蛋白質(zhì)分離純化及鑒定(留存版)
【正文】 ，傾去上層懸浮物及蒸餾水。 聚丙烯酰胺凝膠優(yōu)點(diǎn) 1) 化學(xué)性能穩(wěn)定，對(duì) pH和溫度變化不敏感； 2) 重復(fù)性好； 3) 靈敏度高，可達(dá) 106 g； 4) 分辨率高。 2種孔徑的凝膠、 2種緩沖體系、 3種 pH值使不連續(xù)體系形成了凝膠孔徑、 pH值、緩沖液離子成分的不連續(xù)性，這是樣品濃縮的主要因素。 d. 平衡： 用起始緩沖液浸泡凝膠，直至凝膠液pH與起始緩沖液相同。 c. 打開起始緩沖液閥門，連續(xù)洗脫。 電泳 將電泳儀的正極與下槽連接，負(fù)極與上槽連接，打開電泳儀開關(guān)，開始時(shí)電流為 10 mA，待樣品進(jìn)入分離膠后，將電流調(diào)至 2030 mA，當(dāng)溴酚藍(lán)染料距硅膠框 1 cm時(shí)，停止電泳，關(guān)閉電源。裝柱時(shí)要注意操作壓。 c. 用 35倍柱床體積的起始緩沖液走柱，使交換劑充分平衡，柱床穩(wěn)定。 染色與脫色 電泳結(jié)束后，取下凝膠模，卸下膠框，用凝膠鏟小心撬開短玻璃板， 從凝膠板上切下一角作為加樣標(biāo)記 ，在兩側(cè)溴酚藍(lán)染料區(qū)帶中心，加入染色液染色 12 h，再用脫色液脫色，直至蛋白質(zhì)區(qū)帶清晰，即可計(jì)算相對(duì)遷移率 結(jié)果處理 各蛋白質(zhì)樣品區(qū)帶中心與加樣端的距離 (cm)，按下式計(jì)算相對(duì)遷移率 mR: 蛋白質(zhì)樣品距加樣端遷移距離 (cm)
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