6流式細(xì)胞術(shù)的質(zhì)量控制和影響因素-文庫吧資料
2025-03-12 21:02本頁面
【正文】 現(xiàn)象 接比例關(guān)系： 因此在研究濃度與熒光強度關(guān)系時，必須檢查所得的熒光值是曲線高峰前的濃度，還是曲線高峰后的濃度 (方法是減少溶液濃度，如熒光減弱則為高峰前濃度 )。因此，影響了熒光分子發(fā)光量子產(chǎn)額 ⒈ 溫度對熒光染色強度的影響： 溫度升高時，熒光減弱，熒光減弱的百分比稱溫度系數(shù)。 ⒈ 溫度對熒光染色強度的影響： 在一般情況下，環(huán)境溫度的升高對熒光染色有明顯的影響。制備出一個合格的單細(xì)胞樣品，其細(xì)胞數(shù)要求在 1 106/ml， 其雜質(zhì)碎片團塊應(yīng)小于 2%以下，否則應(yīng)放棄檢測，對腫瘤細(xì)胞 DNA異倍體的分析樣品中，至少應(yīng)有 20%的腫瘤細(xì)胞存在， (因占主峰 1/5以上的異倍體峰才可確認(rèn)為異倍體 ) 五 、 細(xì)胞懸液熒光染色的質(zhì)量控制 單細(xì)胞懸液樣品熒光染色對流式定量分析的精度很重要。因這些材料獲得的結(jié)果常出現(xiàn)假陰性或假陽性。 消化酶液要掌握適當(dāng)?shù)臐舛取?pH值、溫度等，不造成酶的活性降低為宜，消化時間很重要，時間短細(xì)胞消化不下來，時間長，消化下來的細(xì)胞又被破壞，在制備石蠟包埋單細(xì)胞時，常規(guī)使用%胃蛋白酶（ PH ） 石蠟包埋組織的單細(xì)胞制備方法的建立，使流式細(xì)胞術(shù)在醫(yī)學(xué)研究中得到更廣泛的應(yīng)用，但仍存在一些問題有待進(jìn)一步解決，主要存在問題如下： ⑴ 樣品中的碎片較多 ， 所測得的 DNA組方圖質(zhì)量不及新鮮組織好 ， 組方圖的峰位較寬 ， CV值偏大 。 以上幾種方法是目前對實體組織解聚常用的方法，往往不是單用，常常是一種或二種方法的結(jié)合使用，總的來說，對實體組織分散為單細(xì)胞還存在很多困難，因此還需要深入探討流式樣品的制備技術(shù)，制備出完整細(xì)胞產(chǎn)量高，細(xì)胞損傷小的合格懸液 , 獲得更好的流式檢測結(jié)果。 ③機械方法，常采用剪碎，網(wǎng)搓研磨，細(xì)針抽吸等，對細(xì)胞損傷大，產(chǎn)生的細(xì)胞碎片多，細(xì)胞團塊多，在使用機械法時，要給于組織適當(dāng)?shù)膲毫?，這種適當(dāng)?shù)膲毫π枰休^多的制樣實踐經(jīng)驗技術(shù)人員來操作。 ① 選則酶學(xué)方法時，應(yīng)注意選擇酶類型的問題，含有大量結(jié)締組織的，選擇膠原酶好，不宜選擇胃蛋白酶或胰酶。例如，以淋巴細(xì)胞 DNA定量分析為例，就須把淋巴細(xì)胞分離出來，而將其他有核細(xì)胞或紅細(xì)胞去除，對于血小板的分析樣品制備過程中須防止過高離心速度造成血小板膜的損傷，出現(xiàn)血小板凝集 新鮮實體組織單細(xì)胞樣品的制備，實體組織是流式分析工作的主要材料來源，但對其分散單細(xì)胞樣品的技術(shù)和方法，仍存在著很多問題，仍需大量的探索工作。 二、單細(xì)胞懸液制備的質(zhì)量控制 人體的末梢血液和骨髓細(xì)胞及淋巴組織是人體組織中缺乏細(xì)胞間連結(jié)裝置的組織，尤其是血和骨髓細(xì)胞是天然的單分散細(xì)胞材料，其中的細(xì)胞成分在生理狀態(tài)下呈單分散狀態(tài)，它是流式分析最合適的樣品來源。在不能及時檢測又沒有低溫保存條件時，要根據(jù)所測物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)還是在細(xì)胞膜表面，在膜表面的抗原物質(zhì)，以醛類固定劑為宜，盡管醛類固定劑產(chǎn)生的非特異性熒光較強，但不宜采用醇類固定劑，因醇類固定
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