材 1．培養(yǎng)基：平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，磷酸鹽緩沖液，無(wú)菌生理鹽水。 （ 5）及時(shí)將 15～ 20mL冷卻至 46℃的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于 46177。 可 用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。 （ 2）若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按以下公式計(jì)算： 12( )CNnn? ?? 式中： N—— 樣品中菌落數(shù) Σ C—— 平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和； n1—— 第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)； n2—— 第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)； d—— 稀釋因子（第一稀釋度）。 （ 3）若所有平板上為蔓延菌落而無(wú)法計(jì)數(shù)，則報(bào)告菌落蔓延。 冷凍飲品的落菌總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)國(guó)家強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn) 《冷凍飲品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，含淀粉或果類的冷凍飲品菌落總數(shù)應(yīng)≤ 3000cfu/g,大腸菌群應(yīng)≤ 100MPN/100g；含乳蛋的冷凍飲品的菌落總數(shù)應(yīng)≤ 25000cfu/g,大腸菌群應(yīng)≤ 450MPN/100g，超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定可判斷為不合格雪糕或冷飲。 1肉干、肉鋪的落菌總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)肉干、依據(jù)強(qiáng)制性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB27262021《熟肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，肉制品中大腸菌群不得超過(guò) 30MPN/100g，超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定可判斷為不合格肉制品。 2豆制品及面筋的菌落總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)國(guó)家強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn) GB27112021《非發(fā)酵性豆制品及面筋衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，定型包裝非發(fā)酵豆制品的菌落總數(shù)為≤ 750 cfu/g；依據(jù)國(guó)家強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn) GB27122021《發(fā)酵性豆制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，定型包裝發(fā)酵性豆制品的大腸菌群為≤ 30MPN/100g。 四、操作步驟 方法 1： 大腸菌群 LST 肉湯培養(yǎng)基 MPN 計(jì)數(shù)法 圖 食品中大腸菌群 MPN 計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序 1．采樣及稀釋 （ 1）固體和半固體樣品 ：稱取 25g 樣品 ,放入盛有 225mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi)， 8000r/min～ 10000r/min 均質(zhì) 1min～ 2min，或放入盛有 225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打 1min～2min，制成 1:10 的樣品勻液。 1℃培養(yǎng) 24177。產(chǎn)氣者，為大腸菌群陽(yáng)性管。 15～ 20mL 冷至 46℃的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（ VRBA）傾注于每個(gè)平皿中。凡 BGLB 肉湯管產(chǎn)氣，即可報(bào)實(shí)驗(yàn)報(bào)告 黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院 16 告為大腸菌群陽(yáng)性。注意手指不得觸及瓶口內(nèi)部。接種 1mL 以下水樣時(shí)，必須作 10 倍遞增稀釋后，取 1mL 接種，每遞增稀釋一次，換用 1 支1mL 滅菌刻度吸管。 根據(jù)證實(shí)為大腸桿菌群陽(yáng)性的管數(shù)，查相應(yīng)的大腸桿菌 MPN 檢索表，報(bào)告每100 毫升待檢樣品中大腸菌群細(xì)菌的最近似數(shù)。 實(shí)驗(yàn)器材： 接種環(huán)、載玻片、酒精燈、顯微鏡、革蘭氏碘液、秒表、草酸銨結(jié)晶紫、 95％的酒精、番紅、蒸餾水。還有一點(diǎn)讓我學(xué)到的就是遇到緊急事件不要慌，不要亂。我們團(tuán)隊(duì)中由于有時(shí)分工不明確造成做實(shí)驗(yàn)時(shí)有的人在那忙碌，而有些人在那閑著沒(méi)事做，這就造成了團(tuán)隊(duì)成員之間會(huì)有分歧的，這一點(diǎn)都是要靠一個(gè)好的組長(zhǎng)來(lái)為維持的。這也讓我們學(xué)習(xí)到了將來(lái)步入工作崗位以后怎樣才能更好的來(lái)當(dāng)一名領(lǐng)導(dǎo)，怎樣才能讓自己的員工更好的聽(tīng)從自己的安排。等等一些突發(fā)事件都應(yīng)該從容的去面對(duì)才好。 實(shí)驗(yàn)報(bào)告 黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院 20 實(shí)驗(yàn)感想 時(shí)間 是匆忙的，為期兩周的實(shí)驗(yàn)課程就是這樣在不知覺(jué)中過(guò)去了，在這為期不長(zhǎng)的兩周里學(xué)到了不少的東西。稀釋樣品查表后所得結(jié)果應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。如所用乳糖蛋白胨培養(yǎng)管都不產(chǎn)氣產(chǎn)實(shí)驗(yàn)報(bào)告 黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院 18 酸，則可報(bào)告為總大腸菌群陰性，如有產(chǎn)酸、產(chǎn)氣的發(fā)酵管，按下列程序繼續(xù)進(jìn)行檢驗(yàn)。如果水在流動(dòng)，瓶口必須迎著水流，以免手上的細(xì)菌被水沖進(jìn)瓶子。例： 104 樣品稀釋液 1mL，在 VRBA 平板上有 100 個(gè)典型和可疑菌落，挑取其中 10 個(gè)接種 BGLB 肉湯管，證實(shí)有 6 個(gè)陽(yáng)性管，則該樣品的大腸菌群數(shù)為： 100 6/10 104/g（ mL）＝ 105cfu/g（ mL）。翻轉(zhuǎn)平板，置于 36177。 表 91 大腸菌群 最可能數(shù)（ MPN）檢索表 陽(yáng)性管數(shù) MPN 95%置信區(qū)間 陽(yáng)性管數(shù) MPN 95%置信區(qū)間 下限 上限 下限 上限 實(shí)驗(yàn)報(bào)告 黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院 14 0 0 0 2 2 0 21 42 0 0 1 2 2 1 28 94 0 1 0 11 2 2 2 35 94 0 1 1 18 2 3 0 29 94 0 2 0 18 2 3 1 36 94 0 3 0 38 3 0 0 23 94 1 0 1 18 3 0 2 64 17 180 1 0 2 11 38 3 1 0 43 9 180 1 1 0 20 3 1 1 75 17 200 1 1 1 11 38 3 1 2 120 37 420 1 2 0 11 42 3 1 3 160 40 420 1 2 1 15 42 3 2 0 93 18 420 1 3 0 16