蛋白質(zhì)分離純化及鑒定(參考版)
2025-05-17 06:26本頁面
【正文】 染色與脫色 電泳結(jié)束后，取下凝膠模，卸下膠框，用凝膠鏟小心撬開短玻璃板， 從凝膠板上切下一角作為加樣標(biāo)記 ，在兩側(cè)溴酚藍(lán)染料區(qū)帶中心，加入染色液染色 12 h，再用脫色液脫色，直至蛋白質(zhì)區(qū)帶清晰，即可計算相對遷移率 結(jié)果處理 各蛋白質(zhì)樣品區(qū)帶中心與加樣端的距離 (cm)，按下式計算相對遷移率 mR: 蛋白質(zhì)樣品距加樣端遷移距離 (cm) 溴酚藍(lán)區(qū)帶中心距加樣端距離 (cm) 相對遷移率 mR= 。 加樣 用微量進(jìn)樣器取 1015 ?l上述混合液，通過電極緩沖液，小心地將樣品加到凝膠凹形樣品槽底部。 2種孔徑的凝膠、 2種緩沖體系、 3種 pH值使不連續(xù)體系形成了凝膠孔徑、 pH值、緩沖液離子成分的不連續(xù)性，這是樣品濃縮的主要因素。 2) 分離膠是由 AP催化聚合而成的小孔膠，凝膠緩沖液為 pH TrisHC1。 2) 聚丙烯酰胺凝膠電泳分為連續(xù)系統(tǒng)兩大類 。 聚丙烯酰胺凝膠優(yōu)點(diǎn) 1) 化學(xué)性能穩(wěn)定，對 pH和溫度變化不敏感； 2) 重復(fù)性好； 3) 靈敏度高，可達(dá) 106 g； 4) 分辨率高。 d. 用自動部分收集器自動或手動收集，合并同一高峰各管。
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