【正文】 結(jié)構(gòu)發(fā)生化學(xué)改變。用濕熱蒸汽滅菌，卵磷脂體系比 poloxamer體系穩(wěn)定，但是對(duì)于γ射線滅菌，兩者沒(méi)有顯著區(qū)別。濕熱蒸汽滅菌對(duì)粒子的 zeta電位 影響不大。發(fā)現(xiàn) Acidan N12 SLN的平均粒徑?jīng)]有改變，廿二碳烷酸 SLN的平均粒徑從 70nm增大到 135nm，硬脂酸 SLN的平均粒徑從 55nm增大到 110nm。 Cavalli 等 [13]研究了濕熱蒸汽滅菌對(duì) 微乳法制備的 SLN的粒徑和 Zeta電位的影響。 5%丁卡因 poloxamer 188/Compritol SLN經(jīng)濕熱蒸汽滅菌后，粒徑分布增大（多分散指數(shù) PI從 ），平均粒徑也增大（ 160nm增加到 260nm），而當(dāng)丁卡因的濃度升至 10%時(shí)粒子的粒徑甚至增大到 500nm以上。眾所周知，這種類型的乳化劑，溫度升高使乙二醇鏈脫水，導(dǎo)致了粒子保護(hù)層的厚度減小，粒子容易聚結(jié) [12]。而 poloxamer 188的情況恰好相反，濕熱蒸汽滅菌后粒徑有顯著的增加。濕熱蒸汽滅菌可以導(dǎo)致 o/w乳劑的組成發(fā)生改變。乳化劑的正確選擇對(duì)樣品在高溫下的穩(wěn)定性至關(guān)重要。濕熱滅菌法是一種常 用且可靠的滅菌方法，它曾經(jīng)用于脂質(zhì)體的滅菌，發(fā)現(xiàn)加溫導(dǎo)致樣品物理穩(wěn)定性的下降，經(jīng)滅菌后都出現(xiàn)了不同程度的團(tuán)聚。滅菌過(guò)程不能改變樣品的物理穩(wěn)定性、化學(xué)穩(wěn)定性和藥物釋放動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。 4．滅菌 注射給藥需要滅菌。 （ 4）溫度的影響 如果高壓乳勻時(shí)操作溫度低于二棕櫚酰磷脂酰膽堿 (DPPC)和三月桂酸甘油酯的相轉(zhuǎn)變溫度，制備后容易出現(xiàn)相分離和較大的粒子。 170 （ 3）乳勻壓力與循環(huán)次數(shù)的影響 如果以 Poloxamer188 為穩(wěn)定劑制備三月桂酸甘油酯 SLN, 最佳條件為 50MPa 3 次 ,以后粒徑隨乳勻壓力和循環(huán)次數(shù)的增加反而明顯變大；使用 Lipoid S75 為乳化劑，操作壓力應(yīng)提高，最佳條件為150MPa 3。并且乳化劑再分配過(guò)程的時(shí)間是不等的。在初步乳勻過(guò)程中要有足夠的乳化劑分子，以確保它能迅速包裹在新形成的粒子表面。 高濃度的乳化劑在乳勻過(guò)程中可以降低表面張力和促進(jìn)粒子的分散。當(dāng)使用磷脂 甘膽酸鈉為乳化劑時(shí)，微乳法得到的三棕櫚酸甘油酯 SLN 的粒徑遠(yuǎn)小于熔融 乳勻工藝，但以磷脂 四丁酚醛為乳化劑所制得的 SLN 粒徑遠(yuǎn)大于高壓乳勻法所制得的 SLN 的粒徑，這可能與四丁酚醛在較高溫度下乳化能力較強(qiáng)有關(guān) [10]。 （ 2）乳化劑和 輔助乳化劑的影響 通常情況下，粒徑隨乳化劑用量增加而降低。脂質(zhì)分子鏈越長(zhǎng)，油相的 粘度越高，得到的 SLN 粒徑相應(yīng)越大。不過(guò)有一點(diǎn)值得注意，即所有的脂質(zhì)實(shí)際上都是幾種不同化合物的混合物，所以即使同一供應(yīng)商提供的不同批號(hào)的產(chǎn)品，其組成也不會(huì)完全相同。一般來(lái)說(shuō)，用高壓乳勻制備的 SLN 粒徑大小是 50nm，而用高剪切乳化制備的 SLN 則在 200nm 左右。這可能是因?yàn)?SLN 中脂質(zhì)體的含量增加或磷脂分子在粒子的表面形成多層。 （ 3）高剪切乳化和高壓乳勻 采用高剪切乳化時(shí)，乳化劑的濃度對(duì) SLN 粒子大小的影響較大。一般來(lái)講，乳化蒸發(fā)法適用于制備粒徑小、分布范圍窄的 SLN；但是脂質(zhì)在有機(jī)溶劑中的溶解度較低（三棕櫚酸甘油酯w=%~%），限制了乳化蒸發(fā)法制備樣品的濃度，進(jìn)而影響該體系的載藥性質(zhì)。但如果用磷脂和非離子型表面活性劑作為乳化劑，則高壓乳勻法要優(yōu)于乳化蒸發(fā)法。 （ 2）乳化蒸發(fā)和高壓乳勻法 用卵磷脂和甘膽酸鈉作為乳化劑和輔助乳化劑，采用乳化蒸發(fā)法制備的三棕櫚酸甘油酯納米粒，平均粒徑為 28nm，而采用高壓乳勻法制得的平均粒徑為 124nm[5]。因此，超聲不適用于脂質(zhì)濃度高的配方。當(dāng)超聲時(shí)間大于 15min 時(shí)可以得到粒徑在 30nm~180nm 之間的納米粒，但是長(zhǎng)時(shí)間的超聲可增加金屬探頭造成 的金屬污染。降溫速度快可以促使脂質(zhì)快速結(jié)晶并避免納米粒聚集。 在微乳中液滴已達(dá)到納米級(jí)，所以并不需要額外能量。 為了使微乳中的油相在室溫下是固體，需要在制備時(shí)使體系的溫度高于脂質(zhì)的熔點(diǎn)。 微乳的制備方法 是用低熔點(diǎn)的脂肪酸（如硬脂酸）、乳化劑、輔助乳化劑和水在 65℃ ~70℃攪拌制成的透明混合液。微乳一方面具有乳液的一些性質(zhì)（如可以用激光光散 射法測(cè)量它的粒徑），另一方面它又具有真溶液的一些性質(zhì)（如藥物在微乳中有一定的飽和濃度，而不是像乳劑那樣具有一定的油 /水分配比例）。 （ 4）微 乳法 [6,7] 微乳是由油相、乳化劑和輔助乳化劑及水所組成的澄清或帶有微弱藍(lán)色乳光的熱力學(xué)穩(wěn)定的分散體系。將脂質(zhì)和藥 168 物首先溶解于有機(jī)溶劑中，然后對(duì)有機(jī)相和含有表面活性劑的水相進(jìn)行乳化，將有機(jī)溶劑蒸發(fā)后，即形成 SLN。但是該法所制得的 SLN 粒徑較大，且粒徑分布范圍較寬。然后將它們和含表面活性劑的冷凍溶液在低于脂質(zhì)熔點(diǎn) 5℃ ~10℃以下高壓勻質(zhì)。再把已凝固的載有藥物的脂質(zhì)碾磨成微米級(jí)粒子。 ② 冷乳勻 冷乳勻法的制備過(guò)程同熱乳勻法一樣，也需使藥物溶解或 分散在熔融的脂質(zhì)中，熔化的樣品立即在干冰或液氮中冷卻。 通過(guò)熱乳勻最初得到的僅是一種乳液，脂質(zhì)還處于一種液體狀態(tài)，必須使其溫度降至室溫或熔點(diǎn)以下，才能形成 SLN。并且雖然乳勻的步驟可以重復(fù)幾次，但每次乳勻都會(huì)導(dǎo)致體系溫度的升高，平均壓力每升高 50MPa，可使體系的溫度增加 10℃。由于溫度升高降低了脂相的粘度，所以原則上講溫度越高得到的產(chǎn)品的粒徑就越小。一般初步乳化如能得到微米級(jí)粒子則更有利于乳勻。所制得的納米粒粒徑小且分布范圍窄，高壓乳勻還便于進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)。其工作原理是利用高壓（ 10 MPa~200MPa）推動(dòng)液體通過(guò)一個(gè)狹窄的管道（幾個(gè)微米），液體通過(guò)很短的距離而獲得了很大的速度（超過(guò) 1000km/h），產(chǎn)生的高剪切力和空穴作用力使粒子分裂成納米級(jí)的小粒子。缺點(diǎn)是體系中易出現(xiàn)微米級(jí)粒子，如果超聲時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（≥ 15min），則可能導(dǎo)致金屬的污染。 固體脂質(zhì)納米粒的制備 1． 制備方法 （ 1）高剪切乳勻和超聲分散 167 高剪切乳勻和超聲分散是藥劑學(xué)中廣為應(yīng)用的一種分散技術(shù)，可用來(lái)制備乳劑、脂質(zhì)體等，也可以用于固體脂質(zhì)納米粒分散體系的制備。 SLN給藥途徑和方式較為廣泛，主要用于靜脈給藥，發(fā)揮靶向或控釋作用；也可口服給藥，以控制藥物在胃腸道內(nèi)的釋放，還可用于局部或眼部給藥。還可采用高壓乳勻法進(jìn)行規(guī)模化生產(chǎn)。同時(shí)，固體脂質(zhì)又使它具有聚合物納米粒（ PNP）的優(yōu)點(diǎn)，如可以控制藥物的釋放、避免藥物的降解或泄漏以及良好的靶向性等。 固體脂質(zhì)納米粒 概述 固體脂質(zhì)納米粒（ solid lipid nanoparticles， SLN）是近十幾年正在發(fā)展的 — 種新型的脂質(zhì)載藥系統(tǒng) [1]，它以天然的或人工合成的的高熔點(diǎn)固體脂質(zhì)（如飽和脂肪酸甘油酯、硬脂酸、混合脂質(zhì)）為載體，將藥物吸附或包裹于脂質(zhì)核中制成的納米給藥體系。現(xiàn)已有脂質(zhì)體、固體脂質(zhì)納米粒、膠束、藥質(zhì)體和脂肪乳等體系供臨床使用?，F(xiàn)已廣泛應(yīng)用于基因藥物、抗腫瘤藥、蛋白質(zhì)和多肽等藥物的載體系統(tǒng)。 166 第 6 章 脂質(zhì)納米粒 脂質(zhì)納米粒是以生物相容的脂質(zhì)材料為載體，將藥物或其它的生物活性物質(zhì)溶解或包裹于脂質(zhì)核或者是吸附、附著于納米粒子表面的新型載藥系統(tǒng)。脂質(zhì)納米粒能夠改善藥物吸收、改變藥物體內(nèi)過(guò)程、具有緩釋、控釋、提高藥物穩(wěn)定性、增強(qiáng)療效降低毒副作用等方面的優(yōu)越性，同時(shí)在生物體內(nèi)及貯存過(guò)程中較穩(wěn)定。使用途徑很廣，既可口服、注射，還可以局部應(yīng)用。本章主要對(duì)固體脂質(zhì)納米粒、脂質(zhì) 體和藥質(zhì)體等進(jìn)行介紹。和乳劑、脂質(zhì)體相似， SLN 以毒性低、生物相容性好的脂質(zhì)材料作為載體。 SLN 的水分散系統(tǒng)可以進(jìn)行高壓滅菌或γ輻射滅菌，具有長(zhǎng)期的物理化學(xué)穩(wěn)定性，也可通過(guò)冷凍干燥或噴霧干燥制成固體粉末。 固體脂質(zhì)納米粒的主要成分有三類：①脂質(zhì)，如脂肪酸甘油酯類（包括三硬脂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三萮酸甘油酯、 Witepsol W 3 Witepsol H 3 Witepsol H 4單硬脂酸甘油酯）及脂肪酸類（如硬脂酸、棕櫚酸）等；②乳化劑和助乳化劑，如磷脂（包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂及磷脂酰膽堿等）， Poloxamar, 聚山梨醇，膽酸鹽，四丁酚醛等；③藥物，親脂性藥物和親水性藥物均能制備成穩(wěn)定的 SLN 體系，并且載藥量和包封率都較高。是一種很有發(fā)展前景的新型載藥系統(tǒng)。它們的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn) 單，易于控制。 （ 2）高壓乳 勻 [2] 高壓乳勻是目前制備 SLN 的經(jīng)典方法。此法的優(yōu)點(diǎn)是可避免使用對(duì)人體有害的附加劑和有機(jī)溶劑，尤其適用于對(duì)熱不穩(wěn)定的藥物。 乳勻有兩種基本的方法：熱乳勻和冷乳勻 [3,4]，這兩種方法都可以制備 SLN，但乳勻之前都需將藥物溶解或分散在熔化的脂質(zhì)中，即初步乳化。 ① 熱乳勻 熱乳勻是指在脂質(zhì)熔點(diǎn)以上的溫度進(jìn)行操作，將脂質(zhì)和磷脂等加熱至高于脂質(zhì)的熔點(diǎn) 10℃ ~15℃左右融化，加入藥物，熔融液分散于含有表面活性劑的水相中，初乳化后，通過(guò) 高壓乳勻機(jī)循環(huán)乳化即得。但是并不是溫度越高就越好，因?yàn)樵诟邷叵滤幬锖洼d體的降解速度也會(huì) 加快。一般在 50MPa~150MPa 壓力下重復(fù) 3~5 次已足夠，如果循環(huán)次數(shù)增多和壓力增大反而會(huì)使 SLN 的粒徑增大，因?yàn)殡S著體系溫度的升高，粒子聚集傾向加大。由于粒徑小和乳化劑的存在，它會(huì)在一定的時(shí)間內(nèi)保持一種過(guò)冷熔化狀態(tài)。冷卻速度越快，藥物在脂質(zhì)基質(zhì)中的分布越均勻。由于低溫凝固，脂質(zhì)脆性增加，更易被粉碎，通過(guò)球磨或碾缽得到的粒子粒徑一般在 50μ m~100μ m。此法適用于對(duì)熱不穩(wěn)定的藥物和熔點(diǎn)低的脂質(zhì)，還可以避免熱乳勻過(guò)程中藥物向水相流失以及結(jié)晶過(guò)程中出現(xiàn)的晶型轉(zhuǎn)變和過(guò)冷態(tài)。 （ 3）乳化蒸發(fā)法 SLN 的制備 也可以采用 PNP 的制備方法，但它的一個(gè)明顯不足是使用了有機(jī)溶劑。采用該法所得到的 SLN 粒徑很小 [5]，甚至可達(dá)到 25nm。現(xiàn)在人們認(rèn)為微乳并不是一種由微小液滴形成的真正的乳液，而是一種臨界溶液（ critical solution）。將微乳加入到水中會(huì)導(dǎo)致油相的沉降從而形成極細(xì)的顆粒。再在攪拌下向熱微乳中加入冷水（ 2℃ ~3℃），一般微乳和水的比率為 1:25 到 1:50，其稀釋程度取決于微乳的組成。這樣 SLN 顆粒的大小主要受微乳小粒子 沉淀影響，而與攪拌速度關(guān)系不大。 對(duì)于微乳來(lái)說(shuō)，不但配方組成，而且溫度下降速度與 pH 值都能影響制劑的質(zhì)量。 2． 不同制備工藝的比較 （ 1）超聲分散和高壓乳勻法 Siekmann 等 [8]研究了不同制備工藝對(duì)四丁酚醛（ w=%）和大豆卵磷脂（ w=1%）穩(wěn)定的三棕櫚酸甘油酯（ w=3%）納米粒的影響。如果脂質(zhì)的含量很高時(shí)，甚至無(wú)法用超聲法來(lái)乳勻。高壓乳勻法被證明是行之有效的分散技術(shù)，僅一次循環(huán)（ 80MPa）就可以使平均粒徑從 474nm 減小到 155nm，循環(huán) 5 次所得到的納米粒粒徑最小。這是因?yàn)榱字肿釉谌刍|(zhì)中的流動(dòng)性小于在溶劑中的流動(dòng)性，并且脂質(zhì)和乳化劑的混合液的粘度大于溶 劑，所以乳勻需要更多的能量，導(dǎo)致 SLN 的粒徑增大。這些結(jié)果表明乳化劑的組成對(duì)粒徑大小有決定性作用。此外，和高壓乳 169 勻法相比，乳化蒸發(fā)法在制備過(guò)程中不能避免高溫加熱和使用有機(jī)溶劑，而有機(jī)溶劑的殘留會(huì)導(dǎo)致毒理學(xué)的問(wèn)題。平均粒徑隨著乳化劑的濃度增大而減小，到最適宜濃度（ w=2%~3%）時(shí)最小，以后隨著乳化劑的濃度增大粒徑反而增大。而用高壓乳勻制備的 SLN 結(jié)果卻相反：增加磷脂的濃度，粒徑持續(xù)下降。 3． 影響 SLN 粒徑的因素 （ 1）脂質(zhì)的影響 [9] 脂質(zhì)對(duì) SLN 的影響極其復(fù)雜，如脂質(zhì)的結(jié)晶速度，脂質(zhì)的親 水性可影響脂質(zhì)的自我乳化的性質(zhì)；脂質(zhì)晶體的形狀可改變其表面積，這點(diǎn)后面還將作進(jìn)一步討論。這有可能影響 SLN 的 zeta 電位，延緩結(jié)晶過(guò)程等，從而影響 SLN 的分散性能。另外， 脂質(zhì)含量超過(guò)了 5%10%，則會(huì)導(dǎo)致乳勻效率的降低，粒子聚集增加，所制備產(chǎn)品的粒徑較大，其中還含有相當(dāng)數(shù)量的微米級(jí)粒子，同時(shí)粒徑的分布更廣。以三棕櫚酸甘油酯、磷脂和甘膽酸鈉為輔料經(jīng)高壓乳勻法制備的 SLN 的平均粒徑為 205nm；如果以 Pluronic F68 代替磷脂， SLN 的平均粒徑為 ；用甘膽酸鈉代替磷脂，則粒徑為 。在較高溫度下，以磷脂 四丁 酚醛混合物為乳化劑制備的 SLN 的粒徑要小于以磷脂 膽酸鹽為乳化劑者。粒子體積的減小會(huì)導(dǎo)致表面積的急劇增大，特別是在高壓乳勻中，表面積增大更為迅速，因此必須考慮動(dòng)力學(xué)方面的問(wèn)題。但是如果乳化劑過(guò)多，則可能出現(xiàn)其他形式的體系，如增溶分子（乳化劑單體）、膠束（ SDS）或脂質(zhì)體（卵磷脂）等。一般來(lái)說(shuō)， SDS 和一些能形成膠束的低分子量的表面活性劑能 很快達(dá)到平衡，而高分子量的表面活性劑（如 poloxamer）和卵磷脂則需要很長(zhǎng)時(shí)間才達(dá)到平衡。溶解于水的 Poloxamer 分子遷移速度較快，能夠迅速覆蓋在乳勻過(guò)程中新生成的油水界面上，而磷脂分子溶解或以膠團(tuán)形式分散在高粘度的脂質(zhì)中，需經(jīng)高壓解聚才能充分發(fā)揮表 面活性劑的作用。而在高于相變溫度時(shí)制得的 SLN 更穩(wěn)定，因?yàn)榇藭r(shí)磷脂的脂肪酸鏈能自由伸展，更充分地發(fā)揮作用 [11]。常用滅菌的方法有濕熱蒸汽滅菌法，濾過(guò)滅菌法和射線滅菌法等。濾過(guò)滅菌要求加壓操作并且樣品的直徑不能大于 m，這對(duì) SLN 來(lái)講是比較困難的。滅菌的溫度越高，粒子的團(tuán)聚越明顯。升高溫度使所有乳化劑的流動(dòng)性和水溶性都發(fā)生了改變。研究發(fā)現(xiàn)，卵磷脂是最合適的表面活性劑，滅菌后粒徑僅有微小的增大，檢測(cè)到的微米級(jí)的粒子也很