蛋白質(zhì)分離純化及鑒定(文件)
【正文】 聚丙烯酰胺凝膠優(yōu)點 1) 化學(xué)性能穩(wěn)定，對 pH和溫度變化不敏感； 2) 重復(fù)性好； 3) 靈敏度高，可達 106 g； 4) 分辨率高。 a. 如圖裝好層析裝置，打開下端出口，使溶液流出至剛好達到凝膠膠面 b. 沿柱壁緩慢加入 2ml樣品，打開下端出口，使樣品溶液流出至剛好達到凝膠膠面，再取少量起始緩沖液洗滌柱壁。 b. 將平衡好的凝膠攪勻，連續(xù)傾入柱中，待其自然沉降至1/4~1/3高時打開下端出口，讓溶劑慢慢流出，繼續(xù)侵入凝膠至沉降到所需高度。 b. 堿洗： 用 M NaOH 溶液浸泡半個小時，然后用蒸餾水洗至中性。 凝膠層析的原理 Kd=(VeVo)/Vi 優(yōu)點 a. 條件溫和 b. 操作簡便 c. 損失少回收率高 d. 層析柱可反復(fù)使用 2. 凝膠及凝膠柱的選擇 根據(jù)不同分子量選擇不同凝膠 a. Sephadex: 交聯(lián)葡聚糖 G10， 15， 25， 50，75， 100， 150， 200；得水值 X 10 b. Sepharose：瓊脂糖凝膠 BioGel A c. BioGel P：聚丙烯酰胺凝膠分子篩 d. Sephacryl：用 N， N亞甲雙丙烯酰胺交聯(lián)的葡聚糖凝膠 凝膠柱的選擇 3. 凝膠的前處理
醫(yī)療健康相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1