20xx年醫(yī)學專題—流式細胞儀分析技術應用-文庫吧
2024-11-11 18:38 本頁面
【正文】 參數(shù)(cānsh249。)直方圖,第十三頁，共五十二頁。,1.雙參數(shù)(cānsh249。)直方圖點圖,第十四頁，共五十二頁。,2. 二維等高圖,由類似地圖上的等高線組成，其本質也是雙參數(shù)直方圖。 等高圖上每一條連續(xù)曲線上具有相同的細胞(x236。bāo)相對或絕對數(shù)，即“等高”。 曲線層次越高(越里面的線) 所代表的細胞數(shù)愈多。 等高線越密集則表示細胞數(shù)變化率越大。,第十五頁，共五十二頁。,二維等高圖,第十六頁，共五十二頁。,3. 假三維等高圖,第十七頁，共五十二頁。,（三）三參數(shù)(cānsh249。)直方圖,第十八頁，共五十二頁。,多參數(shù)分析(fēnxī)：當細胞標記了多色熒光，被激發(fā)光激發(fā)后，得到的熒光信號和散射光信號可根據(jù)需要進行組合分析(fēnxī)。,（四）流式細胞儀的多參數(shù)(cānsh249。)分析,第十九頁，共五十二頁。,Gate設置：指在某一張選定參數(shù)的直方圖上，根據(jù)該圖的細胞群分布選定其中想要分析的特定細胞群，并要求該樣本所有其他(q237。tā)參數(shù)組合的直方圖只體現(xiàn)這群細胞的分布情況。,根據(jù)門的形狀又分為了線性門、矩形(jǔx237。ng)門、圓形門、多邊形門、任意形狀門和十字門。,三、設門分析(fēnxī)技術,第二十頁，共五十二頁。,A 淋巴細胞 B 單核細胞 C 中性(zhōngx236。ng)粒細胞,A、B、C均為任意(r232。ny236。)門,第二十一頁，共五十二頁。,線性門,第二十二頁，共五十二頁。,樣本制備 標記染色(rǎns232。) 液相芯片技術 質量控制,第四節(jié) 流式細胞儀免疫分析(fēnxī)的技術要求,第二十三頁，共五十二頁。,外周血淋巴細胞樣品的制備 分離單個核細胞(x236。bāo) 培養(yǎng)細胞的樣品制備 蛋白酶消化 機械吹打 使貼壁細胞脫落 洗滌 尼龍網(wǎng)過濾,一、免疫檢測樣品(y224。ngpǐn)制備,第二十四頁，共五十二頁。,新鮮實體組織單細胞懸液的制備 機械(jīxi232。)法 酶處理法 化學試劑處理法 表面活性劑處理法 單細胞懸液的保存 深低溫保存法（一年） 乙醇或甲醇保存法（2周） 甲醛或多聚甲醛保存法（2月）,第二十五頁，共五十二頁。,1 Phosphate Buffer Saline or HBSS (Ca/Mg++ free) 1 mM EDTA 25 mM HEPES pH 7.0 1 % Fetal Bovine Serum (Heatinactivated),Sorting Buffer,第二十六頁，共五十二頁。,淋巴細胞： 1x HBSS(with Ca++/Mg++)含1% FBS HBSS配方中的陽離子可增加細胞的生存力。由于這些細胞并非易于(y236。y)聚集，即便配方中沒有EDTA也不會造成問題。,較黏著的細胞(sticky cells)： 提高EDTA 到 5mM 并使用透析過的FBS (against Ca++/Mg++ free PBS)。某些細胞在活化會比較(bǐji224。o)黏著而EDTA可抑制此作用,第二十七頁，共五十二頁。,貼壁型細胞株(Adherent cells)： 以Trypsin處理后去準備單細胞懸液時，待
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