20xx年醫(yī)學(xué)專題—流式細(xì)胞儀分析技術(shù)應(yīng)用(存儲版)
【正文】 4PE CD38FITC CD34+ CD38 細(xì)胞 1/ PE Isotype。iyǎng)鑒定,將分好的單細(xì)胞至于相應(yīng)的培養(yǎng)基中進(jìn)行14天培養(yǎng)，培養(yǎng)后對每板細(xì)胞存活比例(bǐl236。建立良好的補(bǔ)償矩陣，這樣的補(bǔ)償計(jì)算更標(biāo)準(zhǔn)。保持細(xì)胞清潔的更好，并且能提供額外的激光束。q236。,第三十九頁，共五十二頁。影響單細(xì)胞分選效果的因素有很多。ijǐng),干細(xì)胞的研究意義現(xiàn)在已經(jīng)越來越重要。因此組合抗體應(yīng)用濃度應(yīng)比單獨(dú)抗體使用濃度高。nb225。,用化學(xué)法將兩種不同激發(fā)波長的染料結(jié)合在一起，在488nm激發(fā)光照射下，通過一個(gè)熒光染料被激發(fā)后產(chǎn)生的發(fā)射(fāsh232。,盡量(jǐnli224。 sh236。某些細(xì)胞在活化會比較(bǐji224。,新鮮實(shí)體組織單細(xì)胞懸液的制備 機(jī)械(jīxi232。ny236。)分析,第十九頁，共五十二頁。 等高線越密集則表示細(xì)胞數(shù)變化率越大。,（二）雙參數(shù)(cānsh249。)直方圖,第十一頁，共五十二頁。)的大小 SS：反映顆粒的內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度 FL：反映顆粒被染上的熒光數(shù)量多少,一、 參數(shù)(cānsh249。與分選速度成反比。n),充電,（一）分選基本原理,第六頁，共五十二頁。,通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行(j236。ngli224。實(shí)驗(yàn)室流式細(xì)胞儀單細(xì)胞分選技術(shù)(j236。,流式細(xì)胞術(shù)最大的特點(diǎn)是能在保持細(xì)胞及細(xì)胞器或微粒的結(jié)構(gòu)及功能不被破壞的狀態(tài)下，通過熒光探針的協(xié)助，從分子水平上獲取多種信號對細(xì)胞進(jìn)行定量分析(d236。tǒng) （2） 光學(xué)系統(tǒng) （3） 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),1.流式細(xì)胞儀的基本(jīběn)結(jié)構(gòu)：,第四頁，共五十二頁。,壓電晶體(jīngtǐ),產(chǎn)生(chǎnshēng)機(jī)械振動(dòng),不充電(chōng di224。 分選得率：從一群體細(xì)胞懸液中分辨出目的細(xì)胞的總量，再經(jīng)分選后得到目的細(xì)胞的實(shí)際得率。,FS：反映顆粒(kēl236。,（一）單參數(shù)(cānsh249。o)通常采用對數(shù)信號，最常用的是點(diǎn)密圖，在圖中，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)細(xì)胞，點(diǎn)圖利用顆粒密度反映同樣散射光或熒光強(qiáng)度的顆粒數(shù)量的多少。 曲線層次越高(越里面的線) 所代表的細(xì)胞數(shù)愈多。,（四）流式細(xì)胞儀的多參數(shù)(cānsh249。ng)粒細(xì)胞,A、B、C均為任意(r232。ngpǐn)制備,第二十四頁，共五十二頁。,較黏著的細(xì)胞(sticky cells)： 提高EDTA 到 5mM 并使用透析過的FBS (against Ca++/Mg++ free PBS)。,含有高比例死細(xì)胞的樣本： Sorting buffer加5mM MgCl2以及25~50 μg/mL DNAase I (Sigma D4513)或是(hu242。)染色,第二十九頁，共五十二頁。nɡ)的幾類熒光染料,第三十二頁，共五十二頁。)熒光,花青(huā qīnɡ)苷5,藻紅蛋白(d224。guǒ)各加20μl，總體積會增至60μl，因此每種抗體的濃度被稀釋成原來的1/3，不再是最佳用量。,背景(b232。)問題,所有的單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)技術(shù)中，干細(xì)胞的單細(xì)胞分選是最為關(guān)鍵，也是最為基礎(chǔ)的一個(gè)環(huán)節(jié)。bǎn)化和抗體組合的優(yōu)化建立一套針對白血病干細(xì)胞和正常造血干細(xì)
法律信息相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1