6流式細(xì)胞術(shù)的質(zhì)量控制和影響因素(存儲(chǔ)版)
【正文】 對(duì)于二倍體為主峰的右側(cè)出現(xiàn)的異倍體峰，用 %胃蛋白酶或 1%的 DNA酶消化 35分鐘，如果再測(cè)仍然出現(xiàn)異倍體峰可為真性異倍體，如果異倍體峰消失，則認(rèn)為是假性異倍體。對(duì)于這樣峰位，除了可用計(jì)算機(jī)軟件加以消除外，可放棄 S期的計(jì)算 DNA倍體標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)量控制： DNA倍體的標(biāo)準(zhǔn)是根據(jù)正常二倍體細(xì)胞DNA含量的分布范圍而確定的，對(duì)于二倍體的標(biāo)準(zhǔn)的選擇，應(yīng)遵照如下原則： ◆采用同個(gè)體同源正常組織。因此，影響了熒光分子發(fā)光量子產(chǎn)額 ⒈ 溫度對(duì)熒光染色強(qiáng)度的影響： 溫度升高時(shí)，熒光減弱，熒光減弱的百分比稱溫度系數(shù)。 消化酶液要掌握適當(dāng)?shù)臐舛取?pH值、溫度等，不造成酶的活性降低為宜，消化時(shí)間很重要，時(shí)間短細(xì)胞消化不下來，時(shí)間長(zhǎng)，消化下來的細(xì)胞又被破壞，在制備石蠟包埋單細(xì)胞時(shí)，常規(guī)使用%胃蛋白酶（ PH ） 石蠟包埋組織的單細(xì)胞制備方法的建立，使流式細(xì)胞術(shù)在醫(yī)學(xué)研究中得到更廣泛的應(yīng)用，但仍存在一些問題有待進(jìn)一步解決，主要存在問題如下： ⑴ 樣品中的碎片較多 ， 所測(cè)得的 DNA組方圖質(zhì)量不及新鮮組織好 ， 組方圖的峰位較寬 ， CV值偏大 。例如，以淋巴細(xì)胞 DNA定量分析為例，就須把淋巴細(xì)胞分離出來，而將其他有核細(xì)胞或紅細(xì)胞去除，對(duì)于血小板的分析樣品制備過程中須防止過高離心速度造成血小板膜的損傷，出現(xiàn)血小板凝集 新鮮實(shí)體組織單細(xì)胞樣品的制備，實(shí)體組織是流式分析工作的主要材料來源，但對(duì)其分散單細(xì)胞樣品的技術(shù)和方法，仍存在著很多問題，仍需大量的探索工作。 有作者分析研究了自溶對(duì) DNA測(cè)定的影響，發(fā)現(xiàn)自溶的組織細(xì)胞常出現(xiàn)假性異倍體，且不固定的組織細(xì)胞隨時(shí)間的延長(zhǎng)， DNA含量呈梯度降低 根據(jù)檢測(cè)的目的，選擇什么類型的固定劑，對(duì)流式檢測(cè)質(zhì)量也有顯著的影響。 例如 70%的乙醇固定比 75%以上的濃度固定效果好，因?yàn)楦邼舛鹊囊掖汲Ｔ斐杉?xì)胞表面快速形成一個(gè)蛋白膜，致使細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)固定不良。 二、單細(xì)胞懸液制備的質(zhì)量控制 全血中含有多種有形成分，流式細(xì)胞檢測(cè)是以某一群細(xì)胞為檢測(cè)對(duì)象，因此在檢測(cè)前須將所測(cè)的某群細(xì)胞成分分離出來。 三 、 石蠟包埋組織單細(xì)胞制備的質(zhì)量控制 石蠟包埋組織標(biāo)本的材料選擇，應(yīng)經(jīng)病理醫(yī)師仔細(xì)檢查，選取無自溶，壞死的組織對(duì)腫瘤組織標(biāo)本，選取含腫瘤組織細(xì)胞豐富的區(qū)域，且經(jīng)病理形態(tài)或細(xì)胞學(xué)核實(shí)病理診斷 三 、 石蠟包埋組織單細(xì)胞制備的質(zhì)量控制 切取適當(dāng)厚度的石蠟組織片，大量研究證明，切取 4050μm厚度的切片是適宜的，過厚的組織片消化費(fèi)時(shí)，消化下來的細(xì)胞數(shù)少，過薄的切片可產(chǎn)生大量的細(xì)胞碎片，影響檢測(cè)結(jié)果，使腫瘤異倍體的檢出率減少，我們研究了石蠟切片不同厚度 (5,10,20,30,40, 50μm)對(duì)流式分析 DNA的影響，發(fā)現(xiàn)較薄的切片造成碎片較多 ,噪音增加 ,組方圖的基線提高 ,影響倍體分析的精度
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