【正文】 安全的角度考慮，粒徑必須全部在亞微米級(jí)范圍內(nèi)。小鼠靜注后 ,靶向效率從大到小依次為：心、腦、全血、肝、脾、腎和肺。許多實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，即使 SLN在一定程度聚合后，其生物利用度仍然很高。 SLN 的粒徑很小， 178 具有一定的生物粘附性，比較容易粘附到皮膚上形成薄膜，它可以修復(fù)皮膚表面破損的脂質(zhì)層，并且具有一定的屏蔽作用?？上♂屩苽涑筛鄤豁氈苽涑赡z劑。結(jié)果表明霧化前和霧化后納米粒的粒徑分布幾乎相同，僅有輕微的粒子聚集現(xiàn)象發(fā)生，這對(duì)肺部給藥沒有影響。一般來(lái)講，藥物在熔融物中的溶解量要高一些，因?yàn)楫?dāng)熔融物溫度下降時(shí)溶解的藥物量會(huì)隨之減少，脂質(zhì)凝固后藥物的溶解度甚 至更低。納米粒中脂質(zhì)結(jié)晶部分為α構(gòu)型，而常規(guī)狀態(tài)下的結(jié)晶大部分為β ’構(gòu)型，并很快轉(zhuǎn)變?yōu)棣聵?gòu)型。納米乳的冷卻會(huì)導(dǎo)致藥物在脂質(zhì)中產(chǎn)生過飽和現(xiàn)象，進(jìn)而藥物先于脂質(zhì)沉淀下來(lái)，進(jìn)一步的冷卻會(huì)使脂質(zhì)重新結(jié)晶，包圍含藥的核形成膜的結(jié)構(gòu)。在脫氫皮質(zhì)醇納米粒中，藥物被緩慢釋放而無(wú)明顯的突釋效應(yīng)，但是釋放曲線上開始仍會(huì)有一個(gè)釋放較快的階段，隨之是一個(gè)相對(duì)緩慢的階段。當(dāng)溫度下降 到脂質(zhì)結(jié)晶溫度時(shí)，脂質(zhì)基質(zhì)和溶解在其中的藥物開始形成固態(tài)的脂質(zhì)核，從而制得固態(tài)脂質(zhì)納米粒。 PLA 納米粒、 PLGA 納米粒和SLN 使人粒性白細(xì)胞的存活率降低 50%的濃度分別為 %， %，和大于 10%，這說(shuō)明 SLN 的毒性最低 [34,35]，更適合作 為靜脈給藥系統(tǒng)藥物的載體。 進(jìn)一步的研究重點(diǎn)需要了解 SLN進(jìn)入體內(nèi)后與體內(nèi)的生物環(huán)境之間的相互作用（吸附 /解吸附過程，酶解，聚合，和內(nèi)源性的脂類載體系統(tǒng)之間的作用）。 3． 保護(hù)性：藥物被脂質(zhì)體包封 后，受到脂質(zhì)體雙層膜的保護(hù)，可以顯著提高穩(wěn)定性，同時(shí)，還免受體內(nèi)的降解酶和免疫系統(tǒng)的分解，提高藥物在體內(nèi)的穩(wěn)定性。脂質(zhì)體的直徑約在 25nm~1000nm 范圍內(nèi)，甚至更大。 （ 3）大單層脂質(zhì)體（ large unilamellar vesicles， LUV） 這是指直徑大于 1000nm 的由單層磷脂雙分子層膜組成的脂質(zhì)體。陽(yáng)離子去垢劑主要有 N[1(2， 3)二油烯氧基 ]丙基 N， N， N三甲基氯化銨（ DOTMA）、十二烷基三甲基溴化銨、十四烷基三甲基溴化銨、十六烷基三甲基溴化銨、十六烷基二甲基乙基溴化銨、二甲基雙十八烷基溴化銨 (DDAB)、 N (α 三甲基乙?；?) 雙十二烷基 D谷氨酸、 1， 2二油烯氧基 3三甲胺基丙烷 (DOTAP)等。陽(yáng) 離子脂質(zhì)的疏水錨著區(qū)的主要功能是既為脂質(zhì)雙層提供足夠的流動(dòng)性，又能使脂質(zhì)雙層膜維持一定的剛性，以便為陽(yáng)離子脂質(zhì)體與體內(nèi)的脂質(zhì)融合創(chuàng)造條件。目前，許多公司都推出了商品化的脂質(zhì)體試劑，常用的有 Lipofection、 SA、 DOGS 及 DOTMA。結(jié)構(gòu)分析顯示，這種陽(yáng)離子聚多肽脂質(zhì)體為一電荷密集的、脂質(zhì)含量高、粒徑小于 100nm 的球形納米粒 [40,41]。該復(fù)合物的直徑在 m~ m 時(shí)，轉(zhuǎn)染效率最高；其次是直徑在 m~μ m 范圍內(nèi) , 直徑在 400nm 以下的復(fù)合物轉(zhuǎn)染效率最低。極性頭部的有效體積大小還受靜電排斥力和氫鍵的進(jìn)一步影響。起始時(shí)，脂質(zhì)體與 DNA 分子結(jié)合在核酸周圍形成群集的囊泡；當(dāng)達(dá)到臨界脂質(zhì)濃度時(shí)， DNA 誘導(dǎo)的脂質(zhì)體融合和脂質(zhì)體引起的 DNA 萎縮開始發(fā)生，最終形成了脂質(zhì)包裹的 DNA 復(fù)合物。這是因?yàn)榉蚊?xì)血管是陽(yáng)離子脂質(zhì)體 [32P]DNA 復(fù)合物靜脈注射后面臨的第一個(gè)“陷阱”。 ③ DNA 向核周圍的轉(zhuǎn)運(yùn) 當(dāng)陽(yáng)離子脂質(zhì)體 DNA 復(fù)合物從核內(nèi)體中脫離以后，如何將 DNA 轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核周圍成為一個(gè)新問題。對(duì)處于有絲分裂期的細(xì)胞而言，由于核膜已經(jīng)破裂，質(zhì)粒 DNA 容易進(jìn)入核內(nèi)；對(duì)于非分裂期細(xì)胞而言，質(zhì)粒 DNA 能否進(jìn)入核內(nèi)是轉(zhuǎn)染能否成功的關(guān)鍵。 ） mV。②電荷，糖基化陽(yáng)離子脂質(zhì)體 質(zhì)粒 DNA 復(fù)合物所帶的正電荷不能太高，否則不易與受體結(jié)合。載藥脂質(zhì)體進(jìn)入血管后，靶向作用于 RES 系統(tǒng)，這對(duì)于治療 RES 系統(tǒng)疾?。ㄈ鐑?nèi)臟利什曼病、細(xì)胞內(nèi)感染）有特殊的意義。該動(dòng)力學(xué)過程可以用經(jīng)典的化學(xué)反應(yīng)來(lái)描述（圖 67[53]）。 RP：識(shí)別蛋白； k1：脂質(zhì)體與 RP1結(jié)合的動(dòng)力學(xué)常數(shù)。 3．實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)循環(huán)的途徑 最初研究長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體主要是從生物學(xué)角度考慮，制備血循環(huán)中長(zhǎng)壽命的脂質(zhì)體。血漿中成分（例如調(diào)理素）更易于與疏水性表面結(jié)合， 調(diào)理作用可產(chǎn)生疏水性更強(qiáng)的表面，疏水性很強(qiáng)的粒子不需要被調(diào)理就可以被吞噬，因而提高表面親水性可以抑制調(diào)理作用。粒徑的大小可以用于控制微粒制劑的靶向性，同時(shí)粒徑大小也能影響對(duì)其進(jìn)行長(zhǎng)循環(huán)表面修飾的程度。國(guó)外學(xué)者提出的固體對(duì)蛋白質(zhì)排斥理論模型，對(duì)空間位阻、范德華力和親水作用都進(jìn)行了廣泛而深入的研究。 研究表明，用 PEG 及非離子表面活性劑包衣的脂質(zhì)體被肝、脾攝取減少，脂質(zhì)體在體內(nèi)循環(huán)時(shí)間延長(zhǎng)。某些帶正電荷粒子可在被肝攝取后重新分配到脾而不是肝。長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體目前主要有剛性脂質(zhì)體，表面修飾脂質(zhì)體和其它類型，這類脂質(zhì)體可能是因?yàn)槟承┠茏晕易R(shí)別的分子與脂質(zhì)體結(jié)合后，能起到保護(hù)脂質(zhì)體不被 RES 識(shí)別的作用（見圖 68[54]）。很明顯，脂質(zhì)體表面被糖脂或不同聚合物修飾后，生物分子與脂質(zhì)體的碰撞速率降低，可用公式來(lái)表示： F= P0PP / P0， F 為立體因子，與濃 度無(wú)關(guān)； PP 和 P0 分別表示長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體和脂質(zhì)體的碰撞幾率。盡管其化學(xué)結(jié)構(gòu)不同，但它們有一個(gè)共同點(diǎn)，即在脂質(zhì)體表面能形成一個(gè)親水的伸展 的分子拉鏈。這種快速而有效的清除包括兩個(gè)過程：首先，血漿成分（如血漿蛋白、脂蛋白、纖維蛋白、免疫蛋白、補(bǔ)體 C 等）包裹粒子而使之可被吞噬細(xì)胞識(shí)別即調(diào)理過程。圖 66 [52]進(jìn)一步說(shuō)明了不同類型的陽(yáng)離子脂質(zhì)體 DNA 復(fù)合 物小鼠靜脈注射后在組織中的靶向性及其轉(zhuǎn)染效率。 肝細(xì)胞唾液酸糖蛋白缺乏受體、巨噬細(xì)胞和肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞中的甘露糖受體特別適合于脂質(zhì)體介導(dǎo)的特異性基因轉(zhuǎn)移。 ） mV, 而 PC 為（ 177。 Xu 等 [46]認(rèn)為質(zhì)粒 DNA從陽(yáng)離子脂質(zhì)體 DNA 復(fù)合物的釋放發(fā)生于復(fù)合物與核內(nèi)體融合的時(shí)候；但也有人認(rèn)為，陽(yáng)離子脂質(zhì)體 DNA 復(fù)合物從核內(nèi)體中脫離出來(lái)時(shí)并未分解，質(zhì)粒 DNA 從復(fù)合物的釋放應(yīng)發(fā)生在此后的階段。在 DNA 從核內(nèi)體的脫離過程中，脂質(zhì)的融合起到十分重要的作用。盡管在血流中確實(shí)發(fā) 生脂質(zhì)復(fù)合物的聚集，但由于聚集體的直徑通常在 lμ m 以下，比正常的紅細(xì)胞體積還小，因此很可能通過細(xì)胞內(nèi)吞作用而被攝取，內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)的針對(duì)變性白蛋白的受體可能參與這一過程。這也是 DOPE 成為“脂質(zhì)伴侶”的原因?，F(xiàn)已證明在六方晶相脂質(zhì)的頭部，基因呈高度彎曲的形狀。 (1) 陽(yáng)離子脂質(zhì)體與基因形成復(fù)合物 質(zhì)粒 DNA 可以被包裹于脂質(zhì)體內(nèi)，或者與脂質(zhì)體表面借靜電作用形成復(fù)合物。同 PLL 相比，硫酸魚精蛋白的分子量?。?MW=4000； PLL 的 MW=18500）；分子中含有 21 個(gè)精氨酸殘基，帶有很強(qiáng)的正電荷；硫酸魚精蛋白是一種天然蛋白， FDA 批準(zhǔn)其作為肝素 誘導(dǎo)抗凝血作用的解毒劑。但眾多的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，利用病毒載體和脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移是最有前途的方法，后者已被美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)批準(zhǔn)為臨床基因治療的第一方案。含胺類基團(tuán)的極性頭部起著脂質(zhì)體與 DNA、脂質(zhì)體 DNA 復(fù)合物與細(xì)胞膜或細(xì)胞內(nèi)其它組分相互結(jié)合的作用；隔離區(qū)的鏈長(zhǎng)和鍵長(zhǎng)則影響陽(yáng)離子脂質(zhì)體與粘膜表面的相互作用，進(jìn)一步影響轉(zhuǎn)染效率；連接鍵決定了陽(yáng)離子脂質(zhì)體的化學(xué)和生物穩(wěn)定性，一般要求陽(yáng)離子脂質(zhì)體既有一定的化學(xué)穩(wěn)定性，又易在體內(nèi)被生物降解、減少細(xì)胞毒性。 陽(yáng)離子脂質(zhì)體 1．陽(yáng)離子脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)形式 陽(yáng)離子脂質(zhì)體通常由一種陽(yáng)離子親水脂分子和二油酰基磷脂酰乙醇胺（ DOPE）組成， DOPE 作為“脂質(zhì)伴侶”是形成穩(wěn)定的單脂雙層陽(yáng)離子脂質(zhì)體所必需的。 （ 2）小單層脂質(zhì)體（ small unilamellar vesicles， SUV） 這是具有脂質(zhì)雙分子層的最小單位，其大小根據(jù)介質(zhì)的離子強(qiáng)度和膜的脂質(zhì)組成不同而不同，因此作為藥物的載體受到限制。從圖中可以看出它們的一些基本特點(diǎn)，普通脂質(zhì)體一般呈中性，陽(yáng)離子脂質(zhì)體帶正電荷，通過單鍵、雙鍵和多重鍵結(jié)合；長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體主要由高分子物質(zhì)或葡萄糖醛酸等物質(zhì)修飾；免疫脂質(zhì)體是含有抗體或抗體片段的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。 2． 長(zhǎng)效性：脂質(zhì)體作為藥物的載體具有長(zhǎng)效作用。包封率受多種因素的影響，如：藥物在熔融脂質(zhì)中溶解度、藥物與載體在熔融時(shí)的相容性、 SLN的理化結(jié)構(gòu)、脂質(zhì)多晶型、勻質(zhì)溫度、水相乳化劑濃度等。 SLN 的毒性 SLN 是用毒性低，生物相容性好的脂質(zhì)材料為載體，同聚合物納米粒相比， SLN 的毒性大大降低。這意味著溫度越高、表面活性劑濃度越大，納米粒的載藥量越低。這證明 SLN 可以應(yīng)用于藥物的緩控釋制劑，并通過改變脂質(zhì)、表面活性劑濃度和制備時(shí)的一些參數(shù)（如溫度）來(lái)調(diào)節(jié)藥物釋放特性。大多數(shù)體外釋放機(jī)理的研究都是由 Mehnert 等 [3133]以丁卡因和依托度酸為模型藥物完成的。 多晶型脂質(zhì)的晶型也是決定載藥量的一個(gè)重要因素。 SLN 藥物的釋放 影響 SLN 載藥量的因素很多，其中主要有：藥物在熔融油相中的溶解度；藥物熔融物和脂質(zhì)基質(zhì)熔融物的可混合性；固態(tài)脂質(zhì)基質(zhì)的物理和化學(xué)結(jié)構(gòu)；脂質(zhì)材料的晶型等。 4．肺部給藥 迄今為止，脂質(zhì)納米粒的肺部給藥研究報(bào)道不多。這種體系的流變學(xué)特性和傳統(tǒng)的皮膚用藥相似。 SLN 被認(rèn)為是替代脂質(zhì)體的新一代載藥系統(tǒng)。一般認(rèn)為，酸性的、高離子強(qiáng)度的胃液微環(huán)境，易導(dǎo)致納米粒聚合。 喜樹堿受酸堿影響有兩種存在形式：有抗腫瘤活性的內(nèi)酯型與無(wú)活性的羧酸鹽型。脂質(zhì)液滴（納米乳）轉(zhuǎn)變成 為固體（ SLN）以后，藥物的擴(kuò)散系數(shù)減小，從而減慢了藥物的釋放。一般而言，極性微粒不易被吞噬，ζ電位越高，吞噬越少；表面雙親或親水性的納米粒在血中循環(huán)時(shí)間長(zhǎng)。但是對(duì)于膠態(tài) 藥物載體來(lái)說(shuō)，影響藥物穩(wěn)定性的因素很多，而且在相同條件下， SLN 分散體的表面積比納米乳要大的多，這是因?yàn)?SLN 粒子的形狀是非球形的。在最近的一項(xiàng)十六圖 61 不同粒徑的四丁酚醛穩(wěn)定的三肉豆蔻酸甘油酯 SLN 的 DSC 圖 t / ℃ 圖 62 不同粒徑的四丁酚醛穩(wěn)定的三肉豆蔻酸甘油酯 SLN 的 X射線衍射圖 強(qiáng) 度 通 道 176 酸鯨蠟（醇）酯 SLN的電子自旋共振（ ESR）的研究中發(fā)現(xiàn)，親脂性的硝基化合物只位于膠束中，而不是在脂質(zhì)中。但在一般情況下，該體系中加入適量的粒子型或者非離子型表面活性劑，如甘膽酸鈉、四丁醛或 poloxamer 則可防止膠凝。 對(duì)于膠體分散體系來(lái)講，粒徑和熔化溫度的關(guān)系可用 GibbsThomson 方程來(lái)描述： T 是粒徑為 r 時(shí)的熔化溫度， T0 為脂質(zhì)在相同外壓下的熔化溫度，γ sl 為固－液的界面張力， VS為固體的體積，Δ Hfus 為熔化焓。 由于甘膽酸鈉穩(wěn)定的 SLN α 晶型的穩(wěn)定性較高，因此可以用來(lái)研究經(jīng)過多晶型轉(zhuǎn)化后基質(zhì)的結(jié)構(gòu)及粒子的形狀。 DSC 和 X射線衍射廣泛地應(yīng)用于考察脂質(zhì)的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。同塊體材料相比，將脂肪酸酯納米粒結(jié)晶轉(zhuǎn)變成較穩(wěn)定的α 型時(shí)間較長(zhǎng)，但結(jié)晶后，其立即轉(zhuǎn)變成β ’型，表明脂肪酸酯具有較低的結(jié)晶溫度。單脂肪酸甘油酯膠體體系比塊 體材料轉(zhuǎn)變成β 型的速度更快，可能是由于較小的結(jié)晶區(qū)域具有更大的體表面積之比而導(dǎo)致晶格弛豫。這是因?yàn)殚L(zhǎng)鏈脂肪酸可作為結(jié)晶中心使過冷態(tài)的結(jié)晶溫度提高。主要是由于高溫、高剪切力和脂質(zhì)的部分熔化，易造成粒子的團(tuán)聚。 冷凍的過程會(huì)影響晶體的結(jié)構(gòu)和凍干粉的性質(zhì)。冷凍防護(hù)劑的保護(hù)作用由大到小為：海藻糖→蔗糖→葡萄糖和麥芽糖。但是在凍干過程中有兩種相變會(huì)影響其穩(wěn)定性。對(duì)濕熱蒸汽滅菌和γ射線照射所導(dǎo)致的化學(xué)降解研究并不多，但需要指出的是，降解并不總是表現(xiàn)為粒徑的增大。濕熱蒸汽滅菌對(duì)粒子的 zeta電位 影響不大。眾所周知，這種類型的乳化劑，溫度升高使乙二醇鏈脫水，導(dǎo)致了粒子保護(hù)層的厚度減小，粒子容易聚結(jié) [12]。濕熱滅菌法是一種常 用且可靠的滅菌方法，它曾經(jīng)用于脂質(zhì)體的滅菌，發(fā)現(xiàn)加溫導(dǎo)致樣品物理穩(wěn)定性的下降，經(jīng)滅菌后都出現(xiàn)了不同程度的團(tuán)聚。 170 （ 3）乳勻壓力與循環(huán)次數(shù)的影響 如果以 Poloxamer188 為穩(wěn)定劑制備三月桂酸甘油酯 SLN, 最佳條件為 50MPa 3 次 ,以后粒徑隨乳勻壓力和循環(huán)次數(shù)的增加反而明顯變大；使用 Lipoid S75 為乳化劑，操作壓力應(yīng)提高，最佳條件為150MPa 3。當(dāng)使用磷脂 甘膽酸鈉為乳化劑時(shí)，微乳法得到的三棕櫚酸甘油酯 SLN 的粒徑遠(yuǎn)小于熔融 乳勻工藝，但以磷脂 四丁酚醛為乳化劑所制得的 SLN 粒徑遠(yuǎn)大于高壓乳勻法所制得的 SLN 的粒徑，這可能與四丁酚醛在較高溫度下乳化能力較強(qiáng)有關(guān) [10]。一般來(lái)說(shuō)，用高壓乳勻制備的 SLN 粒徑大小是 50nm，而用高剪切乳化制備的 SLN 則在 200nm 左右。但如果用磷脂和非離子型表面活性劑作為乳化劑，則高壓乳勻法要優(yōu)于乳化蒸發(fā)法。降溫速度快可以促使脂質(zhì)快速結(jié)晶并避免納米粒聚集。微乳一方面具有乳液的一些性質(zhì)（如可以用激光光散 射法測(cè)量它的粒徑），另一方面它又具有真溶液的一些性質(zhì)（如藥物在微乳中有一定的飽和濃度，而不是像乳劑那樣具有一定的油 /水分配比例）。然后將它們和含表面活性劑的冷凍溶液在低于脂質(zhì)熔點(diǎn) 5℃ ~10℃以下高壓勻質(zhì)。并且雖然乳勻的步