【正文】 柔性、親水的聚合物表面接枝鏈能形成一層緊密的結(jié) RES 攝取 圖 68 脂質(zhì)體的類型： a)普通脂質(zhì)體， b)剛性脂質(zhì)體， c)表面修飾的脂質(zhì)體， d)其它型脂質(zhì)體 調(diào)理素作用 192 構(gòu)層，即使此結(jié)構(gòu)層的濃度很小，它們也能使其它聚合物不與其表面發(fā)生相互作用。 （ 4）控制粒徑 前已述及，靜脈注射或動脈注射給藥后，粒子的粒徑也很大程度上決定了其在體內(nèi)分布情況。 表面修飾的方法具體有以下幾種方式： （ 1）提高親水性 眾多研究表明，提高脂質(zhì)體表面親水性可延長脂質(zhì)體循環(huán)半衰期。 F 同樣可以用脂質(zhì)體表面與生物分子碰撞速率的動力學(xué)常數(shù)的比值來表示。該分子拉鏈由于具有空間屏圖 67 普通脂質(zhì)體的體內(nèi)過程：Ⅰ普通脂質(zhì)體；Ⅱ脂質(zhì)體與識別蛋白復(fù)合物；Ⅲ脂質(zhì)體與細胞表面結(jié)合；Ⅳ被吞噬的脂質(zhì)體。然后脂質(zhì)體 被粘附到吞噬細胞表面并隨后被吞噬。 長循環(huán)脂質(zhì)體 脂質(zhì)體由于粒徑小，進入體循環(huán)后主要被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)（ RES）中的白細胞、單核細胞以及巨噬熒光素酶活性（RLU/mg） DOTMA/Chol(1:1)脂質(zhì)體 DOTMA/Chol/GalC4Chol(1::)脂質(zhì)體 DOTMA/GalC4Chol(1:1)脂質(zhì)體 圖 66 小鼠靜脈注射糖基化脂質(zhì)體 DNA 復(fù)合物（ 2:3） 6h 后在肺（ □ ）、肝（ ■ ）、腎（ ）、脾（ ）、心（ ）的轉(zhuǎn)染活性 189 細胞吞噬，而 RES 系統(tǒng)主要包括肝、脾和骨髓。糖基化陽離子脂質(zhì)體受體介導(dǎo)的特異性基因轉(zhuǎn)移和高效表達 受如下因素的影響：①粒徑，肝靶向作用的半乳糖酰陽離子脂質(zhì)體 質(zhì)粒 DNA 的粒徑必須小于 150nm，而作用于 Kuppfer 細胞的粒徑可適當(dāng)增大。 ） mV， DOPE 為（ 177。 ⑤細胞核對 DNA 的攝取 對于分子量大于 70kD 的分子，核膜將限制其進入細胞核，除非它能與細胞核的主動轉(zhuǎn)運系統(tǒng)發(fā)生相互作用。因此，缺少可融性脂質(zhì)的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低。 陽離子脂質(zhì)體 [32P] DNA 復(fù)合物靜脈注射后能迅速被循環(huán)系統(tǒng)清除，在肺中蓄積和表達，而在肝臟中表達的較少。 Gerschon 等 [44]研究證明，當(dāng) DNA 與 DOTMA/DOPE 陽離子脂質(zhì)體結(jié)合時， DNA 萎縮成一種凝聚狀的結(jié)構(gòu)，核酸被脂質(zhì)所包圍。由于空間位阻的原因，含有小極性頭部基團（如磷脂酸乙醇胺、 PE 等）的脂質(zhì)比含有大極性頭部基團的脂質(zhì)更易形成六方晶相的構(gòu)型。一般認為，形成梳狀結(jié)構(gòu)容易轉(zhuǎn)染。因其分子中含有許多正電荷中心，能與帶負電的基因發(fā)生多個價鍵結(jié)合，并且進入體內(nèi)后不易被核酸酶降解。脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移與病毒載體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移相比，有以下的優(yōu)勢：脂質(zhì)體是非病毒性載體，脂質(zhì)體與細胞膜融合將目的基因?qū)思毎?，即被降解，?細胞無毒副作用，可反復(fù)給藥；脂質(zhì)體不激活癌基因和免疫反應(yīng)，不會致癌和致突變；脂質(zhì)體與基因的復(fù)合過程容易；脂質(zhì)體可以保護 DNA或 RNA，不至于被滅活或被核酸酶降解；脂質(zhì)體攜帶的基因可轉(zhuǎn)運至特定部位；操作簡單快速，重復(fù)性好。因此常使用含酰胺鍵和氨甲酰鍵為連接鍵的陽離子脂質(zhì)。陽離子親水脂分子主要有陽離子去垢劑、帶正電的脂質(zhì)衍生物和天然堿性脂三種類型 [37]。一般在生理鹽水中，圖 64 脂質(zhì)體的類型及其結(jié)構(gòu)簡圖 普通脂質(zhì)體 陽離子脂質(zhì)體 長循環(huán)脂質(zhì)體 免疫脂質(zhì)體 183 單純由蛋黃卵磷脂組成的脂質(zhì)體直徑約 15nm，由 DPPC 組成的約 25nm。 脂質(zhì)體的體內(nèi)行為除了與決定膜的理化性質(zhì)如流動性、電荷密度和滲透性等的各種化學(xué)成分相關(guān)外，還與脂質(zhì) 體的大小和形狀等特性能有關(guān)。脂質(zhì)體作為藥物的儲庫，可使被包封藥物緩慢釋放，從而使藥物在血液中或局部位點維持較長時間的有效濃度。 為了揭示這種表面活性劑 /脂質(zhì)分散體復(fù)合物的特性，除了需測量 SLN粒徑外，還要采用其它的表征方法。以 HL60 細胞和人粒性白細胞的生存情況為指標(biāo)，考察不同納米載藥體系的體外細胞毒性，發(fā)現(xiàn)SLN 的毒性比 PLGA 納米粒的毒性低 90%，比 PBCA 納米粒低 99%。將制得的初乳冷卻，隨著水相溫度的降低，藥物在水中的溶解度也隨之下降，這時部分藥物又會重新分配到油相。在體外，納米粒持續(xù)釋放藥物的時間可長達 5~7 周。根據(jù)他們發(fā)表的數(shù)據(jù)（圖 63），固體脂質(zhì)納米粒載藥方式具有以下三種模型： 1． 固態(tài)溶液：冷勻法沒有采用表面活性劑或采用對藥物沒有增溶作用的表面活性劑，制得的脂質(zhì)納米粒是一種固態(tài)溶液（即藥物以分子分散于脂質(zhì)基質(zhì)中）； 2． 核 殼結(jié)構(gòu)，藥物富集于殼中：當(dāng)藥物的沉淀速度小于脂質(zhì)結(jié) 晶的速度，這時會形成一個藥物富集的殼； 3． 核 殼結(jié)構(gòu)，藥物富集于核中：藥物溶解在脂質(zhì)熔融物中的量達到或接近于它的飽和藥物量時，冷卻時藥物的沉淀先于脂質(zhì)的結(jié)晶，就會形成一個藥物富集的核。納米粒中脂質(zhì)的晶型和常規(guī)狀態(tài)下不太一樣。獲得足夠載藥量的先決條件是藥物在脂質(zhì)熔融物中溶解度足夠大 [19]。為了證明脂質(zhì)納米粒肺部給藥的可行性，有人將脂質(zhì)納米粒混懸液霧化后，再收集霧化后的顆粒并分析其中納米粒的粒徑分布。以上結(jié)果表明，可以一步生產(chǎn)出脂質(zhì)含量高、粒徑小的透皮用 SLN 體系。和脂質(zhì)體相似， SLN 是由生物耐受性良好的材料組成，其最突出的優(yōu)點在于它具有固態(tài)基質(zhì)，這樣可以保護化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定的物質(zhì)不被分解破壞，并可以調(diào)節(jié)藥物的釋放。但是實際上納米粒的聚合并不是決定因素。楊時成等以Poloxamer188為隱性修飾劑，制備了 197nm的喜樹堿 硬酯酸 SLN。粒徑的分布對于靜脈注射用藥來說是一個關(guān)鍵問題，它可以導(dǎo)致毛細血管堵塞，造成脂肪栓塞等致死性的嚴重問題。另外粒徑大小與靶向性有關(guān)，大于 5μ m 的粒子被肺的毛細血管床捕獲，小粒子被 RES 吞噬；大于250nm 的納米 粒靶向脾，小于 250nm 的納米粒靶向體循環(huán)，小于 150nm 的納米粒靶向骨髓。有人用 ESR 研究了 乳酸羥基乙酸共聚物（ PLGA）和幾種脂質(zhì)基質(zhì)，結(jié)果表明 PNP 能更有效的穩(wěn)定藥物分子。 僅僅描述幾種膠態(tài)是不 足以表征膠態(tài)脂質(zhì)分散體結(jié)構(gòu)的，因為就藥物的穩(wěn)定性和藥物的釋放來說，膠態(tài)之間的動態(tài)變化非常重要。 DSC和 X射線衍射研究表明，凝膠是由三硬脂酸甘油酯的三維網(wǎng)狀結(jié)晶所構(gòu)成 [24]。 但是該方程對于那些離散的熔化轉(zhuǎn)變和當(dāng)出現(xiàn)一系列尖銳的特征吸收峰（超過 10 個）時不能很好的解釋，以及那些逐步熔化過程中所出現(xiàn)的一些細微變化也不適用。例如 tripalminSLN，采用熱勻法制備時，當(dāng)緩慢冷卻到室溫時，其以普通的α 晶型形式存在， SAXD 和 WAXD 顯示衍射峰較強，迅速冷卻時，所得到的α 晶型 WAXD 強而 SAXD弱。 DSC 應(yīng)用的原理是不同的脂質(zhì)晶型具有不同的熔點 和熔解焓。當(dāng)脂肪酸酯結(jié)晶溫度明顯低于α 型熔化溫度時，α 型被認為是最穩(wěn)定的。另外，由于膠體分散體具有較高的能量，能夠提供其晶型轉(zhuǎn)化所需要的能量。加入藥物也會影響過冷現(xiàn)象。只有當(dāng)脂質(zhì)熔點大于 70℃，冷凍防護劑和脂質(zhì)都能在噴霧干燥過程中保持 SLN 粒徑大 小不變時才考慮采用此法 [18]。冷凍的的速度取決于特定的樣品和條件。以海藻糖的效果最好，它可以充分阻止粒 172 子的聚合和藥物的滲漏。第一，在冷凍干燥過程 中從水性分散體變成粉末時，由于樣品的滲透壓和 pH值的改變，可能會引起不穩(wěn)定問題；第二，再增溶作用，粒子由于處在一個低含水量、高粒子濃度、高滲透壓的環(huán)境中，易發(fā)生聚合。有的配方如某些磷脂或自由脂肪酸對粒子有保護作用，但是會引起毒性。 γ射線照射適用于對溫度敏感的樣品。 滅菌能使包封藥物的 SLN的穩(wěn)定性降低。滅菌的溫度越高，粒子的團聚越明顯。溶解于水的 Poloxamer 分子遷移速度較快，能夠迅速覆蓋在乳勻過程中新生成的油水界面上，而磷脂分子溶解或以膠團形式分散在高粘度的脂質(zhì)中，需經(jīng)高壓解聚才能充分發(fā)揮表 面活性劑的作用。在較高溫度下，以磷脂 四丁 酚醛混合物為乳化劑制備的 SLN 的粒徑要小于以磷脂 膽酸鹽為乳化劑者。 3． 影響 SLN 粒徑的因素 （ 1）脂質(zhì)的影響 [9] 脂質(zhì)對 SLN 的影響極其復(fù)雜，如脂質(zhì)的結(jié)晶速度，脂質(zhì)的親 水性可影響脂質(zhì)的自我乳化的性質(zhì)；脂質(zhì)晶體的形狀可改變其表面積，這點后面還將作進一步討論。這些結(jié)果表明乳化劑的組成對粒徑大小有決定性作用。 2． 不同制備工藝的比較 （ 1）超聲分散和高壓乳勻法 Siekmann 等 [8]研究了不同制備工藝對四丁酚醛（ w=%）和大豆卵磷脂（ w=1%）穩(wěn)定的三棕櫚酸甘油酯（ w=3%）納米粒的影響。將微乳加入到水中會導(dǎo)致油相的沉降從而形成極細的顆粒。此法適用于對熱不穩(wěn)定的藥物和熔點低的脂質(zhì)，還可以避免熱乳勻過程中藥物向水相流失以及結(jié)晶過程中出現(xiàn)的晶型轉(zhuǎn)變和過冷態(tài)。一般在 50MPa~150MPa 壓力下重復(fù) 3~5 次已足夠，如果循環(huán)次數(shù)增多和壓力增大反而會使 SLN 的粒徑增大，因為隨著體系溫度的升高，粒子聚集傾向加大。此法的優(yōu)點是可避免使用對人體有害的附加劑和有機溶劑，尤其適用于對熱不穩(wěn)定的藥物。 固體脂質(zhì)納米粒的主要成分有三類：①脂質(zhì)，如脂肪酸甘油酯類（包括三硬脂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三萮酸甘油酯、 Witepsol W 3 Witepsol H 3 Witepsol H 4單硬脂酸甘油酯）及脂肪酸類（如硬脂酸、棕櫚酸）等；②乳化劑和助乳化劑，如磷脂（包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂及磷脂酰膽堿等）， Poloxamar, 聚山梨醇，膽酸鹽，四丁酚醛等；③藥物，親脂性藥物和親水性藥物均能制備成穩(wěn)定的 SLN 體系，并且載藥量和包封率都較高。使用途徑很廣，既可口服、注射，還可以局部應(yīng)用?，F(xiàn)已有脂質(zhì)體、固體脂質(zhì)納米粒、膠束、藥質(zhì)體和脂肪乳等體系供臨床使用。 SLN給藥途徑和方式較為廣泛，主要用于靜脈給藥，發(fā)揮靶向或控釋作用；也可口服給藥，以控制藥物在胃腸道內(nèi)的釋放，還可用于局部或眼部給藥。所制得的納米粒粒徑小且分布范圍窄，高壓乳勻還便于進行大規(guī)模生產(chǎn)。 通過熱乳勻最初得到的僅是一種乳液，脂質(zhì)還處于一種液體狀態(tài)，必須使其溫度降至室溫或熔點以下，才能形成 SLN。但是該法所制得的 SLN 粒徑較大，且粒徑分布范圍較寬。 微乳的制備方法 是用低熔點的脂肪酸（如硬脂酸）、乳化劑、輔助乳化劑和水在 65℃ ~70℃攪拌制成的透明混合液。當(dāng)超聲時間大于 15min 時可以得到粒徑在 30nm~180nm 之間的納米粒，但是長時間的超聲可增加金屬探頭造成 的金屬污染。一般來講，乳化蒸發(fā)法適用于制備粒徑小、分布范圍窄的 SLN；但是脂質(zhì)在有機溶劑中的溶解度較低（三棕櫚酸甘油酯w=%~%），限制了乳化蒸發(fā)法制備樣品的濃度，進而影響該體系的載藥性質(zhì)。不過有一點值得注意，即所有的脂質(zhì)實際上都是幾種不同化合物的混合物，所以即使同一供應(yīng)商提供的不同批號的產(chǎn)品，其組成也不會完全相同。 高濃度的乳化劑在乳勻過程中可以降低表面張力和促進粒子的分散。 （ 4）溫度的影響 如果高壓乳勻時操作溫度低于二棕櫚酰磷脂酰膽堿 (DPPC)和三月桂酸甘油酯的相轉(zhuǎn)變溫度，制備后容易出現(xiàn)相分離和較大的粒子。乳化劑的正確選擇對樣品在高溫下的穩(wěn)定性至關(guān)重要。 5%丁卡因 poloxamer 188/Compritol SLN經(jīng)濕熱蒸汽滅菌后，粒徑分布增大（多分散指數(shù) PI從 ），平均粒徑也增大（ 160nm增加到 260nm），而當(dāng)丁卡因的濃度升至 10%時粒子的粒徑甚至增大到 500nm以上。用濕熱蒸汽滅菌，卵磷脂體系比 poloxamer體系穩(wěn)定，但是對于γ射線滅菌，兩者沒有顯著區(qū)別。圍繞 SLN的化學(xué)穩(wěn)定性方面的研究至關(guān)重要，這對解決 SLN體系的滅菌問題提供幫助。 冷凍干燥法將降低表面活性劑的保護作用。 冷凍防護劑加入的時間也會影響最后產(chǎn)品的性質(zhì)。快速冷凍會導(dǎo)致小型和異質(zhì)晶體出現(xiàn)，增加了非晶型的含量，降低冷凍效果。 SLN 的 性質(zhì) 1． 過冷態(tài)及過冷分散體的形成 由一些短鏈的三脂肪酸甘油酯如三 肉豆蔻酸甘油酯（ Tm=56℃）和混合脂肪酸酯如 Witepsol H42 (Tm=41℃ )采用熱熔法所制得的納米粒，在室溫或在冰箱中儲存， DSC 和 X射線衍射并未檢測到特征峰。就微米體系而言，三脂肪酸甘油酯乳滴結(jié)晶的溫度比納米粒要高，其結(jié)晶溫度降低值與乳滴粒徑對數(shù)成線性關(guān)系，當(dāng)粒徑在 1μ m~10μ m 范圍內(nèi)時，結(jié)晶溫度降低值在 15℃ ~25℃之間。這些同樣能夠解釋三棕櫚酸甘油酯α 型小納米粒比大納米粒不穩(wěn)定的現(xiàn)象。 就長鏈脂肪酸甘油酯或混合脂肪酸酯來講， SLN 結(jié)晶后其變化過程持續(xù)幾天甚至幾周。通過示差熱掃描，我們可以判斷脂質(zhì)晶格中不同孔隙的長度。電鏡顯示，α 型同轉(zhuǎn)變后的β 型相比，粒子較小并且內(nèi)部結(jié)構(gòu)不均一，α 晶型粒子為球形，核不規(guī)則。 三脂肪酸甘油酯 SLN 粒徑減小時 X 射線衍射曲線也發(fā)生改變，小角 X 衍射峰變寬，且向小角位移。 6． 幾種膠態(tài)共存 幾種膠態(tài)種類的出現(xiàn)是一個重要的、值得深思的現(xiàn)象，但是 這方面還沒有被引起足夠的重視。所以應(yīng)對不同膠態(tài)分配過程的動力學(xué)進行深入的研究。從 ESR 譜可以得知，擴散系數(shù)的范圍大約在 或更高，這就意味著被包裹的分子最多幾秒鐘就能到達界面。 SLN 的給藥途徑較靈活，包括胃腸道的和非胃腸道的。最細毛細血管的管徑為 9 個微米，從 177