【正文】 這一模型為防止脂質(zhì)體的調(diào)理作用提供了理論依據(jù)。其中 PEG 具有便宜、易得，既溶于水又溶于多種有機(jī)溶劑，獨(dú)特的端基反應(yīng)性和可修飾性以及沒(méi)有免疫原性等優(yōu)點(diǎn)，故 PEG 修 飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體引起了人們廣泛的研究興趣。通常在大粒子 (400nm~500nm)上修飾層比在小粒子 (60nm~140 nm)上要薄，疏水性更強(qiáng)。人們?cè)缇桶l(fā)現(xiàn)表面修飾及表面電荷的重要性，負(fù)電荷粒子從循環(huán)系統(tǒng)中迅速被清除，而正電荷和中性粒子具有不同的清除模式。 （ 2）增加空間位阻 吞噬過(guò)程的第一步是粒子到達(dá)并粘附于吞噬細(xì)胞膜上，這一過(guò)程可被具有空間穩(wěn)定作用的高分子層阻隔。但由于神經(jīng)節(jié)苷酯價(jià)格昂貴，合成和提取都較困難，不便于研究和大量生產(chǎn)。紅細(xì)胞之所以能在血循環(huán)中存在較長(zhǎng)時(shí)間，起作用的是它的唾液酸外層（主要為神經(jīng)節(jié)苷酯 GM1）。該拉鏈的立體性質(zhì)決定了它和生物分子的作用位點(diǎn)、移動(dòng)速度、碰撞幾率。 190 蔽和空間阻礙作用，可以保護(hù)脂質(zhì)體不易被血液中的調(diào)理素識(shí)別。 2．長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的表面性質(zhì) 從目前情況看，長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的表面通常被糖脂或不同聚合物所修飾。例如，蛋白識(shí)別過(guò)程可以是可逆的（如免疫球蛋白），也可以是不可逆的（如補(bǔ)體 C3），調(diào)理過(guò)程是可逆的，然而胞飲過(guò)程是不可逆的。 1．長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體偽一級(jí)動(dòng)力學(xué)模型 脂質(zhì)體進(jìn)入體循環(huán)后，大部分被 RES 迅速攝取，并被具有吞噬功能的細(xì)胞所吞噬，進(jìn)而被體循環(huán)清除掉。但多數(shù)疾病病因并不在 RES系統(tǒng)中，因此脂質(zhì)體對(duì)非 RES 系統(tǒng)疾病的療效存在問(wèn)題，且對(duì) RES 器官會(huì)產(chǎn)生毒副作用。同 DCchol/DOPE（ 6:4）， DOTMA/DOPE（ 1:1）相比， ManC4chol/DCchol/DOPE(2:2:6)DNA 復(fù)合物更易被大鼠腹膜巨噬細(xì)胞特異性識(shí)別，轉(zhuǎn)染效率更高 [51]。③脂質(zhì)的種類(lèi)，不同的脂質(zhì)可以影響脂質(zhì)體復(fù)合物的體內(nèi)體外的轉(zhuǎn)染效率。其中去唾液酸糖蛋白受體具有親和力強(qiáng)，內(nèi)吞作用快而最受關(guān)注 [49]。 4．糖基化陽(yáng)離子脂質(zhì)體 如上所述，陽(yáng)離子脂質(zhì)體 DNA 復(fù)合物靜脈注射后能迅速被循環(huán)系統(tǒng)清除，在肺中高效表達(dá)。 PCL 的制備方法同普通脂質(zhì)體相似，如果以三乙酰 PEI600 和 DOPE 為主要原料（摩爾比為 :1）， PCL帶有很強(qiáng)的正電荷， Zeta 為（ 177。如何促進(jìn) DNA 進(jìn)入細(xì)胞核尚待進(jìn)一步研究。這表明， DNA 必須從復(fù)合物中釋放出來(lái)，才能進(jìn)行有效的轉(zhuǎn)染，并且， DNA 進(jìn)入細(xì)胞核這一過(guò)程是較為重要的限速過(guò)程。細(xì)胞質(zhì)是一種帶粘性的流體，微粒系統(tǒng)在其中的擴(kuò)散速率很慢，而 DNA 必須轉(zhuǎn)移至核的周?chē)拍苓M(jìn)入核內(nèi)獲得表達(dá)。通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞 187 的陽(yáng)離子脂質(zhì)體 DNA 復(fù)合物必須與核內(nèi)體融合才能將 DNA 釋放 出來(lái)。 （ 3）陽(yáng)離子脂質(zhì)體 DNA 復(fù)合物在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn) ①陽(yáng)離子脂質(zhì)體 DNA 復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞 基因轉(zhuǎn)染的第一步就是 DNA 進(jìn)入細(xì)胞。過(guò)多的聚集還會(huì)引起復(fù)合物在毛細(xì)血管壁上的沉積。這種復(fù)合物的形成并不依賴(lài)于 DOPE，因 DOTMA 和 DOTMA/DOPE 脂質(zhì)體都能誘導(dǎo) DNA 的凝聚，而且在長(zhǎng)度為 ~23Kb 的范圍內(nèi)不受 DNA 鏈長(zhǎng)的影響，形成這種復(fù)合物 的平均粒徑大小受陽(yáng)離子脂質(zhì)體和質(zhì)粒 DNA 所帶電荷比例的影響。如最常使用的 DOTMA/DOPE 脂質(zhì)體，DOTMA 作為陽(yáng)離子脂質(zhì)靠靜電作用與核苷酸結(jié)合，而 DOPE 則作為可融性脂質(zhì)促進(jìn)陽(yáng)離子脂質(zhì)與細(xì)胞膜的融合。疏水烴鏈的增加與飽和度的降低（特別是形成反式構(gòu)型）有利于六方晶相構(gòu)型 的形成。兩相之間轉(zhuǎn)變溫度為T(mén)H（六方晶相轉(zhuǎn)變溫度）。 脂質(zhì)融合是指當(dāng)兩種脂質(zhì)的相態(tài)混合時(shí)發(fā)生的脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)上的變化。另外，構(gòu)效關(guān)系表明，分子中氨基的數(shù)目越多，氨基與親水基團(tuán)的距離越遠(yuǎn)，則基因轉(zhuǎn)移的效果越好。 3．脂質(zhì)體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的機(jī)制 雖然有關(guān)脂質(zhì)體復(fù)合物被細(xì)胞攝取的機(jī)理仍有很多爭(zhēng)論，但可以肯定的是，內(nèi)吞作用是這一機(jī)制的主要過(guò)程，脂質(zhì)體復(fù)合物與細(xì)胞膜接觸時(shí)最先出現(xiàn)的相互作用是靜電作用。最近，文獻(xiàn)報(bào)道了另外一種 LPDI，它是由硫酸魚(yú)精蛋白、 DNA、 DOTAP膽固醇組成 [39]。它們已在基因治療臨床實(shí)驗(yàn)中廣泛運(yùn)用，并取得了一定的治療效果。近年 發(fā)展起來(lái)的體外或體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移技術(shù)有十余種，可分為四種類(lèi)型：細(xì)胞學(xué)方法（如細(xì)胞融合，染色體介導(dǎo)等）；理化方法（如磷酸鈣溶液共沉淀，電穿孔，顯微注射，顆粒轟擊等）；病毒載體（如重組 DNA 或 RNA 病毒）；直接注射法（如裸露或脂質(zhì)體包埋 DNA 血管內(nèi)注射等）。 184 2．陽(yáng)離子脂質(zhì)體的應(yīng)用 陽(yáng)離子脂質(zhì)體主要是作為非病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移載體而在基因治療中廣泛應(yīng)用。從功能來(lái)分，陽(yáng)離子脂質(zhì)體含有 4 種結(jié)構(gòu)區(qū)域形式：帶正電荷的極性頭、能改變長(zhǎng)度的隔離區(qū)、連接鏈和疏水的錨著區(qū)。這類(lèi)陽(yáng)離子去垢劑都含有疏水的碳?xì)滏溛膊亢鸵粋€(gè)含胺類(lèi)基團(tuán)的極性頭部。本文僅根據(jù)脂質(zhì)體的用途來(lái)介紹近年來(lái)脂質(zhì)體的研究進(jìn)展。 （ 4） 中等大小單層脂質(zhì)體（ intermediatesized unilamellar vesicles， IUV） IUV 指的是直徑在100nm~1000nm 之間的單層脂質(zhì)體。 MLV 的主要缺點(diǎn)是包封率低。它們可由單層雙分子膜組成，也可由多層雙分子膜組成。近年來(lái)，脂質(zhì)體主要分為以下四大類(lèi)： ① 普通脂質(zhì)體， ② 陽(yáng)離子脂質(zhì)體， ③長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體， ④ 免疫脂質(zhì)體等（圖 64）。 4． 廣泛性：脂質(zhì)體可以和細(xì)胞相互作用或被細(xì)胞吞噬、攝取，從而使那些理化性質(zhì)不穩(wěn)定的藥物（如 DNA 分子）進(jìn)入胞內(nèi)成為可能。脂質(zhì)體的靶向性主要有天然靶向性、隔室靶向性、物理靶向性和配體專(zhuān)一靶向性，因此可以提高藥物在靶部位的濃度，增強(qiáng)藥物療效，降低對(duì)其他非作用靶位的毒副作用，提高治療指數(shù)。 SLN可用于不同的給藥途徑，但是靜脈注射要求 SLN粒徑絕對(duì)在安全范圍內(nèi)，這在實(shí)際應(yīng)用中會(huì)有許多困難。 物理穩(wěn)定性差、對(duì)脂溶性差的藥物包封率低都是制約 SLN應(yīng)用的瓶頸。當(dāng)使用親水性的 Poloxamine 908 和 Poloxamer 407 對(duì) SLN 進(jìn)行表面修飾后靜注給藥，可降低 RES 巨噬細(xì)胞的吞噬，延長(zhǎng)藥物在血液中的循環(huán)時(shí)間，與同樣進(jìn)行過(guò)表面修飾的聚苯乙烯納米粒相比，可使 RES 的吞噬作用降低 8%~15%。為了避免藥物 的突釋效應(yīng)，還可以不采用表面活性劑或采用對(duì)藥物沒(méi)有增溶作用的表面活性劑。降低分散體系的溫度會(huì)進(jìn)一步降低藥物在水相中的溶解度，已經(jīng)結(jié)晶的脂質(zhì)核不能夠再容納藥物，藥物則在脂質(zhì)核的外層或表面聚集。藥物在水中的溶解度越大，則重新溶解到水相中的藥物量越多。釋放初期的突釋劑量對(duì)藥物的快速起效是有利的。但以脫氫皮質(zhì)醇為模型藥物時(shí)，可以制備具有一定緩釋作用的納米粒。脂質(zhì)膜的藥物濃度等于結(jié)晶溫度時(shí)脂質(zhì)中藥物的溶解度。 人們對(duì) SLN 如何包封藥物已經(jīng)進(jìn)行了很多研究，但是對(duì) SLN 藥物釋放機(jī)理的研究卻很少。脂質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)楦€(wěn)定的晶形后，晶格變得比較完整，包封藥物的效率變得很低。因此，通過(guò) NMR， X射線(xiàn)衍射和其它新技術(shù)深入 了解脂質(zhì)的各方面性質(zhì)，可以幫助我們獲得載藥量更高的 SLN?？梢酝ㄟ^(guò)加入增溶劑來(lái)增加藥物在脂質(zhì)熔融物中的溶解度，某些脂質(zhì)如甘油單酯和雙酯，也可以促進(jìn)藥物的溶解。肺部的粒子易于被巨噬細(xì)胞吞噬，因此可以用脂質(zhì)納米粒來(lái)治療 RES 系統(tǒng)的感染。另外，脂質(zhì)納米粒粉末可以制成干粉吸入劑，在噴霧干燥過(guò)程中，可以使用乳糖作為保護(hù)劑。這種致密膜的形成可以促進(jìn)皮膚的 閉合作用，提高藥物對(duì)皮膚的穿透率。 SLN 的一個(gè)明顯優(yōu)點(diǎn)是組成成分都是生物相容性原料，避免了對(duì)皮膚的刺激和毒性。但是鯨蠟醇十六酸酯制成的 SLN在脂質(zhì)含量高達(dá) 30%~40%時(shí)，竟然保持了膠態(tài)粒 子的大小，且系統(tǒng)的可塑性也有很大增加。載 藥量低和低粘度對(duì)于透皮制劑來(lái)說(shuō)都是不利的。 3． 透皮吸收 固體脂質(zhì)納米粒局部給藥具有很大的開(kāi)發(fā)潛力和市場(chǎng)前景。 Yang等 [28]研究了小鼠口服喜樹(shù)堿 硬脂酸 SLN后的藥代動(dòng)力學(xué)，發(fā)現(xiàn)體內(nèi)血循環(huán)和組織中藥物濃度出現(xiàn)兩個(gè)峰， 5min~15min出現(xiàn)的第一個(gè)峰為突釋效應(yīng)所致， 3h后出現(xiàn)的第二個(gè)峰為隨著硬脂酸的降解及 SLN被轉(zhuǎn)運(yùn)至胃腸道壁而逐漸釋出的藥物峰。通過(guò)優(yōu)化乳化劑和脂質(zhì)的種 類(lèi)和劑量，可以得到在胃腸道中穩(wěn)定的 SLN。在 ，喜樹(shù)堿內(nèi)酯環(huán)的開(kāi)環(huán)半衰期分別為： 。 大鼠經(jīng)靜脈注射阿霉素 SLN后，藥代動(dòng)力學(xué)研究表明，和普通阿霉素注射液相比，血藥濃度更高；藥物在體內(nèi)的分布方面， SLN在肺部，脾臟和腦中的濃度較高，而普通阿霉素注射液主要分布在肝臟和腎臟。人體可以耐受一定數(shù)量的微米級(jí)的大液滴，但是這種情況不能適用 SLN，因?yàn)?SLN 不能變形，一旦粒徑超過(guò)毛細(xì)血管直徑，血管栓塞現(xiàn)象必然發(fā)生。 1．注射給藥 SLN 最初是為靜脈注射的靶向控釋藥物而設(shè)計(jì)。但是研究最多的還是靜脈注射。納米粒的表面電荷、親水親油性、粒徑大小決定了納米粒被血漿中特異性 IgG 及 C3b 片段吸附或包裹的數(shù)量，進(jìn)而決定在體內(nèi)的代謝過(guò)程。但這并不是說(shuō) SLN 不能保護(hù)藥物不受降解，因?yàn)檫m當(dāng)?shù)谋砻婊钚詫泳湍軐?duì)藥物起到很好的保護(hù)作用。提高基質(zhì)的粘度能降低藥物在載體中的擴(kuò)散系數(shù)，因此 SLN 比納米乳更有優(yōu)勢(shì)。如易水解的藥物分子在水中比在脂質(zhì)中更容易溶解，更容易富集在粒子的表面。膠束、混合膠束和脂質(zhì)體因?yàn)橛羞x擇性藥物結(jié)合位點(diǎn)，因此可以增加藥物的溶解度。穩(wěn)定劑并不僅僅局限于作用在脂質(zhì)表面，也可作用于水相。在冷卻貯存過(guò)程中，它容易形成半固體導(dǎo)致膠凝。廣角衍射在 和 ~ 的范圍變化顯著。如果該體系含有其他的化合物，則這些吸收峰變寬，并且不易檢測(cè)到（圖 61[23]）。這些性質(zhì)對(duì)于研究該膠體體系的穩(wěn)定性及藥物的包封率有很重要的意義 [22]。但對(duì)其界面的相變動(dòng)力學(xué)的影響對(duì)比核的影響更大。 3． 表面活性劑的影響 表面活性劑的加入能顯著影響三脂肪酸甘油酯的晶型轉(zhuǎn)變。晶型的轉(zhuǎn)變有時(shí)會(huì)極緩慢。除了多晶型現(xiàn)象，老化過(guò)程對(duì)脂質(zhì)的晶型也有影響 [21]。 室溫下，三脂肪酸甘油酯納米粒比塊體材料更容易轉(zhuǎn)變成穩(wěn)定的晶型，這表明膠體分散體具有更高的動(dòng)力學(xué)特性。同塊體材料相比，短鏈脂肪酸甘油酯納米粒晶型轉(zhuǎn)變的速度比長(zhǎng)鏈脂肪酸甘油酯快 [20]。然而，多晶型的轉(zhuǎn)變可嚴(yán)重影響納米分散體的性能。而對(duì)納米 173 體系來(lái)講，其結(jié)晶的溫度要低，并且粒徑對(duì)結(jié)晶的溫度影響也小。對(duì)于膠體體系，三脂肪酸甘油酯的熔化與結(jié)晶的溫度與單脂肪酸甘油酯不同，混合脂肪酸甘油酯和高熔點(diǎn)的脂肪酸酯的納米粒形成過(guò)冷態(tài)的傾向較小。通過(guò)定量的高分辨 1HNMR[19]測(cè)定發(fā)現(xiàn)，當(dāng)熔融乳化納米粒冷卻到其結(jié)晶溫度以下時(shí)，脂肪酸酯分子仍有很強(qiáng)的流動(dòng)性。 （ 2）噴霧干燥 噴霧干燥比冷凍干燥法經(jīng)濟(jì)，但較少用 于 SLN 體系。晶體的大小是影響冷凍干燥過(guò)程中升華速度的關(guān)鍵因素。因 此提高藥物的包封率尤為重要 [17]。冷凍防護(hù)劑在乳勻之前加入效果最好，平均粒徑在凍干過(guò)程中幾乎不發(fā) 生改變。一般來(lái)講，冷凍防護(hù)劑的濃度 在 10%~15%之間， SLN 的平均粒徑和粒徑分布在冷凍干燥－再分散試驗(yàn)后，平均粒徑一般增大 ~ 倍，沒(méi)有冷凍防 護(hù)劑的樣品的粒徑增大得更多。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng) SLN 分散體的脂質(zhì)含量不超過(guò) 5%時(shí)，脂質(zhì)粒子的直接接觸減少，有更高的升華速度和更高的比表面 積，可以有效抑制粒子的聚合。 （ 1）冷凍干燥法 樣品經(jīng)冷凍干燥變成固態(tài)后，具有更好的化學(xué)和物理穩(wěn)定性。 5．干燥 盡管有文獻(xiàn)報(bào)道 SLN的水溶液分散體的粒徑能穩(wěn)定 12~36個(gè) 月，但由于 SLN分 散體是熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，通常在短時(shí)間里就出現(xiàn)粒徑的增大、粒子聚合甚至膠凝的現(xiàn)象。因此樣品經(jīng)照射后，可能出現(xiàn)脂質(zhì)雙層組成的改變。濕熱蒸汽滅菌的溫度控制在 121℃時(shí)，粒徑增大的幅度比γ射線(xiàn)照射的要大；但在 110℃時(shí)，粒徑增大的幅度比γ 射線(xiàn)照射的要小 [14]。 一年以后所有體系的 171 粒徑均增大 ， Acidan N12 SLN增大到 350nm，廿二碳烷酸 SLN增大到 120nm，硬脂酸 SLN增大到 450nm，但是沒(méi)有微米級(jí)的粒子出現(xiàn)。這些結(jié)果表明藥物的加入，不但能降低體系的穩(wěn)定性，而且改變了乳化層的性質(zhì)。這種情況是由于乳化劑poloxamer空間穩(wěn)定性下降引起 。升高溫度使所有乳化劑的流動(dòng)性和水溶性都發(fā)生了改變。濾過(guò)滅菌要求加壓操作并且樣品的直徑不能大于 m，這對(duì) SLN 來(lái)講是比較困難的。而在高于相變溫度時(shí)制得的 SLN 更穩(wěn)定，因?yàn)榇藭r(shí)磷脂的脂肪酸鏈能自由伸展，更充分地發(fā)揮作用 [11]。一般來(lái)說(shuō)， SDS 和一些能形成膠束的低分子量的表面活性劑能 很快達(dá)到平衡，而高分子量的表面活性劑（如 poloxamer）和卵磷脂則需要很長(zhǎng)時(shí)間才達(dá)到平衡。粒子體積的減小會(huì)導(dǎo)致表面積的急劇增大，特別是在高壓乳勻中，表面積增大更為迅速，因此必須考慮動(dòng)力學(xué)方面的問(wèn)題。以三棕櫚酸甘油酯、磷脂和甘膽酸鈉為輔料經(jīng)高壓乳勻法制備的 SLN 的平均粒徑為 205nm；如果以 Pluronic F68 代替磷脂， SLN 的平均粒徑為 ；用甘膽酸鈉代替磷脂，則粒徑為 。這有可能影響 SLN 的 zeta 電位，延緩結(jié)晶過(guò)程等，從而影響 SLN 的分散性能。而用高壓乳勻制備的 SLN 結(jié)果卻相反：增加磷脂的濃度，粒徑持續(xù)下降。此外，和高壓乳 169 勻法相比，乳化蒸發(fā)法在制備過(guò)程中不能避免高溫加熱和使用有機(jī)溶劑，而有機(jī)溶劑的殘留會(huì)導(dǎo)致毒理學(xué)的問(wèn)題。這是因?yàn)榱字肿釉谌刍|(zhì)中的流動(dòng)性小于在溶劑中的流動(dòng)性，并且脂質(zhì)和乳化劑的混合液的粘度大于溶 劑，所以乳勻需要更多的能量，導(dǎo)致 S