【正文】 變。一般須根據(jù)預(yù)試結(jié)果先判斷色素的類型，再決定選用什么吸附劑處理為宜。 樣品極性較小、難以分離者，吸附劑用量可適當(dāng)提高至樣品量的 l00～ 200倍。 如樣品在所選裝柱溶劑中不易溶解，則可將樣品用少量極性稍大溶劑溶解后 ,再用少量吸附劑拌勻 ,并在 60℃ 下加熱揮盡溶劑，置 P205真空干燥器中減壓干燥、研粉后再小心鋪在吸附劑柱上。實驗室中最常應(yīng)用的混合溶劑組合如表所示： 吸附柱色譜常用混合洗脫溶劑 （ 4）添加溶劑的選擇 分離酸性物質(zhì)： 選用 硅膠（顯酸性） ，洗脫溶劑 加入適量乙酸 ，防止拖尾。 適用化合物類型： 酚類、醌類、黃酮類。至于吸附強弱則取決于各種化合物與之形成氫鍵締合的能力。易形成分子內(nèi)氫鍵者，其在聚酰胺上的吸附即相應(yīng)減弱。 ③ 對鞣質(zhì)的吸附特強，近乎不可逆，故用于植物粗提取物的脫鞣處理。 ② 洗脫溶劑的性質(zhì)（極性、酸堿性）。 （ 4）洗脫液的選擇： 洗脫液可選擇水、甲醇、乙醇、丙酮、不同濃度的酸堿液等。 當(dāng)混合物溶 液通過凝膠柱時，比凝膠孔隙小的分子可以自由進入凝膠內(nèi)部，而比凝膠孔隙大的分子不能進入凝膠內(nèi)部，只能通過凝膠顆粒間隙。 膜過濾技術(shù)主要包括：滲透、反滲透、超濾、電滲析和液膜技術(shù)等。 （五）根據(jù)物質(zhì)解離程度不同進行分離 基于混合物中各成分解離度差異進行分離。 （ 2）離子交換基團 （ 1）用于不同電荷離子的分離：天然藥物水提取物中的酸性、堿性及兩性化合物的分離。 原理 方法 特點及應(yīng)用 根據(jù) 物質(zhì)溶解度差別進行分離 結(jié)晶與重結(jié)晶 醇提水沉法或水提醇沉法 酸堿法 沉淀法 根據(jù)物質(zhì)分配比不同進行分離 萃取法 分配柱色譜 根據(jù)物質(zhì)吸附性差別進行分離 簡單吸附（活性炭） 吸附柱色譜（硅膠、氧化鋁、聚酰胺、大孔樹脂色譜） 根據(jù)物質(zhì)分子大小差別進行分離 凝膠過濾法 膜分離法 根據(jù)物質(zhì)解離程度不同進行分離 離子交換法 根據(jù)物質(zhì)沸點差別進行分離 分餾法 配伍選擇題 [答疑編號 5630010302] 【正確答案】 A 、吸附劑是 [答疑編號 5630010303] 【正確答案】 A 、堿均穩(wěn)定的極性吸附劑是 [答疑編號 5630010304] 【正確答案】 D [答疑編號 5630010305] 【正確答案】 D 炭 [答疑編號 5630010306] 【正確答案】 A [答疑編號 5630010307] 【正確答案】 C [答疑編號 5630010308] 【正確答案】 E [答疑編號 5630010309] 【正確答案】 D 第三節(jié) 中藥化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)研究方法 一、化合物的純度測定 （ 1）結(jié)晶形態(tài)和色澤：一個純的化合物一般都 有一定的晶形和均勻的色澤。 （ 4）氣相色譜法（ GC）和高效液相色譜法（ HPLC）：純的化合物顯示單一的譜峰。 根據(jù)采用的離子源不同分類： （ 1）電子轟擊質(zhì)譜（ EIMS） 當(dāng)樣品相對分子質(zhì)量較大難于氣化（如糖的聚合物、多肽），或?qū)岱€(wěn)定性差（如醇、糖苷和部分羧酸）， 常常得不到分子離子峰 。 目前還有基質(zhì)輔助激光解吸電離質(zhì)譜（ MALDIMS）、電噴霧電離質(zhì)譜（ ESIMS）、串聯(lián)質(zhì)譜（ MS— MS）等。 將被鑒定化合物和已知化合物對照品做一張共 IR光譜圖，如果兩者 IR光譜完全一致，則可鑒定是同一物質(zhì)。 診斷試劑可用于測定化合物的精細結(jié)構(gòu)。 裂分與偶合常數(shù)： 判斷相連接的氫的情況。 （ 2） DEPT：通過改變照射氫核的脈沖寬度或設(shè)定不同的弛豫時間，使不同類型的 13C信號在譜圖上呈現(xiàn)單峰 形式分別朝上或朝下，故靈敏度高，信號之間較少重疊。 注意： “ 第四節(jié) 中藥化學(xué)在中藥質(zhì)量控制中的作用和意義 ” 內(nèi)容詳見 “ 緒論 ” 。 二、生物堿的分布 植 物 類 型 科 屬 雙子葉植物 （多見，已知有 50多個科的 120多個屬） 如毛茛科（黃連屬黃連，烏頭屬烏頭、附子）、防己科（漢防己、北豆根）、罌粟科（罌粟、延胡索）、茄科（曼陀羅屬洋金花、顛茄屬顛茄、莨 菪屬莨菪）、馬錢科（馬錢子）、小檗科（三棵針）、豆科（苦參屬苦參、槐屬苦豆子）、蕓香科吳茱萸屬（吳茱萸）等 單子葉植物 如石蒜科、百合科（貝母屬的川貝母、浙貝母）、蘭科等 裸子植物 如麻黃科、紅豆杉科、三尖杉科和松柏科等 低等植物 如煙堿存在于蕨類植物中 ,麥角生物堿存在于菌類植物中 地衣、苔蘚類植物中僅發(fā)現(xiàn)少數(shù)簡單的吲哚類生物堿。 此類生物堿分子較小，結(jié)構(gòu)簡單， 很多呈液態(tài) 。如苦參中的 苦參堿、氧化苦參堿 ，野決明中的金雀花堿等。 （三）異喹啉類生物堿 這類生物堿 來源于苯丙氨酸和酪氨酸系 ，具有異喹啉或四氫異喹啉的基本母核，在植物中分布廣泛，數(shù)目較多，具有多方面的生物活性。 （ 1） 1芐基異喹啉類： 為異喹啉母核 1位連有芐基的一類生物堿。 此類生物堿可以看成由 兩個異喹啉環(huán)稠合而成 ，依據(jù)兩者結(jié)構(gòu)母核中 D環(huán)氧化程度不同，又分為 小檗堿類和原小檗堿類。主要分布于馬錢科、夾竹桃科、茜草科等。如吳茱萸中的吳茱萸堿。 益母草堿 生物堿結(jié)構(gòu)分類總結(jié) 生物堿類型 二級分類 結(jié)構(gòu)特點 代表化合物 吡啶類生物堿 簡單吡啶類 檳榔堿、次檳榔堿、煙堿、胡椒堿 雙稠哌啶類 苦參堿、氧化苦參堿 、金雀花堿 莨菪烷類生物堿 莨菪堿 、古柯堿 異喹啉類生物堿 簡單異喹啉類 薩蘇林 芐基異喹啉類 罌粟堿、厚樸堿、去甲烏藥堿 蝙蝠葛堿、漢防己甲（乙）素 原小檗堿類 小檗堿 、延胡索乙素 嗎啡烷類 嗎啡、可待因、青風(fēng)藤堿 吲哚類生物堿 簡單吲哚類 大青素 B、靛青苷 色胺吲哚類 吳茱萸堿 單萜吲哚類 士的寧 、利血平 雙吲哚類 長春堿、長春新堿 有機胺類生物堿 麻黃堿 、秋水仙堿、益母草堿 練習(xí)題 最佳選擇題 苦參堿是 [答疑編號 5630020201] 【正確答案】 E 麻黃中生物堿的主要類型是 [答疑編號 5630020202] 【正確答案】 B 第二節(jié) 生物堿的理化性質(zhì) 一、性狀 多為結(jié)晶形固體，少數(shù)為非晶形粉末； 具有固定的熔點，有的具有雙熔點，個別的僅具有分解點； 少數(shù)小分子生物堿為 液體，如煙堿、毒芹堿、檳榔堿 。 個別小分子固體及少數(shù)呈液態(tài)的 生物堿如麻黃堿、煙堿等具揮發(fā)性 ，可用水蒸氣蒸餾法提取。 麻黃堿在水中呈右旋性，在三氯甲烷中呈左旋性； 煙堿在中性條件下呈左旋性，在酸性條件下呈右旋性； 北美黃連堿在 95%以上乙醇中呈左旋性，在稀乙醇中呈右旋性；在中性條件呈左旋性，在酸性條件下呈右旋性。 不溶或難溶于水，但溶于酸水。 麻黃堿 （ 4） 酰胺類生物堿： 由于酰胺在水中可形成氫鍵，所以在水中有一定的溶解度， 如秋水仙堿、咖啡堿等。 酯的堿水解 （二）生物堿鹽 一般易溶于水，可溶于甲醇、乙醇類，難溶于親脂性有機溶劑。溶于酸水，不溶或難溶于水和堿水 親水性生物堿 主要指季銨 堿和某些含氮 氧化物的生物堿，可溶于水、甲醇、乙醇，難溶于親脂性有機溶劑 具特殊官能團的生物堿 兩性生物堿 即可溶于酸水，也可溶于堿水，但在 pH89時易產(chǎn)生沉淀 具內(nèi)脂或內(nèi)酰胺結(jié)構(gòu) 在堿水中，其內(nèi)酯（或內(nèi)酰胺）結(jié)構(gòu)可開環(huán)形成羧酸鹽溶于水中，繼之加酸復(fù)又還原 類型 溶解性 生物堿鹽 一般溶解性 易溶于水，可溶于醇類，難溶于親脂性有機溶劑。 ②pKa2 ～ 7為弱堿，如芳香胺、 N六元芳雜環(huán)類生物堿。 胍基 吡咯 （二）堿性強弱與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系 堿性強弱影響因素： 氮原子的雜化方式 電 子云密度（電性效應(yīng)） 空間效應(yīng) 分子內(nèi)氫鍵。 電性效應(yīng)（包括誘導(dǎo)效應(yīng)和共軛效應(yīng)），能影響 N原子上電子云排布，從而影響堿性的大小。而二者的堿性弱于苯異丙胺（ ），則因前二者氨基碳原子的鄰位碳上羥基吸電誘導(dǎo)的結(jié)果。 阿馬林（ ） 新士的寧（ ） 士的寧（ ） （ 2）共軛效應(yīng)： 當(dāng)生物堿分子中氮原子的孤電子對與 π 電子基團共軛時，一般使生物堿的堿性減弱。 環(huán)已胺（ ） 苯胺（ ） 毒扁豆堿（ ， ） 酰胺型： 酰胺氮原子上的孤電子對與羰基形成 pπ 共軛效應(yīng)，使其堿性極弱。 胍（ ） 氮原子由于附近取代基的空間立體障礙或分子構(gòu)象因素，而使質(zhì)子難于接近氮原子，堿性減弱。 鉤藤堿的共軛酸 異鉤藤堿的共軛酸 對于具體生物堿來說，若影響堿性的因素不止一個，則需綜合考慮。 原因：生物堿在酸性條件下成鹽，易溶于水與沉淀試劑反應(yīng)，所生成沉淀易于觀察。 ③ 水溶液中如有蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、鞣質(zhì)等亦可與此類試劑產(chǎn)生陽性反應(yīng)，故應(yīng)在被檢液中除掉這些成分。 ④ 個別沉淀試劑可用于分離純化生物堿，如雷氏銨鹽可用于沉淀分離季銨堿。 多項選擇題 與碘 — 碘化鉀在酸性水溶液中能生成紅棕色沉淀的有（ ） [答疑編號 5630020203] 【正確答案】 AE 可使嗎啡初顯紫色漸轉(zhuǎn)棕色的試劑是 ,5二硝基苯甲酸 ﹪釩酸銨的濃硫酸溶液 ﹪鉬酸鈉的濃硫酸溶液 [答疑編號 5630020204] 【正確答案】 D 第三節(jié) 生物堿的提取與分離 一、總生物堿的提取 揮發(fā)性生物堿如麻黃堿可用水蒸氣蒸餾法提取。也可用含氨水的乙醇洗脫液直接洗脫，中和 洗脫液，回收乙醇即得總生物堿。 具體方法有兩種： ① 總生物堿溶于親脂性有機溶劑， pH由高至低依次萃取，生物堿可按堿性由強至弱先后成鹽依次 被萃取出而分離 ② 總生物堿溶于酸水，逐步加堿使 pH值由低至高分離。 （氧化苦參堿的極性大于苦參堿，難溶于乙醚） 漢防己中漢防己甲素和漢防己乙素的分離。 內(nèi)酯或內(nèi)酰胺結(jié)構(gòu)的生物堿可在堿性水液中加熱開環(huán)生成溶于水的羧酸鹽而與其他生物堿分離，在酸性下又環(huán)合成原生物堿而沉淀，如喜樹堿。 如三尖杉中的抗癌生物堿三尖杉酯堿和高三尖杉酯堿的分離，兩者結(jié)構(gòu)僅差一個亞甲基。 此外，制備型薄層色譜、干柱色譜、中壓或低壓柱色譜等也常用于分離生物堿。 硅膠適用注意：硅膠為酸性吸附劑，易造成拖尾或復(fù)斑，影響分離效果。 若 Rf值太小，加入適量甲醇、丙酮等極性較大的溶劑； 若 Rf值太大，加入適量苯、環(huán)己烷等極性較小的溶劑。 甲酰胺適合分離弱極性或中等極性的生物堿；水適合分離水溶性生物堿。（如碘化鉍鉀不顯色，可選用其他特殊顯 色劑） （二）紙色譜 生物堿的紙色譜多為正相分配色譜。 紙色譜所用的顯色劑與薄層色譜法基本相同，但含硫酸的顯色劑不宜使用。 由于生物堿具堿性，使用的流動相以偏堿性為好。分離度均大于 ，峰形對稱。 結(jié)構(gòu)分類：這些生物堿都屬于雙稠哌啶類，具喹喏里西啶的基本結(jié)構(gòu)，除 N甲基金雀花堿外，均由兩個哌啶環(huán)共用 一個氮原子稠合而成。 氧化苦參堿為無色正方體狀結(jié)晶（丙酮），熔點 207～ 208℃ （分解），含一分子結(jié)晶水的氧化苦參堿的熔點為 77～ 78℃ 。 氧化苦參堿是苦參堿的 N一氧化物，具半極性配位鍵，其親水性比苦參堿更強，易溶于水，可溶于氯仿，但難溶于乙醚。 （三）苦參生物堿的提取與分離 苦參以稀酸水滲漉，通過陽離子交換樹脂交換提取總生物堿。 二、麻黃 （一）麻黃中主要生物堿及其化學(xué)結(jié)構(gòu) 主要成分：以麻黃堿和偽麻黃堿為主，前者占總生物堿的 40%～ 90%。 甲基麻黃堿（ ） 麻黃堿（ ） 去甲基麻黃堿（ ） 麻黃堿和偽麻黃堿屬仲胺衍生物，且互為立體異構(gòu)體，它們的結(jié)構(gòu)區(qū)別在于 C1