【正文】 （四）核磁共振譜 （ 1HNMR） 提供信息： 化學位移（ δ ）、積分面積、裂 分情況（重峰數(shù)及偶合常數(shù) J）。 取代基位移： 改變某個 13C核的周圍環(huán)境，如引入某個取代基，則該 13C的信號可能發(fā)生特定的位移。 藻類、水生類植物中未發(fā)現(xiàn)生物堿。 （二）莨菪烷類生物堿 此 類生物堿多 來源于鳥氨酸 ，由莨菪烷環(huán)系的 C3醇羥基與有機酸縮合成酯。如罌粟中具解痙作用的罌粟堿，烏頭中的強心成分去甲烏藥堿，厚樸中的厚樸堿等。吲哚類生物堿主要由色氨酸衍生而成，根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點，主要分為四類。 生物堿多具苦味 ,少數(shù)呈辛辣味或其他味道 ,如甜菜堿具有甜味 。 通常左旋體的生理活性比右旋體強。 秋水仙堿 （ 1）具有酚羥基或羧基的生物堿： 具有酸、堿兩性，故即可溶于酸水，又可溶于堿水。生物堿在酸水中成 鹽溶解，調(diào)堿性后又游離 不同的酸的鹽 通常生物堿的無極酸鹽水溶性大于有機酸鹽；無機酸鹽中含氧酸鹽的 水溶性大于鹵代酸鹽；小分子有機酸鹽大于大 分子有機酸鹽 練習題 最佳選擇題 水溶性最強的生物堿是 [答疑編號 5630020207] 【正確答案】 A 四、堿性 生物堿分子中氮原子上的孤電子對，能給出電子或接受質(zhì)子而使生物堿顯堿性。 堿性隨雜化程度的升高而增強，即 sp3＞ sp2＞ sp。 麻黃堿（ ） 去甲麻黃堿（ ） 苯異丙胺（ ） 特例： 季銨型小檗堿是由醇胺型異構(gòu)而來，季銨型穩(wěn)定，故呈強堿性；蛇根堿分子中氮原子的 α 、 β 位有雙鍵，氮原子的未共用電子對與雙鍵的 π 電子可發(fā)生轉(zhuǎn)位，形成季銨型共軛酸，因而堿性強。如胡椒堿、秋水仙堿或咖啡堿等。 一般來說，空間效應(yīng)與誘導(dǎo)效應(yīng)共存，空間效應(yīng)居主導(dǎo)地位；共軛效應(yīng)與誘導(dǎo)效應(yīng)共存，共軛效應(yīng)居主導(dǎo)地位。（具體方法：利用酸提堿沉得方法使生物堿游離，萃取使其與雜質(zhì)分離） ① 用于檢查生物堿的有無。 可升華的生物堿如咖啡堿可用升華法提取。 對于堿性有差別的兩種生物堿，可采用調(diào) pH后簡單萃取法分離。 （ 1）吸附柱色譜 常用氧化鋁或硅膠作為吸附劑，有時也用纖維素、聚酰胺等。 分離原理 要點 利用堿性差異分離 pH梯度萃取 利用溶解度差異分離 苦參（乙醚）、防己（冷苯）、麻黃（草酸） 利用特殊官能團分離 羧基、酚羥基、內(nèi)酯與內(nèi)酰胺 利用色譜法分離 吸附色譜、分配色譜 高效液相色譜法 最佳選擇題 分離漢防己甲素和漢防己乙素的原理（ ） [答疑編號 5630020205] 【正確答案】 D（漢防己甲素的極性小于漢防己乙素，可溶于冷苯） 三、水溶性生物堿（季銨堿）的分離 （一）沉淀法 實驗室常用雷氏銨鹽試劑純化季銨堿。 在展開劑中加入少量堿性試劑，如二乙胺、氨水等，可改善分離效果。 ① 水：可用濾紙本身含有的 6%～ 7%水分，也可用水浸潤濾紙； ② 甲酰胺：將甲酰胺溶于丙酮，再將濾紙置于其中浸濕片刻，取出，揮去丙酮即可； ③ 酸性緩沖液（也稱多緩沖紙色譜）：將不同 pH值的酸性緩沖液自起始線由高到低間隔 2cm 左右的距離涂布若干個緩沖液帶，晾干即可使用。 如用 HPLC法分離分析罌粟殼中的嗎啡、可待因和罌 粟堿時，采用 Waters μ Bondapak C18色譜柱，流動相為 %乙酸銨 1%三乙胺 甲醇（ 49： 1： 50） ,檢測波長 230nm，柱溫 25℃ 。 苦參堿 氧化苦參堿 羚基苦參堿 去氫苦參堿 N甲基金雀花堿 （二）苦參生物堿的理化性質(zhì) 苦參堿有 α 、 β 、 γ 、 δ 四種異構(gòu)體。 可利用兩者溶解性的差異將其分離。此外還含少量的甲基麻黃堿、甲基偽麻黃堿和去甲基麻黃堿、去甲基偽麻黃堿。 （五）苦參生物堿在臨床應(yīng)用中應(yīng)注意的問題 苦參堿可致膽堿酯酶活性下降 ，靜脈滴注苦參堿引起膽堿酯酶活性下降，產(chǎn)生倦怠乏力、納差等不良反應(yīng)；苦參栓可致外陰過敏；苦參注射液致過敏性休克并可致惡心、嘔吐；苦參素膠囊致乙肝加重等，臨床應(yīng)用時需注意。 苦參堿既可溶于水，又能溶于三氯甲烷、乙醚、苯、二硫化碳等親脂性溶劑。 《中國藥典》指標成分： 苦參堿和氧化苦參堿 。 根據(jù)生物堿的性質(zhì)和不同的色譜方法可選擇相應(yīng)的固定相。 ① 有色生物堿可直接觀察斑點； ② 具有熒光的生物堿在紫外光下顯示熒光斑點； ③ 大多生物堿的薄層色譜可用改良碘化鉍鉀試劑顯色，顯橘紅色斑點。 （ 2）展開劑 展開劑系統(tǒng)多以親脂性溶劑為主，一般以三氯甲烷為基本溶劑。 色譜柱類型：硅膠吸附色譜柱， C18反相色譜柱。如在阿片生物堿中，嗎啡具酚羥基而可待因無酚羥基，可用 5%氫氧化鈉分離。 總堿中各生物堿的堿性不同，可用 pH梯度萃取法進行分離。 常用的生物堿顯色劑 試劑名稱 顏色特征 Mandelin 試劑 莨菪堿及 阿托晶顯紅色 （ 1%釩酸銨的濃硫酸溶液） 土的寧顯藍紫色，奎寧顯淺橙色 Macquis 試劑 嗎啡顯紫紅色 （含少量甲醛的濃硫酸） 可待因顯藍色 嗎啡顯藍色漸轉(zhuǎn)棕色，小糪堿 顯棕綠色 （ 1%鉬酸納或鉬酸銨的濃硫酸溶液） 利血平顯黃色漸轉(zhuǎn)藍色，烏頭堿顯黃棕色 一些顯色劑，如溴麝香草酚藍、溴麝香草酚綠等，在一定 pH條件下能與一些生物堿生成有色復(fù)合物，這種復(fù)合物能被三氯甲烷定量提取出來，可用于生物堿的含量測定。 ② 仲胺一般不易與生物堿沉淀試劑反應(yīng)，如麻黃堿、嗎啡、咖啡堿等。如鉤藤堿的堿性大于異鉤藤堿堿性。如環(huán)己胺的堿性（ ）大于苯胺（ ），后者顯然為共軛效應(yīng)所致。 如麻黃堿的堿性（ ）強 于去甲麻黃堿（ ），即是由于麻黃堿氮原子上的甲基供電誘導(dǎo)的結(jié)果。 生物堿分子中堿性基團的 pKa值大小順序一般是：胍基＞季銨堿＞ N烷雜環(huán)＞脂肪胺＞芳香胺 ≈N 芳雜環(huán)＞酰胺 ≈ 吡咯。 類型 溶解性 游離生物堿 親脂性生物堿 大多數(shù)叔胺堿和仲胺堿為親脂性，一般能溶于有機溶劑，尤其易溶于親脂性有機溶劑，特別易溶于氯仿。 氧化苦參堿 （ 3） 小分子生物堿： 少數(shù)分子較小而堿性較強的生物堿， 既可溶于水，也可溶于三氯甲烷，如麻黃堿、煙堿等。 旋光性影響因素：手性碳構(gòu)型 、測定溶劑、 pH值、溫度、濃度等。 長春堿 R＝ CH3 長春新堿 R＝ CHO （五）有機胺類生物堿 這類生物堿的結(jié)構(gòu)特點是 氮原子不在環(huán)狀結(jié)構(gòu)內(nèi) ，如麻黃中的 麻黃堿 ，秋水仙中的 秋水仙堿 ，益母草中的 益母草堿 等。 （四）吲哚類生物堿 這類生物堿來源于色氨酸，其數(shù)目較多，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，多具有顯著的生物活性。 芐基異喹啉類又分為 1芐基異喹啉類和雙 芐基異喹啉類 。 主要分布于豆科、石松科和千屈菜科。 一般來說，除氨基酸、氨基糖、肽類、蛋白質(zhì)、核酸、核苷酸以及含氮維生素等動、植物體必需的含氮有機化合物外，其他含氮有機化合物均可視為生物堿。完全消除了 1H對 13C的影響， 13C的信號在圖譜上均作為單峰出現(xiàn)，便于判斷 13C信號的化學位移。 適用對象： 含有共軛雙鍵、 α ， β 不飽和羰基（醛、酮、酸、酯）結(jié)構(gòu)化合物，及芳香化合物。1 峰， （ 3）場解吸質(zhì)譜（ FDMS） 適用于難氣化和熱穩(wěn)定性差的固體樣品，但碎片離子峰較少 （ 4）快原子轟擊質(zhì)譜（ FABMS）和液體二次離子質(zhì)譜（ LSIMS） 除得到分子離子峰外，還可得到糖和苷元的結(jié)構(gòu)碎片峰。常用的有紙色譜（ PC）、紙上電泳和薄層色譜（ TLC）。 網(wǎng)孔大小用交聯(lián)度（即加入交聯(lián)劑的百分比）表示，交聯(lián)度越大，則網(wǎng)孔越小，質(zhì)地越緊密，在水中越不易膨脹；交聯(lián)度越小，則網(wǎng)孔越大，質(zhì)地疏松，在水中易于膨脹。 利用一種用天然或人工合成的膜，以外界能量或化學位差為推動力，對雙組分或多組分的溶質(zhì)和溶劑進行分離、分級、提純和富集的方 法。 （ 3）大孔吸附樹脂的應(yīng)用： 主要用于天然化合物的分離和富集 預(yù)處理方法：用高濃度乙醇濕法裝柱，繼續(xù)用乙醇在柱上流動清洗，不時檢查流出的乙醇液，至流出的乙醇液與 水混合不呈現(xiàn)白色乳濁現(xiàn)象，然后以大量的蒸餾水洗去乙醇即可。 ② 可用于生物堿、萜類、甾體、糖 類、氨基酸等其他極性與非極性化合物的分離。 聚酰胺色譜的分離機理：一般認為是 “ 氫鍵吸附 ” ，即聚酰胺的吸附作用是通過其 酰胺羰基與酚類、黃酮類化合物的酚羥基，或酰 胺鍵上的游離胺基與醌類、脂肪羧酸上的羰基形成氫鍵締合而產(chǎn)生吸附 。 注意：一般，混合溶劑中強極性溶劑的影響比較突出，故不可隨意將極性差別很大的兩種溶劑混合在一起使用。 用量：一般為樣品量的 30～ 60倍。 ③ 所含 極性基團相同時，非極性基團越多，極性越弱 （如高級脂肪酸極性弱）。 （ 2） 溶劑極性越弱，則吸附劑對溶質(zhì)將表現(xiàn)出越強的吸附能力；溶劑極性增強，則吸附劑對溶質(zhì)的吸附能力即隨之減弱。 如硅膠、氧化鋁、活性炭吸附。 快速色譜（ flash chromatography，約 179。 常用反相硅膠填料有： RP2（ C2H5）、 RP8（ C8H17）、 RP18（ C18H37） （ 1）正相色譜：固定性極性 流動相極性 被分離物質(zhì)極性越大（親水性越強），越不易洗脫。 堿提酸沉： 黃酮、蒽醌類 等酸性成分。 在溶液中加入另一種溶劑以改變混合物的極性，使一部分物質(zhì)沉淀析出，從而實現(xiàn)分離。一般可比需要量多加 20%左右 。 作用： ① 改善或維持選擇性； ② 提高難揮發(fā)溶質(zhì)的溶解度。 定義：采用超臨界流體為溶劑對中藥材進行萃取的方法。 適用成分： 揮發(fā)性（ 100℃ 有一定蒸汽壓）； 對水穩(wěn)定； 不溶于水； 耐熱。 缺點： ① 出膏率低； ② 以水為溶劑時，提取液易發(fā)霉變質(zhì)。 常用親水性提取溶劑 溶劑 優(yōu)點 缺點 水 對細胞穿透力強，提取效率高 安全、價廉、易得 水雜質(zhì)多、易變 對含淀粉、粘液質(zhì)多的藥材不易過濾 乙醇 對藥材組織穿透力強，效率高 脂溶性雜質(zhì)較多 有選擇性，不同濃度極性不同 可防腐、沸點低，易除去、較便宜 可抑制酶活性、大部分可回收利用 有揮發(fā)性、易燃燒 甲醇 效率高于乙醇 毒性大、 較貴 提取方法 a、煎煮 b、浸漬法 c、滲漉法 d、回流 e、連續(xù)回流（索氏提?。? 掌握不同提取方法原理、特點及適用的成分類型。 第二節(jié) 中藥有效成分的提取與分離 一、中藥有效成分的提取 注意：在提取前，應(yīng)對所用材料的基源（如動、植物的學名）、產(chǎn)地、藥用部位、采集時間與加工方法等進行考查，并系統(tǒng)查閱文獻，以充分了解和利用前人的經(jīng)驗。 。 ？ 中藥化學研究內(nèi)容包括各類中藥的化學成分（主要是生理活性成分或藥效成分）的結(jié)構(gòu)特點、物理化學性質(zhì)、提取分離方法以及主要類型化學成分的結(jié)構(gòu)鑒定等。 。 作用原理：溶劑穿透入藥材原料的細胞膜，溶解可溶性 物質(zhì)，形成細胞內(nèi)外的濃度差，將其滲出細胞膜，達到提取目的。 缺點： ① 需加熱，含 揮發(fā)性 成分及 加熱易破壞 的成分不宜使用。 優(yōu)點： 適用于遇熱不穩(wěn)定的成分，或含大量淀粉、樹膠、果膠、黏液質(zhì)的中藥。 適用成分： 游離羥基蒽醌類成分 ，一些 小分子香豆素類 ，有機酸類成分等。 萃取選擇性的決定因素： 溫度、壓力、夾帶劑的種類及含量。 重結(jié)晶：從不純的結(jié)晶經(jīng)過進一步精制處理得到較純結(jié)晶的過程。 （ 3）色譜法： 單一化合物用兩種以上溶劑系統(tǒng)或色譜條件進行檢測，均顯示 單一的斑點 。） 醇提水沉法： 在藥材濃縮的水提液中加入數(shù)倍量的乙醇稀釋。 酸性化合物 + 鈣鹽、鋇鹽、鉛鹽 → 沉淀 → H 2S氣體 → 純品 堿性化合物 + 苦味酸鹽、苦酮酸鹽等（有機酸鹽） → 先加入無機酸，再堿化 → 純品 磷鉬酸鹽、磷鎢酸鹽、 雷氏銨鹽 等（無機酸鹽） （二）根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比（分配系數(shù)）不同進行分離 常見的方法有簡單的 液 液萃取法和液 液分配色譜（ LC或 LLC）等 。 適用物質(zhì)：水溶性或