【正文】 少。這種情況是由于乳化劑poloxamer空間穩(wěn)定性下降引起 。 滅菌能使包封藥物的 SLN的穩(wěn)定性降低。這些結(jié)果表明藥物的加入，不但能降低體系的穩(wěn)定性，而且改變了乳化層的性質(zhì)。 SLN脂質(zhì)（ w=%）由硬脂酸、廿二碳烷酸或 Acidan N12（單硬脂酸單檸檬酸甘油二酯）組成，乳化劑由Epikuron 200（ 95%大豆卵磷脂）和牛去氧膽酸鹽組成，將 SLN分散在 2%海藻糖溶液或 2% poloxamer 188溶液中，在 121℃下濕熱蒸汽滅菌 15min。 一年以后所有體系的 171 粒徑均增大 ， Acidan N12 SLN增大到 350nm，廿二碳烷酸 SLN增大到 120nm，硬脂酸 SLN增大到 450nm，但是沒有微米級的粒子出現(xiàn)。 γ射線照射適用于對溫度敏感的樣品。濕熱蒸汽滅菌的溫度控制在 121℃時，粒徑增大的幅度比γ射線照射的要大；但在 110℃時，粒徑增大的幅度比γ 射線照射的要小 [14]。藥物降解的程度和化學(xué)反應(yīng)有關(guān)。因此樣品經(jīng)照射后，可能出現(xiàn)脂質(zhì)雙層組成的改變。有的配方如某些磷脂或自由脂肪酸對粒子有保護(hù)作用，但是會引起毒性。 5．干燥 盡管有文獻(xiàn)報道 SLN的水溶液分散體的粒徑能穩(wěn)定 12~36個 月，但由于 SLN分 散體是熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，通常在短時間里就出現(xiàn)粒徑的增大、粒子聚合甚至膠凝的現(xiàn)象。另外 SLN分散液干燥后，可將藥物制成固體制劑如片劑、膠囊等，可以增加藥物的給藥方式和給藥途徑。 （ 1）冷凍干燥法 樣品經(jīng)冷凍干燥變成固態(tài)后，具有更好的化學(xué)和物理穩(wěn)定性。第一，在冷凍干燥過程 中從水性分散體變成粉末時，由于樣品的滲透壓和 pH值的改變，可能會引起不穩(wěn)定問題；第二，再增溶作用，粒子由于處在一個低含水量、高粒子濃度、高滲透壓的環(huán)境中，易發(fā)生聚合。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng) SLN 分散體的脂質(zhì)含量不超過 5%時，脂質(zhì)粒子的直接接觸減少，有更高的升華速度和更高的比表面 積，可以有效抑制粒子的聚合。常用的冷凍防護(hù)劑有山梨醇、甘露糖、海藻糖、葡萄糖和聚乙烯吡咯烷酮等。一般來講，冷凍防護(hù)劑的濃度 在 10%~15%之間， SLN 的平均粒徑和粒徑分布在冷凍干燥－再分散試驗后，平均粒徑一般增大 ~ 倍，沒有冷凍防 護(hù)劑的樣品的粒徑增大得更多。以海藻糖的效果最好，它可以充分阻止粒 172 子的聚合和藥物的滲漏。冷凍防護(hù)劑在乳勻之前加入效果最好，平均粒徑在凍干過程中幾乎不發(fā) 生改變。 載藥的 SLN 通過冷凍干燥有可能使其穩(wěn)定性大大降低，這可能與游離的藥物分子有關(guān)。因 此提高藥物的包封率尤為重要 [17]。冷凍的的速度取決于特定的樣品和條件。晶體的大小是影響冷凍干燥過程中升華速度的關(guān)鍵因素。緩慢冷卻可以形成大晶體和自由的升華物，但是常常會增強(qiáng)冷凍所導(dǎo)致的不穩(wěn)定現(xiàn)象。 （ 2）噴霧干燥 噴霧干燥比冷凍干燥法經(jīng)濟(jì)，但較少用 于 SLN 體系。只有當(dāng)脂質(zhì)熔點(diǎn)大于 70℃，冷凍防護(hù)劑和脂質(zhì)都能在噴霧干燥過程中保持 SLN 粒徑大 小不變時才考慮采用此法 [18]。通過定量的高分辨 1HNMR[19]測定發(fā)現(xiàn)，當(dāng)熔融乳化納米粒冷卻到其結(jié)晶溫度以下時，脂肪酸酯分子仍有很強(qiáng)的流動性。三月桂酸甘油酯（ Tmelt=47℃）納米分散體于冰箱中保存數(shù)年后，仍然保持過冷態(tài)形式（儲存兩年后，發(fā)現(xiàn)僅有 2％的結(jié)晶體）。對于膠體體系，三脂肪酸甘油酯的熔化與結(jié)晶的溫度與單脂肪酸甘油酯不同，混合脂肪酸甘油酯和高熔點(diǎn)的脂肪酸酯的納米粒形成過冷態(tài)的傾向較小。加入藥物也會影響過冷現(xiàn)象。而對納米 173 體系來講，其結(jié)晶的溫度要低，并且粒徑對結(jié)晶的溫度影響也小。 2． 多晶型轉(zhuǎn)化及老化現(xiàn)象 制備固體脂質(zhì)納米粒時，納米分散體的溫度必須降低到三脂肪酸甘油酯結(jié)晶溫度以下，在形成納米混懸液時，結(jié)晶并不是最后步驟，因為三脂肪酸甘油酯膠體分散體結(jié)晶后通常還要經(jīng)過一個多晶型轉(zhuǎn)化過程。然而，多晶型的轉(zhuǎn)變可嚴(yán)重影響納米分散體的性能。另外，由于膠體分散體具有較高的能量，能夠提供其晶型轉(zhuǎn)化所需要的能量。同塊體材料相比，短鏈脂肪酸甘油酯納米粒晶型轉(zhuǎn)變的速度比長鏈脂肪酸甘油酯快 [20]。例如脂肪酸酯Witepsol H4 Witepsol E85 β ’晶型最穩(wěn)定，中間態(tài)β 1 或β 2 型也被認(rèn)為是穩(wěn)定的。 室溫下，三脂肪酸甘油酯納米粒比塊體材料更容易轉(zhuǎn)變成穩(wěn)定的晶型，這表明膠體分散體具有更高的動力學(xué)特性。當(dāng)脂肪酸酯結(jié)晶溫度明顯低于α 型熔化溫度時，α 型被認(rèn)為是最穩(wěn)定的。除了多晶型現(xiàn)象，老化過程對脂質(zhì)的晶型也有影響 [21]。 脂質(zhì)結(jié)晶的完全程度及晶型轉(zhuǎn)化與藥物的包封和釋放有密切的聯(lián)系。晶型的轉(zhuǎn)變有時會極緩慢。 DSC 應(yīng)用的原理是不同的脂質(zhì)晶型具有不同的熔點(diǎn) 和熔解焓。 3． 表面活性劑的影響 表面活性劑的加入能顯著影響三脂肪酸甘油酯的晶型轉(zhuǎn)變。當(dāng)以親水性表面活性劑作為穩(wěn)定劑時，它主要分布在水相和粒子表面上。但對其界面的相變動力學(xué)的影響對比核的影響更大。例如 tripalminSLN，采用熱勻法制備時，當(dāng)緩慢冷卻到室溫時，其以普通的α 晶型形式存在， SAXD 和 WAXD 顯示衍射峰較強(qiáng)，迅速冷卻時，所得到的α 晶型 WAXD 強(qiáng)而 SAXD弱。這些性質(zhì)對于研究該膠體體系的穩(wěn)定性及藥物的包封率有很重要的意義 [22]。 DSC 曲線顯示粒徑越小，其特征峰越寬，并向低溫方向位移；對于粒徑較小的單脂肪酸甘油酯膠體體系來講，在低溫范圍內(nèi)還出現(xiàn)了一些較強(qiáng)的特征峰。如果該體系含有其他的化合物，則這些吸收峰變寬，并且不易檢測到（圖 61[23]）。 但是該方程對于那些離散的熔化轉(zhuǎn)變和當(dāng)出現(xiàn)一系列尖銳的特征吸收峰（超過 10 個）時不能很好的解釋，以及那些逐步熔化過程中所出現(xiàn)的一些細(xì)微變化也不適用。廣角衍射在 和 ~ 的范圍變化顯著。 175 5． 形成凝膠 同脂質(zhì) o/w 乳液相比， SLN 體系中脂質(zhì)的含量很高（ 5%~10％）。在冷卻貯存過程中，它容易形成半固體導(dǎo)致膠凝。 DSC和 X射線衍射研究表明，凝膠是由三硬脂酸甘油酯的三維網(wǎng)狀結(jié)晶所構(gòu)成 [24]。穩(wěn)定劑并不僅僅局限于作用在脂質(zhì)表面，也可作用于水相。卵磷脂可以形成脂質(zhì)體，并且在納米乳中能檢測到。膠束、混合膠束和脂質(zhì)體因為有選擇性藥物結(jié)合位點(diǎn)，因此可以增加藥物的溶解度。 僅僅描述幾種膠態(tài)是不 足以表征膠態(tài)脂質(zhì)分散體結(jié)構(gòu)的，因為就藥物的穩(wěn)定性和藥物的釋放來說，膠態(tài)之間的動態(tài)變化非常重要。如易水解的藥物分子在水中比在脂質(zhì)中更容易溶解，更容易富集在粒子的表面。不穩(wěn)定的藥物與水接觸后很快水解，因此藥物在不同環(huán)境下的分配平衡很容易改變。提高基質(zhì)的粘度能降低藥物在載體中的擴(kuò)散系數(shù)，因此 SLN 比納米乳更有優(yōu)勢。有人用 ESR 研究了 乳酸羥基乙酸共聚物（ PLGA）和幾種脂質(zhì)基質(zhì)，結(jié)果表明 PNP 能更有效的穩(wěn)定藥物分子。但這并不是說 SLN 不能保護(hù)藥物不受降解，因為適當(dāng)?shù)谋砻婊钚詫泳湍軐λ幬锲鸬胶芎玫谋Ｗo(hù)作用。血漿中的多種成分如血漿蛋白、脂蛋白、免疫蛋白、補(bǔ)體 C 蛋白等也吸附到納米粒上，參與調(diào)理過程。納米粒的表面電荷、親水親油性、粒徑大小決定了納米粒被血漿中特異性 IgG 及 C3b 片段吸附或包裹的數(shù)量，進(jìn)而決定在體內(nèi)的代謝過程。另外粒徑大小與靶向性有關(guān)，大于 5μ m 的粒子被肺的毛細(xì)血管床捕獲，小粒子被 RES 吞噬；大于250nm 的納米 粒靶向脾，小于 250nm 的納米粒靶向體循環(huán)，小于 150nm 的納米粒靶向骨髓。但是研究最多的還是靜脈注射。口服給藥主要是通過派伊爾結(jié)進(jìn)入體循環(huán)，這樣必須考慮納米粒在胃腸道的穩(wěn)定性問題，防止被胃酸以及脂肪酶和酯酶降解。 1．注射給藥 SLN 最初是為靜脈注射的靶向控釋藥物而設(shè)計。粒徑的分布對于靜脈注射用藥來說是一個關(guān)鍵問題，它可以導(dǎo)致毛細(xì)血管堵塞，造成脂肪栓塞等致死性的嚴(yán)重問題。人體可以耐受一定數(shù)量的微米級的大液滴，但是這種情況不能適用 SLN，因為 SLN 不能變形，一旦粒徑超過毛細(xì)血管直徑，血管栓塞現(xiàn)象必然發(fā)生。固體脂質(zhì)的不可變形性，以及在 注射過程中可能發(fā)生凝膠化現(xiàn)象，是 SLN 分散體用于靜脈注射給藥時在臨床上遇到的主要問題。 大鼠經(jīng)靜脈注射阿霉素 SLN后，藥代動力學(xué)研究表明，和普通阿霉素注射液相比，血藥濃度更高；藥物在體內(nèi)的分布方面， SLN在肺部，脾臟和腦中的濃度較高，而普通阿霉素注射液主要分布在肝臟和腎臟。楊時成等以Poloxamer188為隱性修飾劑，制備了 197nm的喜樹堿 硬酯酸 SLN。在 ，喜樹堿內(nèi)酯環(huán)的開環(huán)半衰期分別為： 。納米粒與普通溶液相比，藥時曲線下面積（ AUC）提高 5倍，平均滯留時間（ MRT）延長 4倍，在 RES與非 RES器官的分布均明顯提高。通過優(yōu)化乳化劑和脂質(zhì)的種 類和劑量，可以得到在胃腸道中穩(wěn)定的 SLN。但是實際上納米粒的聚合并不是決定因素。 Yang等 [28]研究了小鼠口服喜樹堿 硬脂酸 SLN后的藥代動力學(xué)，發(fā)現(xiàn)體內(nèi)血循環(huán)和組織中藥物濃度出現(xiàn)兩個峰， 5min~15min出現(xiàn)的第一個峰為突釋效應(yīng)所致， 3h后出現(xiàn)的第二個峰為隨著硬脂酸的降解及 SLN被轉(zhuǎn)運(yùn)至胃腸道壁而逐漸釋出的藥物峰。采用溶劑 擴(kuò)散法制備環(huán)孢素 A硬脂酸 SLN，粒徑 ，包封率 %。 3． 透皮吸收 固體脂質(zhì)納米粒局部給藥具有很大的開發(fā)潛力和市場前景。和脂質(zhì)體相似， SLN 是由生物耐受性良好的材料組成，其最突出的優(yōu)點(diǎn)在于它具有固態(tài)基質(zhì)，這樣可以保護(hù)化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定的物質(zhì)不被分解破壞，并可以調(diào)節(jié)藥物的釋放。載 藥量低和低粘度對于透皮制劑來說都是不利的。 SLN分散體的固體脂質(zhì)含量升高后，會變成一種半固體，凝膠樣的性狀，它可以直接涂抹在皮膚上，不需要做進(jìn)一步的處理。但是鯨蠟醇十六酸酯制成的 SLN在脂質(zhì)含量高達(dá) 30%~40%時，竟然保持了膠態(tài)粒 子的大小，且系統(tǒng)的可塑性也有很大增加。以上結(jié)果表明，可以一步生產(chǎn)出脂質(zhì)含量高、粒徑小的透皮用 SLN 體系。 SLN 的一個明顯優(yōu)點(diǎn)是組成成分都是生物相容性原料，避免了對皮膚的刺激和毒性。 SLN 在皮膚上涂布后，隨著水分的損失和脂質(zhì)的變形， SLN 的結(jié)構(gòu)將發(fā)生改變。這種致密膜的形成可以促進(jìn)皮膚的 閉合作用，提高藥物對皮膚的穿透率。為了證明脂質(zhì)納米粒肺部給藥的可行性，有人將脂質(zhì)納米粒混懸液霧化后，再收集霧化后的顆粒并分析其中納米粒的粒徑分布。另外，脂質(zhì)納米粒粉末可以制成干粉吸入劑，在噴霧干燥過程中，可以使用乳糖作為保護(hù)劑。與聚合物納米粒相比，脂質(zhì)納米粒的降解速度較 快。肺部的粒子易于被巨噬細(xì)胞吞噬，因此可以用脂質(zhì)納米粒來治療 RES 系統(tǒng)的感染。獲得足夠載藥量的先決條件是藥物在脂質(zhì)熔融物中溶解度足夠大 [19]。可以通過加入增溶劑來增加藥物在脂質(zhì)熔融物中的溶解度，某些脂質(zhì)如甘油單酯和雙酯，也可以促進(jìn)藥物的溶解。復(fù)雜的脂質(zhì)如甘油單酯、甘油雙酯和甘油三酯混合物含有不同長度的脂肪酸鏈，它們可以形成具有大量缺陷的晶格，從而形成很多可以容納藥物的空間。因此，通過 NMR， X射線衍射和其它新技術(shù)深入 了解脂質(zhì)的各方面性質(zhì)，可以幫助我們獲得載藥量更高的 SLN。納米粒中脂質(zhì)的晶型和常規(guī)狀態(tài)下不太一樣。脂質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)楦€(wěn)定的晶形后，晶格變得比較完整，包封藥物的效率變得很低。 SLN 體系中脂質(zhì)結(jié)晶存在一定數(shù)量的α構(gòu)型，保存期內(nèi)仍然保持一定的數(shù)量。 人們對 SLN 如何包封藥物已經(jīng)進(jìn)行了很多研究，但是對 SLN 藥物釋放機(jī)理的研究卻很少。根據(jù)他們發(fā)表的數(shù)據(jù)（圖 63），固體脂質(zhì)納米粒載藥方式具有以下三種模型： 1． 固態(tài)溶液：冷勻法沒有采用表面活性劑或采用對藥物沒有增溶作用的表面活性劑，制得的脂質(zhì)納米粒是一種固態(tài)溶液（即藥物以分子分散于脂質(zhì)基質(zhì)中）； 2． 核 殼結(jié)構(gòu)，藥物富集于殼中：當(dāng)藥物的沉淀速度小于脂質(zhì)結(jié) 晶的速度，這時會形成一個藥物富集的殼； 3． 核 殼結(jié)構(gòu)，藥物富集于核中：藥物溶解在脂質(zhì)熔融物中的量達(dá)到或接近于它的飽和藥物量時，冷卻時藥物的沉淀先于脂質(zhì)的結(jié)晶，就會形成一個藥物富集的核。脂質(zhì)膜的藥物濃度等于結(jié)晶溫度時脂質(zhì)中藥物的溶解度。 圖 63 藥物在 SLN中的分布模型圖 固態(tài)溶液 載藥殼 脂質(zhì)核 藥物分子分散體 脂質(zhì)核 藥物 /載藥核 180 在脂質(zhì)納米粒的研究中遇到的主要問題是藥 物的突釋問題。但以脫氫皮質(zhì)醇為模型藥物時，可以制備具有一定緩釋作用的納米粒。在體外，納米粒持續(xù)釋放藥物的時間可長達(dá) 5~7 周。釋放初期的突釋劑量對藥物的快速起效是有利的。用熱勻法制備的納米粒與用冷勻法制備的納米粒相比，藥物釋放具有很大的突釋效應(yīng)，但兩者的藥物后期釋放速率相似。藥物在水中的溶解度越大，則重新溶解到水相中的藥物量越多。將制得的初乳冷卻，隨著水相溫度的降低，藥物在水中的溶解度也隨之下降，這時部分藥物又會重新分配到油相。降低分散體系的溫度會進(jìn)一步降低藥物在水相中的溶解度，已經(jīng)結(jié)晶的脂質(zhì)核不能夠再容納藥物，藥物則在脂質(zhì)核的外層或表面聚集。因此，藥物突釋的程度可以通過制備過程中的溫度和表面活性劑的濃度來調(diào)節(jié)，溫度增加或表面活性劑濃度的增大會使藥物的突釋效應(yīng)增強(qiáng)。為了避免藥物 的突釋效應(yīng)，還可以不采用表面活性劑或采用對藥物沒有增溶作用的表面活性劑。以 HL60 細(xì)胞和人粒性白細(xì)胞的生存情況為指標(biāo)，考察不同納米載藥體系的體外細(xì)胞毒性，發(fā)現(xiàn)SLN 的毒性比 PLGA 納米粒的毒性低 90%，比 PBCA 納米粒低 99%。當(dāng)使用親水性的 Poloxamine 908 和 Poloxamer 407 對 SLN 進(jìn)行表面修飾后靜注給藥，可降低 RES 巨噬細(xì)胞的吞噬，延長藥物在血液中的循環(huán)時間，與