【正文】 200（ 95%大豆卵磷脂）和牛去氧膽酸鹽組成，將 SLN分散在 2%海藻糖溶液或 2% poloxamer 188溶液中，在 121℃下濕熱蒸汽滅菌 15min。發(fā)現(xiàn) Acidan N12 SLN的平均粒徑?jīng)]有改變，廿二碳烷酸 SLN的平均粒徑從 70nm增大到 135nm，硬脂酸 SLN的平均粒徑從 55nm增大到 110nm。 一年以后所有體系的 171 粒徑均增大 ， Acidan N12 SLN增大到 350nm，廿二碳烷酸 SLN增大到 120nm，硬脂酸 SLN增大到 450nm，但是沒有微米級的粒子出現(xiàn)。濕熱蒸汽滅菌對粒子的 zeta電位 影響不大。 γ射線照射適用于對溫度敏感的樣品。用濕熱蒸汽滅菌，卵磷脂體系比 poloxamer體系穩(wěn)定，但是對于γ射線滅菌，兩者沒有顯著區(qū)別。濕熱蒸汽滅菌的溫度控制在 121℃時，粒徑增大的幅度比γ射線照射的要大；但在 110℃時，粒徑增大的幅度比γ 射線照射的要小 [14]。射線照射法由于射線的能量很高，在照射過程中會產(chǎn)生自由基，這些自由基與沒有經(jīng) 過修飾的樣品重新結(jié)合或發(fā)生副反應(yīng)而使樣品的結(jié)構(gòu)發(fā)生化學(xué)改變。藥物降解的程度和化學(xué)反應(yīng)有關(guān)。分子高流動性（半固體或液體）和氧也能促進射線照射導(dǎo)致的降解反應(yīng)。因此樣品經(jīng)照射后，可能出現(xiàn)脂質(zhì)雙層組成的改變。對濕熱蒸汽滅菌和γ射線照射所導(dǎo)致的化學(xué)降解研究并不多，但需要指出的是，降解并不總是表現(xiàn)為粒徑的增大。有的配方如某些磷脂或自由脂肪酸對粒子有保護作用，但是會引起毒性。圍繞 SLN的化學(xué)穩(wěn)定性方面的研究至關(guān)重要，這對解決 SLN體系的滅菌問題提供幫助。 5．干燥 盡管有文獻報道 SLN的水溶液分散體的粒徑能穩(wěn)定 12~36個 月，但由于 SLN分 散體是熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，通常在短時間里就出現(xiàn)粒徑的增大、粒子聚合甚至膠凝的現(xiàn)象。為了提高 SLN的化學(xué)和物理穩(wěn)定性，保持其原有的的粒徑，阻止 Ostwald熟化和避免水解，常用的方法是將 SLN分散液干燥成固體。另外 SLN分散液干燥后，可將藥物制成固體制劑如片劑、膠囊等，可以增加藥物的給藥方式和給藥途徑。由于 SLN的特殊性質(zhì)，常用的干 燥法有冷凍干燥和噴霧干燥。 （ 1）冷凍干燥法 樣品經(jīng)冷凍干燥變成固態(tài)后，具有更好的化學(xué)和物理穩(wěn)定性。但是在凍干過程中有兩種相變會影響其穩(wěn)定性。第一，在冷凍干燥過程 中從水性分散體變成粉末時，由于樣品的滲透壓和 pH值的改變，可能會引起不穩(wěn)定問題；第二，再增溶作用，粒子由于處在一個低含水量、高粒子濃度、高滲透壓的環(huán)境中，易發(fā)生聚合。 冷凍干燥法將降低表面活性劑的保護作用。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng) SLN 分散體的脂質(zhì)含量不超過 5%時，脂質(zhì)粒子的直接接觸減少，有更高的升華速度和更高的比表面 積，可以有效抑制粒子的聚合。冷凍防護劑 [15， 16]的加入可以減少粒子的聚合，還能使得到的干燥產(chǎn)品具有更好的再分散特性。常用的冷凍防護劑有山梨醇、甘露糖、海藻糖、葡萄糖和聚乙烯吡咯烷酮等。冷凍防護劑可以占 據(jù)離散的脂質(zhì)納米粒之間的空間位置，從而阻止其相互接觸；還能和表面活性劑的活性位點發(fā)生作用，形成一層假性水化殼。一般來講，冷凍防護劑的濃度 在 10%~15%之間， SLN 的平均粒徑和粒徑分布在冷凍干燥－再分散試驗后，平均粒徑一般增大 ~ 倍，沒有冷凍防 護劑的樣品的粒徑增大得更多。冷凍防護劑的保護作用由大到小為：海藻糖→蔗糖→葡萄糖和麥芽糖。以海藻糖的效果最好，它可以充分阻止粒 172 子的聚合和藥物的滲漏。 冷凍防護劑加入的時間也會影響最后產(chǎn)品的性質(zhì)。冷凍防護劑在乳勻之前加入效果最好，平均粒徑在凍干過程中幾乎不發(fā) 生改變。冷凍防護劑和脂質(zhì)的重量比 為 ~ 較合適。 載藥的 SLN 通過冷凍干燥有可能使其穩(wěn)定性大大降低，這可能與游離的藥物分子有關(guān)。載藥納米粒 Zeta 電位降低，滲透壓和 pH 值改變進而導(dǎo)致粒子的穩(wěn)定性下降。因 此提高藥物的包封率尤為重要 [17]。 冷凍的過程會影響晶體的結(jié)構(gòu)和凍干粉的性質(zhì)。冷凍的的速度取決于特定的樣品和條件。快速冷凍會導(dǎo)致小型和異質(zhì)晶體出現(xiàn)，增加了非晶型的含量，降低冷凍效果。晶體的大小是影響冷凍干燥過程中升華速度的關(guān)鍵因素。大量小晶體和非晶區(qū)的出現(xiàn)導(dǎo)致形成非常緊密的凍干粉網(wǎng)，因而降低了升華速 度。緩慢冷卻可以形成大晶體和自由的升華物，但是常常會增強冷凍所導(dǎo)致的不穩(wěn)定現(xiàn)象。此外，對冷凍的 SLN 分散體進行預(yù)處理（ 22℃處理 2h，接著降至 40℃處理 2h）可能會 提高凍干粉的質(zhì)量。 （ 2）噴霧干燥 噴霧干燥比冷凍干燥法經(jīng)濟，但較少用 于 SLN 體系。主要是由于高溫、高剪切力和脂質(zhì)的部分熔化，易造成粒子的團聚。只有當(dāng)脂質(zhì)熔點大于 70℃，冷凍防護劑和脂質(zhì)都能在噴霧干燥過程中保持 SLN 粒徑大 小不變時才考慮采用此法 [18]。 SLN 的 性質(zhì) 1． 過冷態(tài)及過冷分散體的形成 由一些短鏈的三脂肪酸甘油酯如三 肉豆蔻酸甘油酯（ Tm=56℃）和混合脂肪酸酯如 Witepsol H42 (Tm=41℃ )采用熱熔法所制得的納米粒，在室溫或在冰箱中儲存， DSC 和 X射線衍射并未檢測到特征峰。通過定量的高分辨 1HNMR[19]測定發(fā)現(xiàn)，當(dāng)熔融乳化納米粒冷卻到其結(jié)晶溫度以下時，脂肪酸酯分子仍有很強的流動性。這些結(jié)果表明，三脂肪酸甘油酯制成納米粒后，其結(jié)晶溫度降低 20℃ ~30℃，所以三肉豆蔻酸甘油酯或 Witepsol H42 等熔點較低的脂質(zhì)采用熱乳勻法所制得的納米粒，在室溫下以過冷態(tài)的形式存在。三月桂酸甘油酯（ Tmelt=47℃）納米分散體于冰箱中保存數(shù)年后，仍然保持過冷態(tài)形式（儲存兩年后，發(fā)現(xiàn)僅有 2％的結(jié)晶體）。 人們對三脂肪酸甘油酯過冷現(xiàn)象的研究已有幾十年的歷史。對于膠體體系，三脂肪酸甘油酯的熔化與結(jié)晶的溫度與單脂肪酸甘油酯不同，混合脂肪酸甘油酯和高熔點的脂肪酸酯的納米粒形成過冷態(tài)的傾向較小。這是因為長鏈脂肪酸可作為結(jié)晶中心使過冷態(tài)的結(jié)晶溫度提高。加入藥物也會影響過冷現(xiàn)象。就微米體系而言，三脂肪酸甘油酯乳滴結(jié)晶的溫度比納米粒要高，其結(jié)晶溫度降低值與乳滴粒徑對數(shù)成線性關(guān)系，當(dāng)粒徑在 1μ m~10μ m 范圍內(nèi)時，結(jié)晶溫度降低值在 15℃ ~25℃之間。而對納米 173 體系來講，其結(jié)晶的溫度要低，并且粒徑對結(jié)晶的溫度影響也小。這說明要想獲得穩(wěn)定的三脂肪酸甘油酯的過冷分散體，必須要制備納米粒。 2． 多晶型轉(zhuǎn)化及老化現(xiàn)象 制備固體脂質(zhì)納米粒時，納米分散體的溫度必須降低到三脂肪酸甘油酯結(jié)晶溫度以下，在形成納米混懸液時，結(jié)晶并不是最后步驟，因為三脂肪酸甘油酯膠體分散體結(jié)晶后通常還要經(jīng)過一個多晶型轉(zhuǎn)化過程。例如，三棕櫚酸甘油酯納米粒首先形成α型結(jié)晶，隨后同塊體材料一樣轉(zhuǎn)變成穩(wěn)定的β 型。然而，多晶型的轉(zhuǎn)變可嚴(yán)重影響納米分散體的性能。單脂肪酸甘油酯膠體體系比塊 體材料轉(zhuǎn)變成β 型的速度更快，可能是由于較小的結(jié)晶區(qū)域具有更大的體表面積之比而導(dǎo)致晶格弛豫。另外，由于膠體分散體具有較高的能量，能夠提供其晶型轉(zhuǎn)化所需要的能量。這些同樣能夠解釋三棕櫚酸甘油酯α 型小納米粒比大納米粒不穩(wěn)定的現(xiàn)象。同塊體材料相比，短鏈脂肪酸甘油酯納米粒晶型轉(zhuǎn)變的速度比長鏈脂肪酸甘油酯快 [20]。 三脂肪酸甘油酯，混合脂肪酸酯納米粒的多晶型行為與單脂肪酸甘油酯不同。例如脂肪酸酯Witepsol H4 Witepsol E85 β ’晶型最穩(wěn)定，中間態(tài)β 1 或β 2 型也被認(rèn)為是穩(wěn)定的。β ’型脂肪酸酯轉(zhuǎn)變成β型通常需要數(shù)月乃至一年的時間。 室溫下，三脂肪酸甘油酯納米粒比塊體材料更容易轉(zhuǎn)變成穩(wěn)定的晶型，這表明膠體分散體具有更高的動力學(xué)特性。同塊體材料相比，將脂肪酸酯納米粒結(jié)晶轉(zhuǎn)變成較穩(wěn)定的α 型時間較長，但結(jié)晶后，其立即轉(zhuǎn)變成β ’型，表明脂肪酸酯具有較低的結(jié)晶溫度。當(dāng)脂肪酸酯結(jié)晶溫度明顯低于α 型熔化溫度時，α 型被認(rèn)為是最穩(wěn)定的。 就長鏈脂肪酸甘油酯或混合脂肪酸酯來講， SLN 結(jié)晶后其變化過程持續(xù)幾天甚至幾周。除了多晶型現(xiàn)象，老化過程對脂質(zhì)的晶型也有影響 [21]。 上述結(jié)果表明， SLN 無論從熔化到重結(jié)晶還 是固化后晶型轉(zhuǎn)變及老化現(xiàn)象，都具有很高的可變性，貯存期間 SLN 的晶型并不能從本體的晶型來推斷，因為二者晶型轉(zhuǎn)變的動力學(xué)過程完全不同。 脂質(zhì)結(jié)晶的完全程度及晶型轉(zhuǎn)化與藥物的包封和釋放有密切的聯(lián)系。按以下的順序，熱力學(xué)穩(wěn)定性依次增加，脂質(zhì)的密度依次增加，藥物的包封率依次降低： 過冷熔融物→α晶型→β ’ 晶型→β晶型 因為粒子的粒徑特別小，而且存在乳化劑，脂質(zhì)的結(jié)晶和晶型的轉(zhuǎn)變受到很大的阻礙。晶型的轉(zhuǎn)變有時會極緩慢。 DSC 和 X射線衍射廣泛地應(yīng)用于考察脂質(zhì)的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。 DSC 應(yīng)用的原理是不同的脂質(zhì)晶型具有不同的熔點 和熔解焓。通過示差熱掃描，我們可以判斷脂質(zhì)晶格中不同孔隙的長度。 3． 表面活性劑的影響 表面活性劑的加入能顯著影響三脂肪酸甘油酯的晶型轉(zhuǎn)變。例如，制備三棕櫚酸甘油酯 SLN 時， 174 當(dāng)用 Cremophor EL 作為穩(wěn)定劑，α 晶型消失；如果用甘膽酸鈉為穩(wěn)定劑時，則該體系主要以α 晶型形式存在。當(dāng)以親水性表面活性劑作為穩(wěn)定劑時，它主要分布在水相和粒子表面上。因此，表面活性劑不但對納米粒的粒徑和穩(wěn)定性有影響，而且對粒子的內(nèi)部結(jié)構(gòu)也有重要影響。但對其界面的相變動力學(xué)的影響對比核的影響更大。 由于甘膽酸鈉穩(wěn)定的 SLN α 晶型的穩(wěn)定性較高，因此可以用來研究經(jīng)過多晶型轉(zhuǎn)化后基質(zhì)的結(jié)構(gòu)及粒子的形狀。例如 tripalminSLN，采用熱勻法制備時，當(dāng)緩慢冷卻到室溫時，其以普通的α 晶型形式存在， SAXD 和 WAXD 顯示衍射峰較強，迅速冷卻時，所得到的α 晶型 WAXD 強而 SAXD弱。電鏡顯示，α 型同轉(zhuǎn)變后的β 型相比，粒子較小并且內(nèi)部結(jié)構(gòu)不均一，α 晶型粒子為球形，核不規(guī)則。這些性質(zhì)對于研究該膠體體系的穩(wěn)定性及藥物的包封率有很重要的意義 [22]。 4．粒徑的影響 正如脂質(zhì)在塊體材料和膠體體系中理化性質(zhì)發(fā)生改變一樣，在膠體體系中， 粒徑的大小同樣能影響脂質(zhì)的性質(zhì)。 DSC 曲線顯示粒徑越小，其特征峰越寬，并向低溫方向位移；對于粒徑較小的單脂肪酸甘油酯膠體體系來講，在低溫范圍內(nèi)還出現(xiàn)了一些較強的特征峰。這些吸收峰是不連續(xù)的。如果該體系含有其他的化合物，則這些吸收峰變寬，并且不易檢測到（圖 61[23]）。 對于膠體分散體系來講，粒徑和熔化溫度的關(guān)系可用 GibbsThomson 方程來描述： T 是粒徑為 r 時的熔化溫度， T0 為脂質(zhì)在相同外壓下的熔化溫度，γ sl 為固－液的界面張力， VS為固體的體積，Δ Hfus 為熔化焓。 但是該方程對于那些離散的熔化轉(zhuǎn)變和當(dāng)出現(xiàn)一系列尖銳的特征吸收峰（超過 10 個）時不能很好的解釋，以及那些逐步熔化過程中所出現(xiàn)的一些細(xì)微變化也不適用。 三脂肪酸甘油酯 SLN 粒徑減小時 X 射線衍射曲線也發(fā)生改變，小角 X 衍射峰變寬，且向小角位移。廣角衍射在 和 ~ 的范圍變化顯著。在 ， 和 有較強的反射；另外在大多數(shù)情況下，在 處有一個小的衍射峰（圖 62[23]）。 175 5． 形成凝膠 同脂質(zhì) o/w 乳液相比， SLN 體系中脂質(zhì)的含量很高（ 5%~10％）。因此單獨使用磷脂作為穩(wěn)定劑并不能使該體系穩(wěn)定。在冷卻貯存過程中，它容易形成半固體導(dǎo)致膠凝。但在一般情況下，該體系中加入適量的粒子型或者非離子型表面活性劑，如甘膽酸鈉、四丁醛或 poloxamer 則可防止膠凝。 DSC和 X射線衍射研究表明，凝膠是由三硬脂酸甘油酯的三維網(wǎng)狀結(jié)晶所構(gòu)成 [24]。 6． 幾種膠態(tài)共存 幾種膠態(tài)種類的出現(xiàn)是一個重要的、值得深思的現(xiàn)象，但是 這方面還沒有被引起足夠的重視。穩(wěn)定劑并不僅僅局限于作用在脂質(zhì)表面，也可作用于水相。因此表面活性分子（如 SDS）會以三種形式出現(xiàn)，即：①在脂質(zhì)的表面；②形成膠束；③表面活性劑單體的形式。卵磷脂可以形成脂質(zhì)體，并且在納米乳中能檢測到。甘膽酸鹽和卵磷脂穩(wěn)定的體系以及其它相關(guān)的體系中也發(fā)現(xiàn)有混合膠束。膠束、混合膠束和脂質(zhì)體因為有選擇性藥物結(jié)合位點，因此可以增加藥物的溶解度。在最近的一項十六圖 61 不同粒徑的四丁酚醛穩(wěn)定的三肉豆蔻酸甘油酯 SLN 的 DSC 圖 t / ℃ 圖 62 不同粒徑的四丁酚醛穩(wěn)定的三肉豆蔻酸甘油酯 SLN 的 X射線衍射圖 強 度 通 道 176 酸鯨蠟（醇）酯 SLN的電子自旋共振（ ESR）的研究中發(fā)現(xiàn)，親脂性的硝基化合物只位于膠束中，而不是在脂質(zhì)中。 僅僅描述幾種膠態(tài)是不 足以表征膠態(tài)脂質(zhì)分散體結(jié)構(gòu)的，因為就藥物的穩(wěn)定性和藥物的釋放來說，膠態(tài)之間的動態(tài)變化非常重要。所以應(yīng)對不同膠態(tài)分配過程的動力學(xué)進行深入的研究。如易水解的藥物分子在水中比在脂質(zhì)中更容易溶解，更容易富集在粒子的表面。藥物降解動力學(xué)由藥物的化學(xué)活性和藥物在水相或脂 /水界面上的濃度等因素決定。不穩(wěn)定的藥物與水接觸后很快水解，因此藥物在不同環(huán)境下的分配平衡很容易改變。載藥系統(tǒng)只有抑制藥物的再分配，才能對藥物起到保護作用 [25，26]。提高基質(zhì)的粘度能降低藥物在載體中的擴散系數(shù)，因此 SLN 比納米乳更有優(yōu)勢。但是對于膠態(tài) 藥物載體來說，影響藥物穩(wěn)定性的因素很多，而且在相同條件下， SLN 分散體的表面積比納米乳要大的多，這是因為 SLN 粒子的形狀是非球形的。有人用 ESR 研究了 乳酸羥基乙酸共聚物（ PLGA）和幾種脂質(zhì)基質(zhì)，結(jié)果表明 PNP 能更有效的