蛋白質分離純化及鑒定(存儲版)
【正文】 烷 a. 分離蛋白質 b. 脫鹽 c. 蛋白質分子量的測定 應 用 聚丙烯酰胺凝膠電泳 1． 原理 聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺 (簡稱Acr)和交聯(lián)劑 N,N甲叉雙丙烯酰胺 (簡稱 Bis)在加速劑 N， N， N?， N?四甲基乙二胺 (簡稱TEMED)和催化劑過硫酸銨 (簡稱 AP)或核黃素(VB2)的作用下聚合交聯(lián)成三維網狀結構的凝膠 ， 以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳 (簡稱 PAGE)。 a. 將層析柱垂直固定，加入適量溶劑排走空氣。 b. 堿洗： 用 M NaOH 溶液浸泡半個小時，然后用蒸餾水洗至中性。 a. 如圖裝好層析裝置，打開下端出口，使溶液流出至剛好達到凝膠膠面 b. 沿柱壁緩慢加入 2ml樣品，打開下端出口，使樣品溶液流出至剛好達到凝膠膠面，再取少量起始緩沖液洗滌柱壁。 2) 分離膠是由 AP催化聚合而成的小孔膠，凝膠緩沖液為 pH TrisHC1。 染色與脫色 電泳結束后，取下凝膠模，卸下膠框，用凝膠鏟小心撬開短玻璃板， 從凝膠板上切下一角作為加樣標記 ，在兩側溴酚藍染料區(qū)帶中心，加入染色液染色 12 h，再用脫色液脫色，直至蛋白質區(qū)帶清晰，即可計算相對遷移率 結果處理 各蛋白質樣品區(qū)帶中心與加樣端的距
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