【正文】 LN 的粒徑增大。如果脂質(zhì)的含量很高時(shí)，甚至無(wú)法用超聲法來(lái)乳勻。 對(duì)于微乳來(lái)說(shuō)，不但配方組成，而且溫度下降速度與 pH 值都能影響制劑的質(zhì)量。再在攪拌下向熱微乳中加入冷水（ 2℃ ~3℃），一般微乳和水的比率為 1:25 到 1:50，其稀釋程度取決于微乳的組成?，F(xiàn)在人們認(rèn)為微乳并不是一種由微小液滴形成的真正的乳液，而是一種臨界溶液（ critical solution）。 （ 3）乳化蒸發(fā)法 SLN 的制備 也可以采用 PNP 的制備方法，但它的一個(gè)明顯不足是使用了有機(jī)溶劑。由于低溫凝固，脂質(zhì)脆性增加，更易被粉碎，通過(guò)球磨或碾缽得到的粒子粒徑一般在 50μ m~100μ m。由于粒徑小和乳化劑的存在，它會(huì)在一定的時(shí)間內(nèi)保持一種過(guò)冷熔化狀態(tài)。但是并不是溫度越高就越好，因?yàn)樵诟邷叵滤幬锖洼d體的降解速度也會(huì) 加快。 乳勻有兩種基本的方法：熱乳勻和冷乳勻 [3,4]，這兩種方法都可以制備 SLN，但乳勻之前都需將藥物溶解或分散在熔化的脂質(zhì)中，即初步乳化。 （ 2）高壓乳 勻 [2] 高壓乳勻是目前制備 SLN 的經(jīng)典方法。是一種很有發(fā)展前景的新型載藥系統(tǒng)。 SLN 的水分散系統(tǒng)可以進(jìn)行高壓滅菌或γ輻射滅菌，具有長(zhǎng)期的物理化學(xué)穩(wěn)定性，也可通過(guò)冷凍干燥或噴霧干燥制成固體粉末。本章主要對(duì)固體脂質(zhì)納米粒、脂質(zhì) 體和藥質(zhì)體等進(jìn)行介紹。脂質(zhì)納米粒能夠改善藥物吸收、改變藥物體內(nèi)過(guò)程、具有緩釋、控釋、提高藥物穩(wěn)定性、增強(qiáng)療效降低毒副作用等方面的優(yōu)越性，同時(shí)在生物體內(nèi)及貯存過(guò)程中較穩(wěn)定?，F(xiàn)已廣泛應(yīng)用于基因藥物、抗腫瘤藥、蛋白質(zhì)和多肽等藥物的載體系統(tǒng)。 固體脂質(zhì)納米粒 概述 固體脂質(zhì)納米粒（ solid lipid nanoparticles， SLN）是近十幾年正在發(fā)展的 — 種新型的脂質(zhì)載藥系統(tǒng) [1]，它以天然的或人工合成的的高熔點(diǎn)固體脂質(zhì)（如飽和脂肪酸甘油酯、硬脂酸、混合脂質(zhì)）為載體，將藥物吸附或包裹于脂質(zhì)核中制成的納米給藥體系。還可采用高壓乳勻法進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn)。 固體脂質(zhì)納米粒的制備 1． 制備方法 （ 1）高剪切乳勻和超聲分散 167 高剪切乳勻和超聲分散是藥劑學(xué)中廣為應(yīng)用的一種分散技術(shù)，可用來(lái)制備乳劑、脂質(zhì)體等，也可以用于固體脂質(zhì)納米粒分散體系的制備。其工作原理是利用高壓（ 10 MPa~200MPa）推動(dòng)液體通過(guò)一個(gè)狹窄的管道（幾個(gè)微米），液體通過(guò)很短的距離而獲得了很大的速度（超過(guò) 1000km/h），產(chǎn)生的高剪切力和空穴作用力使粒子分裂成納米級(jí)的小粒子。一般初步乳化如能得到微米級(jí)粒子則更有利于乳勻。并且雖然乳勻的步驟可以重復(fù)幾次，但每次乳勻都會(huì)導(dǎo)致體系溫度的升高，平均壓力每升高 50MPa，可使體系的溫度增加 10℃。 ② 冷乳勻 冷乳勻法的制備過(guò)程同熱乳勻法一樣，也需使藥物溶解或 分散在熔融的脂質(zhì)中，熔化的樣品立即在干冰或液氮中冷卻。然后將它們和含表面活性劑的冷凍溶液在低于脂質(zhì)熔點(diǎn) 5℃ ~10℃以下高壓勻質(zhì)。將脂質(zhì)和藥 168 物首先溶解于有機(jī)溶劑中，然后對(duì)有機(jī)相和含有表面活性劑的水相進(jìn)行乳化，將有機(jī)溶劑蒸發(fā)后，即形成 SLN。微乳一方面具有乳液的一些性質(zhì)（如可以用激光光散 射法測(cè)量它的粒徑），另一方面它又具有真溶液的一些性質(zhì)（如藥物在微乳中有一定的飽和濃度，而不是像乳劑那樣具有一定的油 /水分配比例）。 為了使微乳中的油相在室溫下是固體，需要在制備時(shí)使體系的溫度高于脂質(zhì)的熔點(diǎn)。降溫速度快可以促使脂質(zhì)快速結(jié)晶并避免納米粒聚集。因此，超聲不適用于脂質(zhì)濃度高的配方。但如果用磷脂和非離子型表面活性劑作為乳化劑，則高壓乳勻法要優(yōu)于乳化蒸發(fā)法。 （ 3）高剪切乳化和高壓乳勻 采用高剪切乳化時(shí)，乳化劑的濃度對(duì) SLN 粒子大小的影響較大。一般來(lái)說(shuō)，用高壓乳勻制備的 SLN 粒徑大小是 50nm，而用高剪切乳化制備的 SLN 則在 200nm 左右。脂質(zhì)分子鏈越長(zhǎng)，油相的 粘度越高，得到的 SLN 粒徑相應(yīng)越大。當(dāng)使用磷脂 甘膽酸鈉為乳化劑時(shí)，微乳法得到的三棕櫚酸甘油酯 SLN 的粒徑遠(yuǎn)小于熔融 乳勻工藝，但以磷脂 四丁酚醛為乳化劑所制得的 SLN 粒徑遠(yuǎn)大于高壓乳勻法所制得的 SLN 的粒徑，這可能與四丁酚醛在較高溫度下乳化能力較強(qiáng)有關(guān) [10]。在初步乳勻過(guò)程中要有足夠的乳化劑分子，以確保它能迅速包裹在新形成的粒子表面。 170 （ 3）乳勻壓力與循環(huán)次數(shù)的影響 如果以 Poloxamer188 為穩(wěn)定劑制備三月桂酸甘油酯 SLN, 最佳條件為 50MPa 3 次 ,以后粒徑隨乳勻壓力和循環(huán)次數(shù)的增加反而明顯變大；使用 Lipoid S75 為乳化劑，操作壓力應(yīng)提高，最佳條件為150MPa 3。 4．滅菌 注射給藥需要滅菌。濕熱滅菌法是一種常 用且可靠的滅菌方法，它曾經(jīng)用于脂質(zhì)體的滅菌，發(fā)現(xiàn)加溫導(dǎo)致樣品物理穩(wěn)定性的下降，經(jīng)滅菌后都出現(xiàn)了不同程度的團(tuán)聚。濕熱蒸汽滅菌可以導(dǎo)致 o/w乳劑的組成發(fā)生改變。眾所周知，這種類(lèi)型的乳化劑，溫度升高使乙二醇鏈脫水，導(dǎo)致了粒子保護(hù)層的厚度減小，粒子容易聚結(jié) [12]。 Cavalli 等 [13]研究了濕熱蒸汽滅菌對(duì) 微乳法制備的 SLN的粒徑和 Zeta電位的影響。濕熱蒸汽滅菌對(duì)粒子的 zeta電位 影響不大。射線照射法由于射線的能量很高，在照射過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生自由基，這些自由基與沒(méi)有經(jīng) 過(guò)修飾的樣品重新結(jié)合或發(fā)生副反應(yīng)而使樣品的結(jié)構(gòu)發(fā)生化學(xué)改變。對(duì)濕熱蒸汽滅菌和γ射線照射所導(dǎo)致的化學(xué)降解研究并不多，但需要指出的是，降解并不總是表現(xiàn)為粒徑的增大。為了提高 SLN的化學(xué)和物理穩(wěn)定性，保持其原有的的粒徑，阻止 Ostwald熟化和避免水解，常用的方法是將 SLN分散液干燥成固體。但是在凍干過(guò)程中有兩種相變會(huì)影響其穩(wěn)定性。冷凍防護(hù)劑 [15， 16]的加入可以減少粒子的聚合，還能使得到的干燥產(chǎn)品具有更好的再分散特性。冷凍防護(hù)劑的保護(hù)作用由大到小為：海藻糖→蔗糖→葡萄糖和麥芽糖。冷凍防護(hù)劑和脂質(zhì)的重量比 為 ~ 較合適。 冷凍的過(guò)程會(huì)影響晶體的結(jié)構(gòu)和凍干粉的性質(zhì)。大量小晶體和非晶區(qū)的出現(xiàn)導(dǎo)致形成非常緊密的凍干粉網(wǎng)，因而降低了升華速 度。主要是由于高溫、高剪切力和脂質(zhì)的部分熔化，易造成粒子的團(tuán)聚。這些結(jié)果表明，三脂肪酸甘油酯制成納米粒后，其結(jié)晶溫度降低 20℃ ~30℃，所以三肉豆蔻酸甘油酯或 Witepsol H42 等熔點(diǎn)較低的脂質(zhì)采用熱乳勻法所制得的納米粒，在室溫下以過(guò)冷態(tài)的形式存在。這是因?yàn)殚L(zhǎng)鏈脂肪酸可作為結(jié)晶中心使過(guò)冷態(tài)的結(jié)晶溫度提高。這說(shuō)明要想獲得穩(wěn)定的三脂肪酸甘油酯的過(guò)冷分散體，必須要制備納米粒。單脂肪酸甘油酯膠體體系比塊 體材料轉(zhuǎn)變成β 型的速度更快，可能是由于較小的結(jié)晶區(qū)域具有更大的體表面積之比而導(dǎo)致晶格弛豫。 三脂肪酸甘油酯，混合脂肪酸酯納米粒的多晶型行為與單脂肪酸甘油酯不同。同塊體材料相比，將脂肪酸酯納米粒結(jié)晶轉(zhuǎn)變成較穩(wěn)定的α 型時(shí)間較長(zhǎng)，但結(jié)晶后，其立即轉(zhuǎn)變成β ’型，表明脂肪酸酯具有較低的結(jié)晶溫度。 上述結(jié)果表明， SLN 無(wú)論從熔化到重結(jié)晶還 是固化后晶型轉(zhuǎn)變及老化現(xiàn)象，都具有很高的可變性，貯存期間 SLN 的晶型并不能從本體的晶型來(lái)推斷，因?yàn)槎呔娃D(zhuǎn)變的動(dòng)力學(xué)過(guò)程完全不同。 DSC 和 X射線衍射廣泛地應(yīng)用于考察脂質(zhì)的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。例如，制備三棕櫚酸甘油酯 SLN 時(shí)， 174 當(dāng)用 Cremophor EL 作為穩(wěn)定劑，α 晶型消失；如果用甘膽酸鈉為穩(wěn)定劑時(shí)，則該體系主要以α 晶型形式存在。 由于甘膽酸鈉穩(wěn)定的 SLN α 晶型的穩(wěn)定性較高，因此可以用來(lái)研究經(jīng)過(guò)多晶型轉(zhuǎn)化后基質(zhì)的結(jié)構(gòu)及粒子的形狀。 4．粒徑的影響 正如脂質(zhì)在塊體材料和膠體體系中理化性質(zhì)發(fā)生改變一樣，在膠體體系中， 粒徑的大小同樣能影響脂質(zhì)的性質(zhì)。 對(duì)于膠體分散體系來(lái)講，粒徑和熔化溫度的關(guān)系可用 GibbsThomson 方程來(lái)描述： T 是粒徑為 r 時(shí)的熔化溫度， T0 為脂質(zhì)在相同外壓下的熔化溫度，γ sl 為固－液的界面張力， VS為固體的體積，Δ Hfus 為熔化焓。在 ， 和 有較強(qiáng)的反射；另外在大多數(shù)情況下，在 處有一個(gè)小的衍射峰（圖 62[23]）。但在一般情況下，該體系中加入適量的粒子型或者非離子型表面活性劑，如甘膽酸鈉、四丁醛或 poloxamer 則可防止膠凝。因此表面活性分子（如 SDS）會(huì)以三種形式出現(xiàn)，即：①在脂質(zhì)的表面；②形成膠束；③表面活性劑單體的形式。在最近的一項(xiàng)十六圖 61 不同粒徑的四丁酚醛穩(wěn)定的三肉豆蔻酸甘油酯 SLN 的 DSC 圖 t / ℃ 圖 62 不同粒徑的四丁酚醛穩(wěn)定的三肉豆蔻酸甘油酯 SLN 的 X射線衍射圖 強(qiáng) 度 通 道 176 酸鯨蠟（醇）酯 SLN的電子自旋共振（ ESR）的研究中發(fā)現(xiàn)，親脂性的硝基化合物只位于膠束中，而不是在脂質(zhì)中。藥物降解動(dòng)力學(xué)由藥物的化學(xué)活性和藥物在水相或脂 /水界面上的濃度等因素決定。但是對(duì)于膠態(tài) 藥物載體來(lái)說(shuō)，影響藥物穩(wěn)定性的因素很多，而且在相同條件下， SLN 分散體的表面積比納米乳要大的多，這是因?yàn)?SLN 粒子的形狀是非球形的。 SLN 的體內(nèi)行為 納米粒進(jìn)入體內(nèi)后，被機(jī)體視為異物，人 體產(chǎn)生抗體與之吸附。一般而言，極性微粒不易被吞噬，ζ電位越高，吞噬越少；表面雙親或親水性的納米粒在血中循環(huán)時(shí)間長(zhǎng)。這可能是由于一方面比較易于監(jiān)控 SLN 在血液中的行為以及它們可能被組織攝取，另一方面它也是治療中最常用的給藥途徑之一。脂質(zhì)液滴（納米乳）轉(zhuǎn)變成 為固體（ SLN）以后，藥物的擴(kuò)散系數(shù)減小，從而減慢了藥物的釋放。低粘度的 SLN 分散體在注射針頭內(nèi)會(huì)發(fā)生凝膠化，迅速變成一種高粘度的、含有會(huì)對(duì)人體造成危險(xiǎn)的大粒子的混懸液。 喜樹(shù)堿受酸堿影響有兩種存在形式：有抗腫瘤活性的內(nèi)酯型與無(wú)活性的羧酸鹽型。 SLN在體外釋藥 154h后，納米粒內(nèi)的藥物仍以原形存在，說(shuō)明 SLN可提高藥物的穩(wěn)定性。一般認(rèn)為，酸性的、高離子強(qiáng)度的胃液微環(huán)境，易導(dǎo)致納米粒聚合。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，組織中藥物 AUC和 MRT顯著高于普通溶液，尤以腦部 藥物濃度上升幅度最大。 SLN 被認(rèn)為是替代脂質(zhì)體的新一代載藥系統(tǒng)。在大多數(shù)情況下， SLN 分散體被制備成軟膏或凝膠等劑型，確保使用的方便，而這個(gè)制備過(guò)程使 SLN 的濃度進(jìn)一步減小。這種體系的流變學(xué)特性和傳統(tǒng)的皮膚用藥相似。還可以調(diào)節(jié)藥物在皮膚中的釋放，從而提高藥物在特定皮膚層中的分配。 4．肺部給藥 迄今為止，脂質(zhì)納米粒的肺部給藥研究報(bào)道不多。 脂質(zhì)納米粒的優(yōu)點(diǎn)在于它可以控制藥物在肺部的釋放，延長(zhǎng)藥物在肺部的釋放時(shí)間。 SLN 藥物的釋放 影響 SLN 載藥量的因素很多，其中主要有：藥物在熔融油相中的溶解度；藥物熔融物和脂質(zhì)基質(zhì)熔融物的可混合性；固態(tài)脂質(zhì)基質(zhì)的物理和化學(xué)結(jié)構(gòu)；脂質(zhì)材料的晶型等。 脂質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)也很重要，因?yàn)榻Y(jié)晶性良好的脂質(zhì)可以形成嚴(yán)密的晶格，這樣導(dǎo)致藥物的溢出。 多晶型脂質(zhì)的晶型也是決定載藥量的一個(gè)重要因素。一般來(lái)說(shuō)，長(zhǎng)鏈脂肪酸的晶型轉(zhuǎn)變速度比短鏈脂肪酸慢。大多數(shù)體外釋放機(jī)理的研究都是由 Mehnert 等 [3133]以丁卡因和依托度酸為模型藥物完成的。這樣形成的脂質(zhì)納米粒具有一個(gè)脂質(zhì)殼和藥物富集的核。這證明 SLN 可以應(yīng)用于藥物的緩控釋制劑，并通過(guò)改變脂質(zhì)、表面活性劑濃度和制備時(shí)的一些參數(shù)（如溫度）來(lái)調(diào)節(jié)藥物釋放特性。 值得注意的 是，納米粒粒徑對(duì)藥物釋放的影響很小，藥物釋放曲線形狀主要受制備材料和制備條件的影響，如表面活性劑濃度、制備溫度和脂質(zhì)基質(zhì)的性質(zhì)。這意味著溫度越高、表面活性劑濃度越大，納米粒的載藥量越低。聚集在脂質(zhì)核外層或表面的藥物以藥物突釋的形式釋放出來(lái)，分散在脂質(zhì)核內(nèi)的藥物則緩慢地釋放。 SLN 的毒性 SLN 是用毒性低，生物相容性好的脂質(zhì)材料為載體，同聚合物納米粒相比， SLN 的毒性大大降低。 綜上所述看出： SLN的明顯優(yōu)點(diǎn)是其成分都是生物相容的，制備方法快速有效，可以大規(guī)模生 181 產(chǎn)，避免使用有機(jī)溶劑和有可能生產(chǎn)出高濃度的產(chǎn)品等方面。包封率受多種因素的影響，如：藥物在熔融脂質(zhì)中溶解度、藥物與載體在熔融時(shí)的相容性、 SLN的理化結(jié)構(gòu)、脂質(zhì)多晶型、勻質(zhì)溫度、水相乳化劑濃度等。 6. 2 脂質(zhì)體 概述 早在 60 年代初，英國(guó) Bangham 等發(fā)現(xiàn)，磷脂分散在水中能形成多層微囊，每一層均為磷脂雙分子層，各層之間被水相分開(kāi)，這種具有類(lèi)似生物膜的磷脂雙分子結(jié)構(gòu)稱為脂質(zhì)體。 2． 長(zhǎng)效性：脂質(zhì)體作為藥物的載體具有長(zhǎng)效作用。 5． 擴(kuò)大性：如果藥物是抗原，脂質(zhì)體還可作為疫苗的免疫佐劑。從圖中可以看出它們的一些基本特點(diǎn)，普通脂質(zhì)體一般呈中性，陽(yáng)離子脂質(zhì)體帶正電荷，通過(guò)單鍵、雙鍵和多重鍵結(jié)合；長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體主要由高分子物質(zhì)或葡萄糖醛酸等物質(zhì)修飾；免疫脂質(zhì)體是含有抗體或抗體片段的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。根據(jù)用途對(duì)脂質(zhì)體粒徑的特定要求，不同大小脂質(zhì)體?？梢圆捎貌煌闹苽浞椒?。 （ 2）小單層脂質(zhì)體（ small unilamellar vesicles， SUV） 這是具有脂質(zhì)雙分子層的最小單位，其大小根據(jù)介質(zhì)的離子強(qiáng)度和膜的脂質(zhì)組成不同而不同，因此作為藥物的載體受到限制。 另外，有的文獻(xiàn)也按制備方法來(lái)分類(lèi)，如 REV（ reverseevaporation vesicles）指用逆相蒸發(fā)法制備的脂質(zhì)體； DRV（ driedreconstituted vesicles）指干燥重建法制得的脂質(zhì)體； MVL（ multivesicular liposom