【正文】 酶蛋白，在 HIV 復(fù)制周期中起關(guān)鍵作用；有 3種功能，即以 HIV RNA 為模板催化負(fù)鏈 DNA 合成；發(fā)揮 RNase H 作用，降解 RNADNA 雜交鏈中RNA 模板；以病毒負(fù)鏈 DNA 合成正鏈 DNA， 生成雙鏈 DNA 原病毒。逆轉(zhuǎn)錄酶是理想的藥物作用靶 6 點(diǎn)，也是第一個(gè)用于篩選抗 HIV 藥物的體外靶酶模型。已批準(zhǔn)上市的抗 HIV 逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑共 11 個(gè)品種，其中核苷類 HIV 逆轉(zhuǎn)錄酶抑制藥有 8 個(gè)：齊多夫定（ zidovudine）、去羥肌苷 (didanosine)、扎西他濱（ zalcitabine）、司他夫定（ stavudine）、拉米夫定 (lamivudine)、阿巴卡韋（ abacavir）、替諾福韋酯（ tenofovir disoproxil fumanrate）和恩曲他濱（ emtricitabine）；非核苷類 HIV 逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑有 3 個(gè)：奈韋拉平（ nevirapine）、地拉韋定（ delavirdine）和依非韋倫（ efavirenz）；復(fù)方制劑有 4 個(gè)： bivir（齊多夫定 300mg+拉米夫定 150mg）、 trizivir（齊多夫定 300mg+拉米夫定 150mg+阿巴卡韋 300vmg）、Epzi（拉米夫定 300mg+阿巴卡韋 600vmg）和 Truvada（恩曲他濱 200mg+替諾福韋酯 300mg）。目前對(duì)現(xiàn)有的 HIV 逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑研究其納米載藥、釋藥系統(tǒng)的品種有齊多夫定、司他夫定、去羥肌苷和扎西他濱等 4 種藥物，拉米夫定的納米載藥、釋藥系統(tǒng)主要是研究其肝靶向性，用于治療乙型病毒性肝炎，將在抗肝炎病毒藥論述。 齊多夫定（ zidovudine、 AZT） (1) 一般特性 AZT 為白色或談黃色結(jié)晶，在 25℃水中溶解度為 ；能選擇性抑制 HIV 逆轉(zhuǎn)錄酶，阻斷病毒 DNA 鏈的延伸而不干擾宿主細(xì)胞聚合酶；在細(xì)胞內(nèi)抗 HIVⅠ病毒病變的半數(shù)抑制濃度 (ID50)為，抗 HIVⅡ?yàn)?。 AZT 的口服生物利用度約 65％，食物對(duì) AUC 可降低 50%以上。成人口服 200mg， 達(dá)峰時(shí)間（ tmax）為 ～ 小時(shí)，血藥濃度峰值（ Cmax）為 ～ 。在體內(nèi)分布廣泛，穩(wěn)態(tài)分布容積（ Vd）為 ，血漿蛋白結(jié)合率為 34％～ 38％，易通過(guò)血腦屏障，腦脊液與血清藥濃比值為 ，唾液內(nèi)藥濃為血濃的 67％，乳汁藥濃接近血藥濃度； AZT 吸收迅速，可通過(guò)胎盤(pán)分布至胎兒組織?？诜o藥半衰期 (t1/2) 約 小時(shí)，進(jìn)入細(xì)胞后經(jīng)胸苷激酶磷酸化為活性成分三磷酸齊多夫定的 t1/2為 3 小時(shí)； AZT 主要由肝細(xì)胞代謝，生成無(wú)活性吡喃葡糖胸苷代謝物，經(jīng)腎臟排泄；另有少量 3 氨基 代謝物有細(xì)胞毒性，約 18％以原形藥經(jīng)腎。主要的不良反應(yīng)為骨髓抑制，使中性粒細(xì)胞減少及貧血。 (2) 研究概況 美國(guó) FDA 于 1987 年 3 月首次批準(zhǔn)用于 CD4 細(xì)胞計(jì)數(shù)低于 200／ mm3 的成人晚期艾滋病綜合癥（ ARC）和 AIDS 患者，口服 200mg，一日 6 次；其后擴(kuò)大適應(yīng)癥用于 CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)低于 500／ mm3的成人及 12 歲以下兒童 HIV 感染者和 .預(yù)防 HIV 陽(yáng)性孕婦母嬰垂直傳播。成人口服 200mg，一日 3次； 3 個(gè)月至 12 歲兒童，按體表面積算，口服 90～ 180mg/m2；孕期 14 周以上的孕婦口服 100mg，一日 5 次， 分娩時(shí)改用靜脈滴注 2mg/kg，一小時(shí)滴完后劑量減半，直至臍帶結(jié)扎；新生兒分 4 次口服糖漿 2mg/kg，至出生后 6 周。國(guó)外批準(zhǔn)的制劑有膠囊、片劑、靜脈注射劑及糖漿劑；我國(guó) 2022 年批準(zhǔn)生產(chǎn)原料藥及上述 4 種制劑以及我國(guó)自行研制的靜脈注射凍干粉針劑，也批準(zhǔn)英國(guó)和加拿大進(jìn)口膠囊 7 劑。 (3) 聚合物載齊多夫定納米粒子 Dembri[7]等用乳化聚合法制備 [3H]標(biāo)記的齊多夫定聚氰基丙烯酸異己酯納米粒 (AZTPIHCANPs),并研究其對(duì)大鼠胃腸道和相關(guān)淋巴組織的靶向作用， [3H]AZTPIHCANPs 平均粒徑 250177。 20nm，載藥量 8％，包封率 50％， δ電位 23177。 5mV。此納米粒在體外釋藥速度取決于介質(zhì)含生物酶的性質(zhì)和數(shù)量。在水中和含胃蛋白酶的胃液中快速釋出 35％ AZT，其后平緩釋放， 8 小時(shí)后累計(jì)釋出 40％ AZT；而在胰酶的介質(zhì)中快速釋出 60％ AZT，其后 8 小時(shí)累計(jì)釋出 80％ AZT，這與胰酶中含有酯水解酶，使聚合物發(fā)生降解有關(guān)。大鼠分別給予膠體狀納米混懸液和 AZT 水溶液 （ 微居 里 ）， 30 及90 分鐘后， AZT 水溶液被迅速吸收并從尿液排泄，而納米混懸液在胃腸道中有較長(zhǎng)的滯留時(shí)間，其AZT 的含量分別為給藥量的 67％及 64％，比 AZT 水溶液的 15％和 11％高出 ～ 倍，兩組藥物在血液和、肝、脾、肺、腎等其它器官的 AZT 含量不足 5％；測(cè)量?jī)山M藥物在各個(gè)組織的放射性濃度，胃和腸道放射性濃度最高，在 30 分鐘時(shí)，分別是水溶液的 4 和 28 倍；在 90 分鐘時(shí)分別是水溶液的 和 倍。 Lobenberg 等 [810]用乳化聚合法制備 14C 標(biāo)記的齊多夫定聚氰基丙烯酸正己酯納米粒(AZTPHCANPs)，平均粒徑 230177。 20nm，載藥量為 48～ 55％， δ 電位 177。 3mV。納米粒用 聚山梨酯 80 包裹，對(duì) δ電位無(wú)明顯影響。大鼠分別灌胃或尾靜脈注射，一次給予 AZT 納米粒溶液或 AZT 對(duì)照溶液 ，灌胃給藥組的血藥濃度曲線如圖 32 所示，前 30 分鐘 AZT 對(duì)照組 14CAZT 濃度達(dá)到最高值，并高于納米粒組，而在 60 分鐘后，納米粒組在血中的 14CAZT 濃度均高于對(duì)照組。除骨髓和淋巴結(jié)之外，其它器官 14CAZT 濃度有類似結(jié)果和趨勢(shì)；由于納米粒對(duì)胃有生物黏附性，使 AZT延遲釋放的；但納米粒的 14CAZT 在肝臟的 AUC 比對(duì)照組高 30％，有助于改善生物利用度；靜脈注射納米粒給藥組在肝臟的 14CAZT 濃度是對(duì)照溶液的 ～ 18 倍， AUC 增加 倍，差距隨時(shí)間的延長(zhǎng)而增大，脾臟和肺部有類似的結(jié)果，納米粒組在骨髓及淋巴組織中的藥物濃度也比對(duì)照組高，但變化趨勢(shì)不同。 AZT 納米粒注射 5 分鐘后， RES 組織中富集 23％藥物，對(duì)照組僅 9％； 8 小時(shí)后， 60％AZT 靶向 RES 組織，對(duì)照組僅 12％，表明納米粒載藥系統(tǒng)有良好的被動(dòng)靶向性。對(duì)照組有 177。 ％ AZT 經(jīng)腎臟排泄，納米粒組 177。 ％經(jīng)腎臟排泄，另有 177。 ％經(jīng)糞便排泄。用聚山梨醇 80修飾載 AZT 的納米粒，靜脈注射給藥后 15 及 60 分鐘， AZT 的濃度較未修飾的納米粒升高； 1 小時(shí)后 ,肝臟對(duì)藥物的攝取量較未修飾的納米粒顯著降低。腦中 AZT 攝取量明顯增加，藥物濃度比未修飾的納米粒高出 35％，較對(duì)照組高出 45％，有顯著性差異，表明載藥納米?？稍龃?AZT 對(duì)血腦屏障的穿透力。用 AZT 納米粒給大鼠灌胃 [10]，與 AZT 水溶液比較， AUC 升高 20％，血藥濃度達(dá)峰時(shí)間（ tpeak）為 1 小時(shí)，而 AZT 水溶液組為 30 分鐘；納米粒在肝臟的分布與對(duì)照組比較也有顯著性差異， AUC 較 8 水溶液組高 30％；其它 RES 也比對(duì)照組高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；腦中 AZT 的藥濃比對(duì)照組 高 33％?？诜?AZT 溶液， 177。 ％經(jīng)腎臟排泄，納米粒組有 177。 ％由糞便排出，可能體內(nèi)對(duì)納米載藥系統(tǒng)中的藥物吸收不完全，或改變排泄途徑。 AZT 結(jié)合到納米粒子后能選擇性被富含巨噬細(xì)胞的器官所吸收，而巨噬細(xì)胞是 HIV 感染過(guò)程最重要的靶細(xì)胞之一，將抗 HIV 藥物制成納米載藥制劑有利于提高抗 HIV 的療效。 圖 32 大鼠灌胃給予 AZT 納米粒溶液或 AZT 對(duì)照溶液的血濃曲線 (4) 可降解聚合物載齊多夫定納米球 Callender 等 [11]將 AZT 包封于 50： 50 聚乙交酯 丙交脂共聚物 [poly(lactidecoglycolide)]納米球中，比較家兔灌胃及胃腸外給藥的藥代動(dòng)力學(xué)特性。納米球呈白色粉未狀，載藥量為 ％。將其懸浮于生理鹽水中，按 10mg/kg 劑量灌胃或靜脈注射給藥。靜注后 10 分鐘，血藥濃度峰值為 mol（ μ mol），迅速?gòu)难邢?，平?t1/2為 小時(shí)，清除率（ C L）為 （ L/h），平均分布容積 (Vss)為 L/kg（ L/kg）； 灌胃給予常規(guī) AZT 糖漿劑，吸收迅速，一小時(shí)后達(dá)到血藥濃度峰值 , 6 小時(shí)后血藥 濃度＞ 1μ M， 24 小時(shí)＜ M；而給予添加黏附劑的納米球懸浮液有緩釋作用，能維持較高的血藥濃度及增加口服生物利用度，其它藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)如表 33 所示。 表 33 新西蘭白兔靜注及口服 AZT 微球混懸液與常規(guī) AZT 糖漿藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)比較 劑 型 給藥途徑 劑 量 AUC (μ mol h) 生物利用度 F（％） Cmax （μ M） 納米球生理鹽水懸浮注射液 . 10mg/kg （ ） / / 常規(guī) AZT 糖漿劑 . 10mg/kg （ ） 97 （ ） 納米球懸浮液加黏附劑輔料 . 10mg/kg （ ） 84 （ ） 納米球懸浮液加黏附劑輔料 . 50mg/kg （ 1432） 76 （ ） 納米球懸浮液不加黏附劑輔料 . 50mg/kg （ 1126） 55 （ ） (5) 載齊多夫定固體納米脂質(zhì)體 Hashem[12]等用高壓乳勻法將不同比例的三月桂酸甘油酯 (TL)和磷脂 (PL)制成 SLN 的核粒，加入表面 9 活性劑二棕櫚酰磷脂 酰膽堿（ DPPC）或 DPPC 與 二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿甘油（ DMPG）的混合物，使SLN 成中性或帶負(fù)電荷，再將齊多夫定棕櫚酸酯前藥（ AZTP）吸附于 SLN，得到載藥固體納米脂質(zhì)體 (AZTPSLN)， AZTPSLN的包封率達(dá) 90％；帶負(fù)電荷的 AZTPSLN的載藥量高于中性 AZTPSLN，磷脂的用量對(duì)載藥量有較大影響 ,如圖 33 所示。而齊多夫定在中性或帶電荷固體脂質(zhì)體（ AZTSLN）的包封率不到 ％。脂質(zhì)和表面活性劑的比例對(duì) AZTPSLN 的粒徑和載藥量影響不大，增加表面活性劑的比例對(duì) δ 電 位有一定的的影響，脂質(zhì)和表面活性劑的比例對(duì) AZTPSLN 的粒徑、載藥量和 δ電位影響如表 32 所示。選用適宜的穩(wěn)定劑，經(jīng)高壓滅菌、冷凍干燥后再重新水化分散， AZTPSLN的粒徑、 δ電位和藥物的包封率無(wú)明顯變化。 圖 33 磷脂的用量和 SLN 的電荷對(duì) AZTP 的載藥量的影響 注： SLN 用 200ngTL 制成 SLNs 核，中性 SLN 用 DPPC， 負(fù)電荷 SLN 用 DPPC： DMPG 為 95： 5 作表面活性劑處理 表 32 脂質(zhì)和表面活性劑的比例對(duì) AZTPSLN 的粒徑、載藥量和 δ電位影響 PL與 DPPC/ DMPG克分子比 粒徑（ nm） δ電位（ mV） AZTP 的載藥量（％） 95/5 294177。 32 15177。 4 31177。 7 90/10 201177。 29 27177。 4 31177。 8 80/20 281177。 37 39177。 6 37177。 6 70/30 315177。 50177。 6 36177。 7 注： SLN 用 200 mg TL 和 20mg PL 制備，數(shù)據(jù)為三批試驗(yàn)平均值177。 . 由 60mg PL 和 200 mg TL 制成載 AZTP 和不載藥的 SLN 形態(tài)呈乳白色球狀顆粒， TL 核外殼包裹 10 著 34 層雙層 PL，厚度約 25nm，載 AZTP 的 SLN 不改 變物理結(jié)構(gòu)，其凍干切片電鏡掃描如圖 所示。 圖 34（ a）載帶負(fù)電荷 AZTPSLN 電鏡掃描圖 圖 34(b) 帶負(fù)電荷 SLNs 電鏡掃描圖 Hashem[13]等的另一項(xiàng)研究將上述帶負(fù)電荷的 SLNs 用二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺 N（聚乙二醇） 2022（ PEPEG）包裹，考察其在 50％牛血請(qǐng)培養(yǎng)液的穩(wěn)定性；并將 SLN 與 [3H]AZTP 結(jié)合，研究其在小鼠體內(nèi)的生物分布。結(jié)果表明 SLN 用 PEPEG 包裹不影響 AZTP 的載藥量，兩者均為 98177。 2％； SLNs分 散在 Hepes 緩沖液和牛血請(qǐng)培養(yǎng)液中，對(duì)粒徑也無(wú)明顯變化，均在 152183nm177。 2648nm，但 δ電位有明顯下降，從 22mV，下降至 5mV。 載 AZTP 的 SLN 及 SLN PEPEG 在不同介質(zhì)中物理穩(wěn)定性良好，均未觀察到顆粒凝聚現(xiàn)象。在 37℃的 Hepes 緩沖液中，反相透析實(shí)驗(yàn)表明，磷脂的相變導(dǎo)致不同的體外釋藥特征。 `大鼠尾靜脈注射 AZTPHCANPs，藥物從血液消除呈二室模型，并降低在腎臟的排泄，增加在肝臟的分布，表明 AZTPSLN 可增加藥物對(duì) PES 的靶向性，減弱巨噬細(xì)胞對(duì)納米載藥系統(tǒng)的 快速攝取，提高血液中藥物的濃度。 CD1 小鼠外側(cè)尾靜脈注射 02 ml AZTP、 AZTPSLN 和AZTPSLNPEPEG， SLN 和 SLNPEPEG 在血液中 AZTP 的放射性強(qiáng)度均大于 AZTP 對(duì)照組。其血藥濃度曲線及在各個(gè)組織的分布如圖 35 及圖 36 所示。 11 圖 35 小鼠尾靜脈注射 AZTP、 AZTP