微生物學(xué)目的與要求內(nèi)容-免費(fèi)閱讀
【正文】 什么是奮斗？奮斗就是每天很難，可一年一年卻越來越容易。③根據(jù)各個(gè)步驟的試驗(yàn)結(jié)果，判斷所分離的病毒屬于何種病毒。③接種完畢后孵育35℃，72小時(shí)后收獲尿囊液。 原液乙： Na2HPO4雞胚孵育至第3天即出現(xiàn)尿囊，為直腸腹側(cè)部分的膨出物，尿囊腔是胚胎的排泄器官，內(nèi)含尿囊液，初為透明液體，是單純生理鹽水溶液，以后尿囊液中尿酸鹽迅速增加，胚胎發(fā)育到第12～13天，尿囊液開始變得渾濁，若將其冷卻即可見有沉淀物形成，主要是尿酸鹽類。孵育溫度通常在38～39℃之間，相對濕度40～60％。 2．于第1孔和第8孔中各加入1∶。 3．自第10孔起， ml。注：為方便保存，此處觀察的細(xì)胞已經(jīng)過固定和染色。3．將細(xì)胞瓶倒放，細(xì)胞在上，胰酶在下，繼續(xù)孵育37℃5～10分鐘。如HeLa細(xì)胞，Hep－2細(xì)胞及KB細(xì)胞。3．用鑷子將組織塊放入無菌玻璃瓶或三角燒瓶內(nèi)，加入10～％胰酶溶液，37℃水浴20分鐘，中間搖動幾次。很多組織細(xì)胞，包括雞胚、鼠胚、各種動物的腎組織細(xì)胞，人胚羊膜組織細(xì)胞或流產(chǎn)胎兒組織細(xì)胞（應(yīng)在死后6小時(shí)內(nèi)采取，因時(shí)間過長，組織細(xì)胞生長成功率下降）等均可作細(xì)胞培養(yǎng)的來源。雞胚放入35～37℃培養(yǎng)48～72小時(shí)。絨毛尿囊膜上接種法，除適用于天花，牛痘等病毒外，尚適用于單純皰疹病毒和其它一些病毒，但其它一些病毒不如天花、牛痘、單皰疹病毒那樣具有明顯的病斑。3．用分離針或大頭針通過火焰消毒，穿通天然氣室端所鋸小孔；并用分離針或大頭針輕輕劃破卵殼，露出三角形卵膜，最好將分離針或大頭針30176。注意雞胚必須直立，令氣室端朝上。 2. 用碘酒消毒注射入口和天然氣室端的蛋殼，再用電動磨蛋器于注射入口和天然氣室端的蛋殼上磨一小孔，勿傷及卵膜。三、 病毒雞胚培養(yǎng)法 雞胚培養(yǎng)法常用于痘類病毒、粘病毒和皰疹病毒的分離、鑒定、制備抗原、生產(chǎn)疫苗以及研究病毒性質(zhì)等。（4號）、煮針鍋、碘酊、棉簽。 2. 用無菌毛細(xì)吸管吸取病毒懸液少許，連同毛細(xì)吸管插在無菌試管中備用。左手拇指捏住尾部的遠(yuǎn)端，向下彎45176。 （三）麻疹病毒包涵體（示教） 用高倍鏡或油鏡觀察經(jīng)麻疹病毒培養(yǎng)后，HE染色的人胚或羊膜細(xì)胞標(biāo)本片，注意包涵體在細(xì)胞內(nèi)的位置、形態(tài)、染色性以及細(xì)胞融合情況。. . . . .實(shí)驗(yàn)十 病毒的形態(tài)學(xué)診斷、培養(yǎng)方法和血清學(xué)試驗(yàn)?zāi)? 的（一）觀察病毒包涵體，并掌握其診斷意義。二、 病毒動物接種法 實(shí)驗(yàn)動物在病毒學(xué)研究中有四方面用途：①分離鑒定病毒，如乙腦病毒；②連續(xù)傳代通過，以減弱有毒株對人的致病力，如狂犬病病毒；③制備抗血清；④病毒致病機(jī)理的研究。右手持注射器，于彎處進(jìn)針靜脈。 3. 用左手將小白鼠握在手掌中，大拇指及食指抓住小白鼠耳部使其頭部朝前并呈仰臥位置，另一手取事先吸有病毒懸液的吸管，慢慢滴出一點(diǎn)于滴管口而不使其自然掉落，呈懸滴狀。 【方法】 1. ，去除注射器內(nèi)的氣泡。 雞胚和實(shí)驗(yàn)動物一樣，為一整體動物，有神經(jīng)血管的分布及臟器的構(gòu)造；雞胚的組織分化程度低，病毒易于繁殖，感染了病毒的膜結(jié)構(gòu)和液體中，含有大量病毒；雞胚來源充足，操作簡單、通常本身是無菌的，對接種的病毒不產(chǎn)生抗體為其優(yōu)點(diǎn)，但除產(chǎn)生痘皰的病毒及引起雞胚死亡的病毒外，通常不產(chǎn)生特異性的感染指征，必須利用第二個(gè)試驗(yàn)系統(tǒng)來測定病毒的增殖。 3．用大頭針通過火焰消毒后刺穿氣室端所開小孔的卵膜，這樣可避免在注射時(shí)液體回流出來。 7．收獲尿囊液之前取出雞胚，用碘酒消毒氣室端，并用鑷子擊破氣室端卵殼，沿氣室邊緣小心打開一大缺口，然后用小鑷子撕去卵膜及撕破絨毛尿囊膜，最后用毛細(xì)管吸取尿囊液，一般可吸得4～5毫升。角度自上往下壓迫卵膜一個(gè)小口，這樣不致?lián)p傷絨毛尿囊膜。絨毛尿囊膜羊水卵白卵黃囊尿囊液圖102 雞胚絨毛尿囊膜上接種（三）羊膜腔接種法（錄像）【材料】副流感病毒10－3稀釋液、9～10日齡雞胚、滅菌液體石蠟、其余同《尿囊腔接種法》。 6．自注射后次日起逐日檢查雞胚的生活情況，2日以內(nèi)死亡者多為非特異性損傷而致死；2日后死亡者視為特異性死亡，流感或副流感病毒10－3稀釋注射時(shí)，一般不引起死亡。細(xì)胞的選擇主要依據(jù)組織細(xì)胞對病毒的敏感性。由于胰酶的作用可使大量細(xì)胞游離，液體變混。HeLa細(xì)胞對脊髓灰質(zhì)炎三型病毒，腺病毒及大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)的ECHO病毒都敏感。4．將胰蛋白酶倒掉，再加入原量的生長液，用10毫升吸管吹打分散細(xì)胞。五、血凝抑制試驗(yàn) 血凝抑制試驗(yàn)系利用血凝素特異性抗體與病毒表面相應(yīng)血凝素相互作用，使病毒血凝現(xiàn)象抑制的試驗(yàn)。1． 自第10孔起，％ ml，搖勻后放室溫靜止45分鐘，觀察結(jié)果，并確定血（球）凝（集）效價(jià)。如此作對倍稀釋直至第7孔。孵育4～5天后即可在檢蛋燈上檢查雞胚受精與否及發(fā)育情況。因此，在制備流感病毒抗原時(shí)，通常用鹽水將尿液加以稀釋后放4℃?zhèn)溆?，這樣可減少尿酸鹽的沉淀，尿液量在雞胚發(fā)育的第11至13天最高，平均為6～。12H2O 304克 KH2PO4 加入800毫升雙蒸水 葡萄糖 20克 0．4％酚紅液 100毫升 加入雙蒸水使成1000毫升，加入2毫升氯仿作為防腐劑，保存于4℃冰箱，使用前按
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