【正文】 丁卡因和依托度酸的納米粒都會(huì)遇到藥物突釋的問題。納米乳的冷卻會(huì)導(dǎo)致藥物在脂質(zhì)中產(chǎn)生過飽和現(xiàn)象，進(jìn)而藥物先于脂質(zhì)沉淀下來，進(jìn)一步的冷卻會(huì)使脂質(zhì)重新結(jié)晶，包圍含藥的核形成膜的結(jié)構(gòu)。通過調(diào)節(jié)溫度或減少 SLN 中的水分，促使納米粒中脂質(zhì)晶體構(gòu)型的轉(zhuǎn)變，使其晶型由α變?yōu)棣?，促?藥物釋放，從而把一個(gè)普通的 SLN 變成一個(gè)智能的藥物載體系統(tǒng)。納米粒中脂質(zhì)結(jié)晶部分為α構(gòu)型，而常規(guī)狀態(tài)下的結(jié)晶大部分為β ’構(gòu)型，并很快轉(zhuǎn)變?yōu)棣聵?gòu)型。 179 和脂質(zhì)化學(xué)性質(zhì)相關(guān)的脂質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)無疑是決定脂質(zhì)載藥量的決定性因素，它決定在脂質(zhì)晶體形成過程中，藥物是被排除在晶體之外還是被包封在晶體里。一般來講，藥物在熔融物中的溶解量要高一些，因?yàn)楫?dāng)熔融物溫度下降時(shí)溶解的藥物量會(huì)隨之減少，脂質(zhì)凝固后藥物的溶解度甚 至更低。另外，脂質(zhì)納米粒的體內(nèi)耐受性很好，適于裝載對(duì)肺巨噬細(xì)胞靶向的藥物。結(jié)果表明霧化前和霧化后納米粒的粒徑分布幾乎相同，僅有輕微的粒子聚集現(xiàn)象發(fā)生，這對(duì)肺部給藥沒有影響。電子顯微鏡表明 SLN 分散體在 32℃干燥后變成一層致密的膜，這和前面提到的球形結(jié)構(gòu)不同?？上♂屩苽涑筛鄤豁氈苽涑赡z劑。一般來講，脂質(zhì)含量的增加會(huì)導(dǎo)致粒徑的增大。 SLN 的粒徑很小， 178 具有一定的生物粘附性，比較容易粘附到皮膚上形成薄膜，它可以修復(fù)皮膚表面破損的脂質(zhì)層，并且具有一定的屏蔽作用。大鼠口服后，達(dá)峰時(shí)間 ()較 Sandoz公司的 SandimmunNeroalOR()顯著延長(zhǎng)，相對(duì)生物利用度為 80%[29]。許多實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，即使 SLN在一定程度聚合后，其生物利用度仍然很高。 2．口服給藥 SLN的口服劑型包括水性的分散體和含 SLN的傳統(tǒng)劑型形式，如片劑、丸劑或膠囊劑等。小鼠靜注后 ,靶向效率從大到小依次為：心、腦、全血、肝、脾、腎和肺。所以在制備注射給藥的 SLN 時(shí)必須嚴(yán)格控制粒徑及乳化劑和輔助乳化劑的比例，防止膠凝。最細(xì)毛細(xì)血管的管徑為 9 個(gè)微米，從 177 安全的角度考慮，粒徑必須全部在亞微米級(jí)范圍內(nèi)。此外， SLN 還可以局部給藥和肺部給藥 [27]。 SLN 的給藥途徑較靈活，包括胃腸道的和非胃腸道的。從而加速網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)（ RES）的識(shí)別，最終被巨噬細(xì)胞吞噬而從體循環(huán)中被清除掉。從 ESR 譜可以得知，擴(kuò)散系數(shù)的范圍大約在 或更高，這就意味著被包裹的分子最多幾秒鐘就能到達(dá)界面。載藥系統(tǒng)只有抑制藥物的再分配，才能對(duì)藥物起到保護(hù)作用 [25，26]。所以應(yīng)對(duì)不同膠態(tài)分配過程的動(dòng)力學(xué)進(jìn)行深入的研究。甘膽酸鹽和卵磷脂穩(wěn)定的體系以及其它相關(guān)的體系中也發(fā)現(xiàn)有混合膠束。 6． 幾種膠態(tài)共存 幾種膠態(tài)種類的出現(xiàn)是一個(gè)重要的、值得深思的現(xiàn)象，但是 這方面還沒有被引起足夠的重視。因此單獨(dú)使用磷脂作為穩(wěn)定劑并不能使該體系穩(wěn)定。 三脂肪酸甘油酯 SLN 粒徑減小時(shí) X 射線衍射曲線也發(fā)生改變，小角 X 衍射峰變寬，且向小角位移。這些吸收峰是不連續(xù)的。電鏡顯示，α 型同轉(zhuǎn)變后的β 型相比，粒子較小并且內(nèi)部結(jié)構(gòu)不均一，α 晶型粒子為球形，核不規(guī)則。因此，表面活性劑不但對(duì)納米粒的粒徑和穩(wěn)定性有影響，而且對(duì)粒子的內(nèi)部結(jié)構(gòu)也有重要影響。通過示差熱掃描，我們可以判斷脂質(zhì)晶格中不同孔隙的長(zhǎng)度。按以下的順序，熱力學(xué)穩(wěn)定性依次增加，脂質(zhì)的密度依次增加，藥物的包封率依次降低： 過冷熔融物→α晶型→β ’ 晶型→β晶型 因?yàn)榱Ｗ拥牧教貏e小，而且存在乳化劑，脂質(zhì)的結(jié)晶和晶型的轉(zhuǎn)變受到很大的阻礙。 就長(zhǎng)鏈脂肪酸甘油酯或混合脂肪酸酯來講， SLN 結(jié)晶后其變化過程持續(xù)幾天甚至幾周。β ’型脂肪酸酯轉(zhuǎn)變成β型通常需要數(shù)月乃至一年的時(shí)間。這些同樣能夠解釋三棕櫚酸甘油酯α 型小納米粒比大納米粒不穩(wěn)定的現(xiàn)象。例如，三棕櫚酸甘油酯納米粒首先形成α型結(jié)晶，隨后同塊體材料一樣轉(zhuǎn)變成穩(wěn)定的β 型。就微米體系而言，三脂肪酸甘油酯乳滴結(jié)晶的溫度比納米粒要高，其結(jié)晶溫度降低值與乳滴粒徑對(duì)數(shù)成線性關(guān)系，當(dāng)粒徑在 1μ m~10μ m 范圍內(nèi)時(shí)，結(jié)晶溫度降低值在 15℃ ~25℃之間。 人們對(duì)三脂肪酸甘油酯過冷現(xiàn)象的研究已有幾十年的歷史。 SLN 的 性質(zhì) 1． 過冷態(tài)及過冷分散體的形成 由一些短鏈的三脂肪酸甘油酯如三 肉豆蔻酸甘油酯（ Tm=56℃）和混合脂肪酸酯如 Witepsol H42 (Tm=41℃ )采用熱熔法所制得的納米粒，在室溫或在冰箱中儲(chǔ)存， DSC 和 X射線衍射并未檢測(cè)到特征峰。此外，對(duì)冷凍的 SLN 分散體進(jìn)行預(yù)處理（ 22℃處理 2h，接著降至 40℃處理 2h）可能會(huì) 提高凍干粉的質(zhì)量?？焖倮鋬鰰?huì)導(dǎo)致小型和異質(zhì)晶體出現(xiàn)，增加了非晶型的含量，降低冷凍效果。載藥納米粒 Zeta 電位降低，滲透壓和 pH 值改變進(jìn)而導(dǎo)致粒子的穩(wěn)定性下降。 冷凍防護(hù)劑加入的時(shí)間也會(huì)影響最后產(chǎn)品的性質(zhì)。冷凍防護(hù)劑可以占 據(jù)離散的脂質(zhì)納米粒之間的空間位置，從而阻止其相互接觸；還能和表面活性劑的活性位點(diǎn)發(fā)生作用，形成一層假性水化殼。 冷凍干燥法將降低表面活性劑的保護(hù)作用。由于 SLN的特殊性質(zhì)，常用的干 燥法有冷凍干燥和噴霧干燥。圍繞 SLN的化學(xué)穩(wěn)定性方面的研究至關(guān)重要，這對(duì)解決 SLN體系的滅菌問題提供幫助。分子高流動(dòng)性（半固體或液體）和氧也能促進(jìn)射線照射導(dǎo)致的降解反應(yīng)。用濕熱蒸汽滅菌，卵磷脂體系比 poloxamer體系穩(wěn)定，但是對(duì)于γ射線滅菌，兩者沒有顯著區(qū)別。發(fā)現(xiàn) Acidan N12 SLN的平均粒徑?jīng)]有改變，廿二碳烷酸 SLN的平均粒徑從 70nm增大到 135nm，硬脂酸 SLN的平均粒徑從 55nm增大到 110nm。 5%丁卡因 poloxamer 188/Compritol SLN經(jīng)濕熱蒸汽滅菌后，粒徑分布增大（多分散指數(shù) PI從 ），平均粒徑也增大（ 160nm增加到 260nm），而當(dāng)丁卡因的濃度升至 10%時(shí)粒子的粒徑甚至增大到 500nm以上。而 poloxamer 188的情況恰好相反，濕熱蒸汽滅菌后粒徑有顯著的增加。乳化劑的正確選擇對(duì)樣品在高溫下的穩(wěn)定性至關(guān)重要。滅菌過程不能改變樣品的物理穩(wěn)定性、化學(xué)穩(wěn)定性和藥物釋放動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。 （ 4）溫度的影響 如果高壓乳勻時(shí)操作溫度低于二棕櫚酰磷脂酰膽堿 (DPPC)和三月桂酸甘油酯的相轉(zhuǎn)變溫度，制備后容易出現(xiàn)相分離和較大的粒子。并且乳化劑再分配過程的時(shí)間是不等的。 高濃度的乳化劑在乳勻過程中可以降低表面張力和促進(jìn)粒子的分散。 （ 2）乳化劑和 輔助乳化劑的影響 通常情況下，粒徑隨乳化劑用量增加而降低。不過有一點(diǎn)值得注意，即所有的脂質(zhì)實(shí)際上都是幾種不同化合物的混合物，所以即使同一供應(yīng)商提供的不同批號(hào)的產(chǎn)品，其組成也不會(huì)完全相同。這可能是因?yàn)?SLN 中脂質(zhì)體的含量增加或磷脂分子在粒子的表面形成多層。一般來講，乳化蒸發(fā)法適用于制備粒徑小、分布范圍窄的 SLN；但是脂質(zhì)在有機(jī)溶劑中的溶解度較低（三棕櫚酸甘油酯w=%~%），限制了乳化蒸發(fā)法制備樣品的濃度，進(jìn)而影響該體系的載藥性質(zhì)。 （ 2）乳化蒸發(fā)和高壓乳勻法 用卵磷脂和甘膽酸鈉作為乳化劑和輔助乳化劑，采用乳化蒸發(fā)法制備的三棕櫚酸甘油酯納米粒，平均粒徑為 28nm，而采用高壓乳勻法制得的平均粒徑為 124nm[5]。當(dāng)超聲時(shí)間大于 15min 時(shí)可以得到粒徑在 30nm~180nm 之間的納米粒，但是長(zhǎng)時(shí)間的超聲可增加金屬探頭造成 的金屬污染。 在微乳中液滴已達(dá)到納米級(jí)，所以并不需要額外能量。 微乳的制備方法 是用低熔點(diǎn)的脂肪酸（如硬脂酸）、乳化劑、輔助乳化劑和水在 65℃ ~70℃攪拌制成的透明混合液。 （ 4）微 乳法 [6,7] 微乳是由油相、乳化劑和輔助乳化劑及水所組成的澄清或帶有微弱藍(lán)色乳光的熱力學(xué)穩(wěn)定的分散體系。但是該法所制得的 SLN 粒徑較大，且粒徑分布范圍較寬。再把已凝固的載有藥物的脂質(zhì)碾磨成微米級(jí)粒子。 通過熱乳勻最初得到的僅是一種乳液，脂質(zhì)還處于一種液體狀態(tài)，必須使其溫度降至室溫或熔點(diǎn)以下，才能形成 SLN。由于溫度升高降低了脂相的粘度，所以原則上講溫度越高得到的產(chǎn)品的粒徑就越小。所制得的納米粒粒徑小且分布范圍窄，高壓乳勻還便于進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)。缺點(diǎn)是體系中易出現(xiàn)微米級(jí)粒子，如果超聲時(shí)間過長(zhǎng)（≥ 15min），則可能導(dǎo)致金屬的污染。 SLN給藥途徑和方式較為廣泛，主要用于靜脈給藥，發(fā)揮靶向或控釋作用；也可口服給藥，以控制藥物在胃腸道內(nèi)的釋放，還可用于局部或眼部給藥。同時(shí)，固體脂質(zhì)又使它具有聚合物納米粒（ PNP）的優(yōu)點(diǎn)，如可以控制藥物的釋放、避免藥物的降解或泄漏以及良好的靶向性等?，F(xiàn)已有脂質(zhì)體、固體脂質(zhì)納米粒、膠束、藥質(zhì)體和脂肪乳等體系供臨床使用。 166 第 6 章 脂質(zhì)納米粒 脂質(zhì)納米粒是以生物相容的脂質(zhì)材料為載體，將藥物或其它的生物活性物質(zhì)溶解或包裹于脂質(zhì)核或者是吸附、附著于納米粒子表面的新型載藥系統(tǒng)。使用途徑很廣，既可口服、注射，還可以局部應(yīng)用。和乳劑、脂質(zhì)體相似， SLN 以毒性低、生物相容性好的脂質(zhì)材料作為載體。 固體脂質(zhì)納米粒的主要成分有三類：①脂質(zhì)，如脂肪酸甘油酯類（包括三硬脂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三萮酸甘油酯、 Witepsol W 3 Witepsol H 3 Witepsol H 4單硬脂酸甘油酯）及脂肪酸類（如硬脂酸、棕櫚酸）等；②乳化劑和助乳化劑，如磷脂（包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂及磷脂酰膽堿等）， Poloxamar, 聚山梨醇，膽酸鹽，四丁酚醛等；③藥物，親脂性藥物和親水性藥物均能制備成穩(wěn)定的 SLN 體系，并且載藥量和包封率都較高。它們的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn) 單，易于控制。此法的優(yōu)點(diǎn)是可避免使用對(duì)人體有害的附加劑和有機(jī)溶劑，尤其適用于對(duì)熱不穩(wěn)定的藥物。 ① 熱乳勻 熱乳勻是指在脂質(zhì)熔點(diǎn)以上的溫度進(jìn)行操作，將脂質(zhì)和磷脂等加熱至高于脂質(zhì)的熔點(diǎn) 10℃ ~15℃左右融化，加入藥物，熔融液分散于含有表面活性劑的水相中，初乳化后，通過 高壓乳勻機(jī)循環(huán)乳化即得。一般在 50MPa~150MPa 壓力下重復(fù) 3~5 次已足夠，如果循環(huán)次數(shù)增多和壓力增大反而會(huì)使 SLN 的粒徑增大，因?yàn)殡S著體系溫度的升高，粒子聚集傾向加大。冷卻速度越快，藥物在脂質(zhì)基質(zhì)中的分布越均勻。此法適用于對(duì)熱不穩(wěn)定的藥物和熔點(diǎn)低的脂質(zhì)，還可以避免熱乳勻過程中藥物向水相流失以及結(jié)晶過程中出現(xiàn)的晶型轉(zhuǎn)變和過冷態(tài)。采用該法所得到的 SLN 粒徑很小 [5]，甚至可達(dá)到 25nm。將微乳加入到水中會(huì)導(dǎo)致油相的沉降從而形成極細(xì)的顆粒。這樣 SLN 顆粒的大小主要受微乳小粒子 沉淀影響，而與攪拌速度關(guān)系不大。 2． 不同制備工藝的比較 （ 1）超聲分散和高壓乳勻法 Siekmann 等 [8]研究了不同制備工藝對(duì)四丁酚醛（ w=%）和大豆卵磷脂（ w=1%）穩(wěn)定的三棕櫚酸甘油酯（ w=3%）納米粒的影響。高壓乳勻法被證明是行之有效的分散技術(shù)，僅一次循環(huán)（ 80MPa）就可以使平均粒徑從 474nm 減小到 155nm，循環(huán) 5 次所得到的納米粒粒徑最小。這些結(jié)果表明乳化劑的組成對(duì)粒徑大小有決定性作用。平均粒徑隨著乳化劑的濃度增大而減小，到最適宜濃度（ w=2%~3%）時(shí)最小，以后隨著乳化劑的濃度增大粒徑反而增大。 3． 影響 SLN 粒徑的因素 （ 1）脂質(zhì)的影響 [9] 脂質(zhì)對(duì) SLN 的影響極其復(fù)雜，如脂質(zhì)的結(jié)晶速度，脂質(zhì)的親 水性可影響脂質(zhì)的自我乳化的性質(zhì)；脂質(zhì)晶體的形狀可改變其表面積，這點(diǎn)后面還將作進(jìn)一步討論。另外， 脂質(zhì)含量超過了 5%10%，則會(huì)導(dǎo)致乳勻效率的降低，粒子聚集增加，所制備產(chǎn)品的粒徑較大，其中還含有相當(dāng)數(shù)量的微米級(jí)粒子，同時(shí)粒徑的分布更廣。在較高溫度下，以磷脂 四丁 酚醛混合物為乳化劑制備的 SLN 的粒徑要小于以磷脂 膽酸鹽為乳化劑者。但是如果乳化劑過多，則可能出現(xiàn)其他形式的體系，如增溶分子（乳化劑單體）、膠束（ SDS）或脂質(zhì)體（卵磷脂）等。溶解于水的 Poloxamer 分子遷移速度較快，能夠迅速覆蓋在乳勻過程中新生成的油水界面上，而磷脂分子溶解或以膠團(tuán)形式分散在高粘度的脂質(zhì)中，需經(jīng)高壓解聚才能充分發(fā)揮表 面活性劑的作用。常用滅菌的方法有濕熱蒸汽滅菌法，濾過滅菌法和射線滅菌法等。滅菌的溫度越高，粒子的團(tuán)聚越明顯。研究發(fā)現(xiàn)，卵磷脂是最合適的表面活性劑，滅菌后粒徑僅有微小的增大，檢測(cè)到的微米級(jí)的粒子也很少。 滅菌能使包封藥物的 SLN的穩(wěn)定性降低。 SLN脂質(zhì)（ w=%）由硬脂酸、廿二碳烷酸或 Acidan N12（單硬脂酸單檸檬酸甘油二酯）組成，乳化劑由Epikuron 200（ 95%大豆卵磷脂）和牛去氧膽酸鹽組成，將 SLN分散在 2%海藻糖溶液或 2% poloxamer 188溶液中，在 121℃下濕熱蒸汽滅菌 15min。 γ射線照射適用于對(duì)溫度敏感的樣品。藥物降解的程度和化學(xué)反應(yīng)有關(guān)。有的配方如某些磷脂或自由脂肪酸對(duì)粒子有保護(hù)作用，但是會(huì)引起毒性。另外 SLN分散液干燥后，可將藥物制成固體制劑如片劑、膠囊等，可以增加藥物的給藥方式和給藥途徑。第一，在冷凍干燥過程 中從水性分散體變成粉末時(shí)，由于樣品的滲透壓和 pH值的改變，可能會(huì)引起不穩(wěn)定問題；第二，再增溶作用，粒子由于處在一個(gè)低含水量、高粒子濃度、高滲透壓的環(huán)境中，易發(fā)生聚合。常用的冷凍防護(hù)劑有山梨醇、甘露糖、海藻糖、葡萄糖和聚乙烯吡咯烷酮等。以海藻糖的效果最好，它可以充分阻止粒 172 子的聚合和藥物的滲漏。 載藥的 SLN 通過冷凍干燥有可能使其穩(wěn)定性大大降低，這可能與游離的藥物分子有關(guān)。冷凍的的速度取決于特定的樣品和條件。緩慢冷卻可以形成大晶體和自由的升華物，但是常常會(huì)增強(qiáng)冷凍所導(dǎo)致的不穩(wěn)定現(xiàn)象。只有當(dāng)脂質(zhì)