【正文】 少。這種情況是由于乳化劑poloxamer空間穩(wěn)定性下降引起 。 滅菌能使包封藥物的 SLN的穩(wěn)定性降低。這些結(jié)果表明藥物的加入，不但能降低體系的穩(wěn)定性，而且改變了乳化層的性質(zhì)。 SLN脂質(zhì)（ w=%）由硬脂酸、廿二碳烷酸或 Acidan N12（單硬脂酸單檸檬酸甘油二酯）組成，乳化劑由Epikuron 200（ 95%大豆卵磷脂）和牛去氧膽酸鹽組成，將 SLN分散在 2%海藻糖溶液或 2% poloxamer 188溶液中，在 121℃下濕熱蒸汽滅菌 15min。 一年以后所有體系的 171 粒徑均增大 ， Acidan N12 SLN增大到 350nm，廿二碳烷酸 SLN增大到 120nm，硬脂酸 SLN增大到 450nm，但是沒(méi)有微米級(jí)的粒子出現(xiàn)。 γ射線照射適用于對(duì)溫度敏感的樣品。濕熱蒸汽滅菌的溫度控制在 121℃時(shí)，粒徑增大的幅度比γ射線照射的要大；但在 110℃時(shí)，粒徑增大的幅度比γ 射線照射的要小 [14]。藥物降解的程度和化學(xué)反應(yīng)有關(guān)。因此樣品經(jīng)照射后，可能出現(xiàn)脂質(zhì)雙層組成的改變。有的配方如某些磷脂或自由脂肪酸對(duì)粒子有保護(hù)作用，但是會(huì)引起毒性。 5．干燥 盡管有文獻(xiàn)報(bào)道 SLN的水溶液分散體的粒徑能穩(wěn)定 12~36個(gè) 月，但由于 SLN分 散體是熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，通常在短時(shí)間里就出現(xiàn)粒徑的增大、粒子聚合甚至膠凝的現(xiàn)象。另外 SLN分散液干燥后，可將藥物制成固體制劑如片劑、膠囊等，可以增加藥物的給藥方式和給藥途徑。 （ 1）冷凍干燥法 樣品經(jīng)冷凍干燥變成固態(tài)后，具有更好的化學(xué)和物理穩(wěn)定性。第一，在冷凍干燥過(guò)程 中從水性分散體變成粉末時(shí)，由于樣品的滲透壓和 pH值的改變，可能會(huì)引起不穩(wěn)定問(wèn)題；第二，再增溶作用，粒子由于處在一個(gè)低含水量、高粒子濃度、高滲透壓的環(huán)境中，易發(fā)生聚合。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng) SLN 分散體的脂質(zhì)含量不超過(guò) 5%時(shí)，脂質(zhì)粒子的直接接觸減少，有更高的升華速度和更高的比表面 積，可以有效抑制粒子的聚合。常用的冷凍防護(hù)劑有山梨醇、甘露糖、海藻糖、葡萄糖和聚乙烯吡咯烷酮等。一般來(lái)講，冷凍防護(hù)劑的濃度 在 10%~15%之間， SLN 的平均粒徑和粒徑分布在冷凍干燥－再分散試驗(yàn)后，平均粒徑一般增大 ~ 倍，沒(méi)有冷凍防 護(hù)劑的樣品的粒徑增大得更多。以海藻糖的效果最好，它可以充分阻止粒 172 子的聚合和藥物的滲漏。冷凍防護(hù)劑在乳勻之前加入效果最好，平均粒徑在凍干過(guò)程中幾乎不發(fā) 生改變。 載藥的 SLN 通過(guò)冷凍干燥有可能使其穩(wěn)定性大大降低，這可能與游離的藥物分子有關(guān)。因 此提高藥物的包封率尤為重要 [17]。冷凍的的速度取決于特定的樣品和條件。晶體的大小是影響冷凍干燥過(guò)程中升華速度的關(guān)鍵因素。緩慢冷卻可以形成大晶體和自由的升華物，但是常常會(huì)增強(qiáng)冷凍所導(dǎo)致的不穩(wěn)定現(xiàn)象。 （ 2）噴霧干燥 噴霧干燥比冷凍干燥法經(jīng)濟(jì)，但較少用 于 SLN 體系。只有當(dāng)脂質(zhì)熔點(diǎn)大于 70℃，冷凍防護(hù)劑和脂質(zhì)都能在噴霧干燥過(guò)程中保持 SLN 粒徑大 小不變時(shí)才考慮采用此法 [18]。通過(guò)定量的高分辨 1HNMR[19]測(cè)定發(fā)現(xiàn)，當(dāng)熔融乳化納米粒冷卻到其結(jié)晶溫度以下時(shí)，脂肪酸酯分子仍有很強(qiáng)的流動(dòng)性。三月桂酸甘油酯（ Tmelt=47℃）納米分散體于冰箱中保存數(shù)年后，仍然保持過(guò)冷態(tài)形式（儲(chǔ)存兩年后，發(fā)現(xiàn)僅有 2％的結(jié)晶體）。對(duì)于膠體體系，三脂肪酸甘油酯的熔化與結(jié)晶的溫度與單脂肪酸甘油酯不同，混合脂肪酸甘油酯和高熔點(diǎn)的脂肪酸酯的納米粒形成過(guò)冷態(tài)的傾向較小。加入藥物也會(huì)影響過(guò)冷現(xiàn)象。而對(duì)納米 173 體系來(lái)講，其結(jié)晶的溫度要低，并且粒徑對(duì)結(jié)晶的溫度影響也小。 2． 多晶型轉(zhuǎn)化及老化現(xiàn)象 制備固體脂質(zhì)納米粒時(shí)，納米分散體的溫度必須降低到三脂肪酸甘油酯結(jié)晶溫度以下，在形成納米混懸液時(shí)，結(jié)晶并不是最后步驟，因?yàn)槿舅岣视王ツz體分散體結(jié)晶后通常還要經(jīng)過(guò)一個(gè)多晶型轉(zhuǎn)化過(guò)程。然而，多晶型的轉(zhuǎn)變可嚴(yán)重影響納米分散體的性能。另外，由于膠體分散體具有較高的能量，能夠提供其晶型轉(zhuǎn)化所需要的能量。同塊體材料相比，短鏈脂肪酸甘油酯納米粒晶型轉(zhuǎn)變的速度比長(zhǎng)鏈脂肪酸甘油酯快 [20]。例如脂肪酸酯Witepsol H4 Witepsol E85 β ’晶型最穩(wěn)定，中間態(tài)β 1 或β 2 型也被認(rèn)為是穩(wěn)定的。 室溫下，三脂肪酸甘油酯納米粒比塊體材料更容易轉(zhuǎn)變成穩(wěn)定的晶型，這表明膠體分散體具有更高的動(dòng)力學(xué)特性。當(dāng)脂肪酸酯結(jié)晶溫度明顯低于α 型熔化溫度時(shí)，α 型被認(rèn)為是最穩(wěn)定的。除了多晶型現(xiàn)象，老化過(guò)程對(duì)脂質(zhì)的晶型也有影響 [21]。 脂質(zhì)結(jié)晶的完全程度及晶型轉(zhuǎn)化與藥物的包封和釋放有密切的聯(lián)系。晶型的轉(zhuǎn)變有時(shí)會(huì)極緩慢。 DSC 應(yīng)用的原理是不同的脂質(zhì)晶型具有不同的熔點(diǎn) 和熔解焓。 3． 表面活性劑的影響 表面活性劑的加入能顯著影響三脂肪酸甘油酯的晶型轉(zhuǎn)變。當(dāng)以親水性表面活性劑作為穩(wěn)定劑時(shí)，它主要分布在水相和粒子表面上。但對(duì)其界面的相變動(dòng)力學(xué)的影響對(duì)比核的影響更大。例如 tripalminSLN，采用熱勻法制備時(shí)，當(dāng)緩慢冷卻到室溫時(shí)，其以普通的α 晶型形式存在， SAXD 和 WAXD 顯示衍射峰較強(qiáng)，迅速冷卻時(shí)，所得到的α 晶型 WAXD 強(qiáng)而 SAXD弱。這些性質(zhì)對(duì)于研究該膠體體系的穩(wěn)定性及藥物的包封率有很重要的意義 [22]。 DSC 曲線顯示粒徑越小，其特征峰越寬，并向低溫方向位移；對(duì)于粒徑較小的單脂肪酸甘油酯膠體體系來(lái)講，在低溫范圍內(nèi)還出現(xiàn)了一些較強(qiáng)的特征峰。如果該體系含有其他的化合物，則這些吸收峰變寬，并且不易檢測(cè)到（圖 61[23]）。 但是該方程對(duì)于那些離散的熔化轉(zhuǎn)變和當(dāng)出現(xiàn)一系列尖銳的特征吸收峰（超過(guò) 10 個(gè)）時(shí)不能很好的解釋，以及那些逐步熔化過(guò)程中所出現(xiàn)的一些細(xì)微變化也不適用。廣角衍射在 和 ~ 的范圍變化顯著。 175 5． 形成凝膠 同脂質(zhì) o/w 乳液相比， SLN 體系中脂質(zhì)的含量很高（ 5%~10％）。在冷卻貯存過(guò)程中，它容易形成半固體導(dǎo)致膠凝。 DSC和 X射線衍射研究表明，凝膠是由三硬脂酸甘油酯的三維網(wǎng)狀結(jié)晶所構(gòu)成 [24]。穩(wěn)定劑并不僅僅局限于作用在脂質(zhì)表面，也可作用于水相。卵磷脂可以形成脂質(zhì)體，并且在納米乳中能檢測(cè)到。膠束、混合膠束和脂質(zhì)體因?yàn)橛羞x擇性藥物結(jié)合位點(diǎn)，因此可以增加藥物的溶解度。 僅僅描述幾種膠態(tài)是不 足以表征膠態(tài)脂質(zhì)分散體結(jié)構(gòu)的，因?yàn)榫退幬锏姆€(wěn)定性和藥物的釋放來(lái)說(shuō)，膠態(tài)之間的動(dòng)態(tài)變化非常重要。如易水解的藥物分子在水中比在脂質(zhì)中更容易溶解，更容易富集在粒子的表面。不穩(wěn)定的藥物與水接觸后很快水解，因此藥物在不同環(huán)境下的分配平衡很容易改變。提高基質(zhì)的粘度能降低藥物在載體中的擴(kuò)散系數(shù)，因此 SLN 比納米乳更有優(yōu)勢(shì)。有人用 ESR 研究了 乳酸羥基乙酸共聚物（ PLGA）和幾種脂質(zhì)基質(zhì)，結(jié)果表明 PNP 能更有效的穩(wěn)定藥物分子。但這并不是說(shuō) SLN 不能保護(hù)藥物不受降解，因?yàn)檫m當(dāng)?shù)谋砻婊钚詫泳湍軐?duì)藥物起到很好的保護(hù)作用。血漿中的多種成分如血漿蛋白、脂蛋白、免疫蛋白、補(bǔ)體 C 蛋白等也吸附到納米粒上，參與調(diào)理過(guò)程。納米粒的表面電荷、親水親油性、粒徑大小決定了納米粒被血漿中特異性 IgG 及 C3b 片段吸附或包裹的數(shù)量，進(jìn)而決定在體內(nèi)的代謝過(guò)程。另外粒徑大小與靶向性有關(guān)，大于 5μ m 的粒子被肺的毛細(xì)血管床捕獲，小粒子被 RES 吞噬；大于250nm 的納米 粒靶向脾，小于 250nm 的納米粒靶向體循環(huán)，小于 150nm 的納米粒靶向骨髓。但是研究最多的還是靜脈注射?？诜o藥主要是通過(guò)派伊爾結(jié)進(jìn)入體循環(huán)，這樣必須考慮納米粒在胃腸道的穩(wěn)定性問(wèn)題，防止被胃酸以及脂肪酶和酯酶降解。 1．注射給藥 SLN 最初是為靜脈注射的靶向控釋藥物而設(shè)計(jì)。粒徑的分布對(duì)于靜脈注射用藥來(lái)說(shuō)是一個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題，它可以導(dǎo)致毛細(xì)血管堵塞，造成脂肪栓塞等致死性的嚴(yán)重問(wèn)題。人體可以耐受一定數(shù)量的微米級(jí)的大液滴，但是這種情況不能適用 SLN，因?yàn)?SLN 不能變形，一旦粒徑超過(guò)毛細(xì)血管直徑，血管栓塞現(xiàn)象必然發(fā)生。固體脂質(zhì)的不可變形性，以及在 注射過(guò)程中可能發(fā)生凝膠化現(xiàn)象，是 SLN 分散體用于靜脈注射給藥時(shí)在臨床上遇到的主要問(wèn)題。 大鼠經(jīng)靜脈注射阿霉素 SLN后，藥代動(dòng)力學(xué)研究表明，和普通阿霉素注射液相比，血藥濃度更高；藥物在體內(nèi)的分布方面， SLN在肺部，脾臟和腦中的濃度較高，而普通阿霉素注射液主要分布在肝臟和腎臟。楊時(shí)成等以Poloxamer188為隱性修飾劑，制備了 197nm的喜樹(shù)堿 硬酯酸 SLN。在 ，喜樹(shù)堿內(nèi)酯環(huán)的開(kāi)環(huán)半衰期分別為： 。納米粒與普通溶液相比，藥時(shí)曲線下面積（ AUC）提高 5倍，平均滯留時(shí)間（ MRT）延長(zhǎng) 4倍，在 RES與非 RES器官的分布均明顯提高。通過(guò)優(yōu)化乳化劑和脂質(zhì)的種 類和劑量，可以得到在胃腸道中穩(wěn)定的 SLN。但是實(shí)際上納米粒的聚合并不是決定因素。 Yang等 [28]研究了小鼠口服喜樹(shù)堿 硬脂酸 SLN后的藥代動(dòng)力學(xué)，發(fā)現(xiàn)體內(nèi)血循環(huán)和組織中藥物濃度出現(xiàn)兩個(gè)峰， 5min~15min出現(xiàn)的第一個(gè)峰為突釋效應(yīng)所致， 3h后出現(xiàn)的第二個(gè)峰為隨著硬脂酸的降解及 SLN被轉(zhuǎn)運(yùn)至胃腸道壁而逐漸釋出的藥物峰。采用溶劑 擴(kuò)散法制備環(huán)孢素 A硬脂酸 SLN，粒徑 ，包封率 %。 3． 透皮吸收 固體脂質(zhì)納米粒局部給藥具有很大的開(kāi)發(fā)潛力和市場(chǎng)前景。和脂質(zhì)體相似， SLN 是由生物耐受性良好的材料組成，其最突出的優(yōu)點(diǎn)在于它具有固態(tài)基質(zhì)，這樣可以保護(hù)化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定的物質(zhì)不被分解破壞，并可以調(diào)節(jié)藥物的釋放。載 藥量低和低粘度對(duì)于透皮制劑來(lái)說(shuō)都是不利的。 SLN分散體的固體脂質(zhì)含量升高后，會(huì)變成一種半固體，凝膠樣的性狀，它可以直接涂抹在皮膚上，不需要做進(jìn)一步的處理。但是鯨蠟醇十六酸酯制成的 SLN在脂質(zhì)含量高達(dá) 30%~40%時(shí)，竟然保持了膠態(tài)粒 子的大小，且系統(tǒng)的可塑性也有很大增加。以上結(jié)果表明，可以一步生產(chǎn)出脂質(zhì)含量高、粒徑小的透皮用 SLN 體系。 SLN 的一個(gè)明顯優(yōu)點(diǎn)是組成成分都是生物相容性原料，避免了對(duì)皮膚的刺激和毒性。 SLN 在皮膚上涂布后，隨著水分的損失和脂質(zhì)的變形， SLN 的結(jié)構(gòu)將發(fā)生改變。這種致密膜的形成可以促進(jìn)皮膚的 閉合作用，提高藥物對(duì)皮膚的穿透率。為了證明脂質(zhì)納米粒肺部給藥的可行性，有人將脂質(zhì)納米粒混懸液霧化后，再收集霧化后的顆粒并分析其中納米粒的粒徑分布。另外，脂質(zhì)納米粒粉末可以制成干粉吸入劑，在噴霧干燥過(guò)程中，可以使用乳糖作為保護(hù)劑。與聚合物納米粒相比，脂質(zhì)納米粒的降解速度較 快。肺部的粒子易于被巨噬細(xì)胞吞噬，因此可以用脂質(zhì)納米粒來(lái)治療 RES 系統(tǒng)的感染。獲得足夠載藥量的先決條件是藥物在脂質(zhì)熔融物中溶解度足夠大 [19]。可以通過(guò)加入增溶劑來(lái)增加藥物在脂質(zhì)熔融物中的溶解度，某些脂質(zhì)如甘油單酯和雙酯，也可以促進(jìn)藥物的溶解。復(fù)雜的脂質(zhì)如甘油單酯、甘油雙酯和甘油三酯混合物含有不同長(zhǎng)度的脂肪酸鏈，它們可以形成具有大量缺陷的晶格，從而形成很多可以容納藥物的空間。因此，通過(guò) NMR， X射線衍射和其它新技術(shù)深入 了解脂質(zhì)的各方面性質(zhì)，可以幫助我們獲得載藥量更高的 SLN。納米粒中脂質(zhì)的晶型和常規(guī)狀態(tài)下不太一樣。脂質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)楦€(wěn)定的晶形后，晶格變得比較完整，包封藥物的效率變得很低。 SLN 體系中脂質(zhì)結(jié)晶存在一定數(shù)量的α構(gòu)型，保存期內(nèi)仍然保持一定的數(shù)量。 人們對(duì) SLN 如何包封藥物已經(jīng)進(jìn)行了很多研究，但是對(duì) SLN 藥物釋放機(jī)理的研究卻很少。根據(jù)他們發(fā)表的數(shù)據(jù)（圖 63），固體脂質(zhì)納米粒載藥方式具有以下三種模型： 1． 固態(tài)溶液：冷勻法沒(méi)有采用表面活性劑或采用對(duì)藥物沒(méi)有增溶作用的表面活性劑，制得的脂質(zhì)納米粒是一種固態(tài)溶液（即藥物以分子分散于脂質(zhì)基質(zhì)中）； 2． 核 殼結(jié)構(gòu)，藥物富集于殼中：當(dāng)藥物的沉淀速度小于脂質(zhì)結(jié) 晶的速度，這時(shí)會(huì)形成一個(gè)藥物富集的殼； 3． 核 殼結(jié)構(gòu)，藥物富集于核中：藥物溶解在脂質(zhì)熔融物中的量達(dá)到或接近于它的飽和藥物量時(shí)，冷卻時(shí)藥物的沉淀先于脂質(zhì)的結(jié)晶，就會(huì)形成一個(gè)藥物富集的核。脂質(zhì)膜的藥物濃度等于結(jié)晶溫度時(shí)脂質(zhì)中藥物的溶解度。 圖 63 藥物在 SLN中的分布模型圖 固態(tài)溶液 載藥殼 脂質(zhì)核 藥物分子分散體 脂質(zhì)核 藥物 /載藥核 180 在脂質(zhì)納米粒的研究中遇到的主要問(wèn)題是藥 物的突釋問(wèn)題。但以脫氫皮質(zhì)醇為模型藥物時(shí)，可以制備具有一定緩釋作用的納米粒。在體外，納米粒持續(xù)釋放藥物的時(shí)間可長(zhǎng)達(dá) 5~7 周。釋放初期的突釋劑量對(duì)藥物的快速起效是有利的。用熱勻法制備的納米粒與用冷勻法制備的納米粒相比，藥物釋放具有很大的突釋效應(yīng)，但兩者的藥物后期釋放速率相似。藥物在水中的溶解度越大，則重新溶解到水相中的藥物量越多。將制得的初乳冷卻，隨著水相溫度的降低，藥物在水中的溶解度也隨之下降，這時(shí)部分藥物又會(huì)重新分配到油相。降低分散體系的溫度會(huì)進(jìn)一步降低藥物在水相中的溶解度，已經(jīng)結(jié)晶的脂質(zhì)核不能夠再容納藥物，藥物則在脂質(zhì)核的外層或表面聚集。因此，藥物突釋的程度可以通過(guò)制備過(guò)程中的溫度和表面活性劑的濃度來(lái)調(diào)節(jié)，溫度增加或表面活性劑濃度的增大會(huì)使藥物的突釋效應(yīng)增強(qiáng)。為了避免藥物 的突釋效應(yīng)，還可以不采用表面活性劑或采用對(duì)藥物沒(méi)有增溶作用的表面活性劑。以 HL60 細(xì)胞和人粒性白細(xì)胞的生存情況為指標(biāo)，考察不同納米載藥體系的體外細(xì)胞毒性，發(fā)現(xiàn)SLN 的毒性比 PLGA 納米粒的毒性低 90%，比 PBCA 納米粒低 99%。當(dāng)使用親水性的 Poloxamine 908 和 Poloxamer 407 對(duì) SLN 進(jìn)行表面修飾后靜注給藥，可降低 RES 巨噬細(xì)胞的吞噬，延長(zhǎng)藥物在血液中的循環(huán)時(shí)間，與