蛋白質(zhì)分離純化及鑒定(存儲(chǔ)版)
【正文】 烷 a. 分離蛋白質(zhì) b. 脫鹽 c. 蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定 應(yīng) 用 聚丙烯酰胺凝膠電泳 1． 原理 聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺 (簡(jiǎn)稱Acr)和交聯(lián)劑 N,N甲叉雙丙烯酰胺 (簡(jiǎn)稱 Bis)在加速劑 N， N， N?， N?四甲基乙二胺 (簡(jiǎn)稱TEMED)和催化劑過硫酸銨 (簡(jiǎn)稱 AP)或核黃素(VB2)的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠 ， 以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳 (簡(jiǎn)稱 PAGE)。 a. 將層析柱垂直固定，加入適量溶劑排走空氣。 b. 堿洗： 用 M NaOH 溶液浸泡半個(gè)小時(shí)，然后用蒸餾水洗至中性。 a. 如圖裝好層析裝置，打開下端出口，使溶液流出至剛好達(dá)到凝膠膠面 b. 沿柱壁緩慢加入 2ml樣品，打開下端出口，使樣品溶液流出至剛好達(dá)到凝膠膠面，再取少量起始緩沖液洗滌柱壁。 2) 分離膠是由 AP催化聚合而成的小孔膠，凝膠緩沖液為 pH TrisHC1。 染色與脫色 電泳結(jié)束后，取下凝膠模，卸下膠框，用凝膠鏟小心撬開短玻璃板， 從凝膠板上切下一角作為加樣標(biāo)記 ，在兩側(cè)溴酚藍(lán)染料區(qū)帶中心，加入染色液染色 12 h，再用脫色液脫色，直至蛋白質(zhì)區(qū)帶清晰，即可計(jì)算相對(duì)遷移率 結(jié)果處理 各蛋白質(zhì)樣品區(qū)帶中心與加樣端的距
醫(yī)療健康相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1