【正文】 磁性納米載體是目前國內(nèi)外大力研究的一種新型靶向給藥系統(tǒng)，它的應(yīng)用前景十分廣泛。一般認(rèn)為 [35]，采用脂質(zhì)體比利用病毒進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染具有以下優(yōu)點(diǎn)：①脂質(zhì)體與基因的復(fù)合過程比較容易；②脂質(zhì)體是非病毒性載體，與細(xì)胞膜融合將目的基因?qū)爰?xì)胞后，脂質(zhì)即被降解，無毒，無免 疫原性；③脂質(zhì)體攜帶的基因可能轉(zhuǎn)運(yùn)到特定的部位；④轉(zhuǎn)染過程方便易行，重現(xiàn)性好等。在隨后的臨床實(shí)驗(yàn)中，用此方法對 27 例編碼突變病人的血液進(jìn)行了檢測。他們用此方法進(jìn)行了高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等的分離。但是，許多平滑膜泡沒有密度差異，很難用此方法分開。 Egeland 等用聯(lián)有免疫復(fù)合物的 免疫磁珠從外周血中分離產(chǎn)生類風(fēng)濕因子的 B 淋巴細(xì)胞。 Vartdal 等發(fā)展了基于免疫磁珠技術(shù)的 HLA 分型方法，結(jié)果表明，磁珠不影響后續(xù)的的微量細(xì)胞毒分祈。應(yīng)用免疫磁性微球分離 T 細(xì)胞的還有 A1eixo 等人。 (5) IMMS 與其它骨髓凈化方法的聯(lián)合使用 有多項(xiàng)研究表明，聯(lián)合應(yīng)用免疫磁性微球與化學(xué)分離法會比單一應(yīng)用任何一種技術(shù)更能有效地從骨髓中清除掉癌細(xì)胞，當(dāng)然，這對骨髓造血細(xì)胞的損傷也較大。 De Rosa 等人報(bào)告了 65 例急性白血病或 NHL 患者的 ABMT 結(jié)果。在 20 例病人中，應(yīng)用聯(lián)合免疫熒光法證明自身骨髓移植包含有能夠被免疫磁性微球清除的惡性細(xì)胞。清除后，單核細(xì)胞的恢復(fù)率分別為 56％和 40％， CFUGM 恢復(fù)率分別為 45％和 38％。 4℃、轉(zhuǎn)動狀態(tài)培養(yǎng) 2h 后，混合物放在傳送裝置上通過一系列的磁場。免疫磁性微球技術(shù)發(fā)展起來的原因之一，就是越來越多的證據(jù)表明，腫瘤細(xì)胞亞類可以排斥補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞溶解反應(yīng)。 Gatto 等用它來檢測各種生物毒素和細(xì)菌芽孢，分析 A 型肉毒桿菌毒素、霍亂β亞基、蓖麻毒素、葡萄球菌內(nèi)毒素 B 等的檢測限可達(dá) fenmtogram（ 1015g）。對某些樣品來講，前處理可以增加靶生物的數(shù)量，從而提高 PCR 的靈敏度。兩種方法的全部檢測時(shí)間，包括制樣時(shí)間在內(nèi)不超過 26h。這種誘變方法的優(yōu)越性是無論用否 PCR 均可得到相同的結(jié)果，考慮到 在克隆 PCR 產(chǎn)品時(shí)，累計(jì)聚合酶錯(cuò)誤是一個(gè)必須注意的問題，這種用非 PCR 方法獲得 vector 的固相方法非常有吸引力。優(yōu)點(diǎn)是不應(yīng)用可能發(fā)生堵塞的柱子，終體積和終濃度可以控制。原理與免疫磁珠相似，只不過將抗原一抗體反應(yīng)換為 配體一配基反應(yīng)，可以稱作親和磁珠。間接法與直接法相比，除適用范圍廣外，還可以使用一組單克隆抗體，因而會獲得更好的細(xì)胞清除效果。 1．免疫磁性微球的性能與作用原理 免疫磁性微球主要用于細(xì)胞分離等方面。 6．其它磁性納米載休在疾病診斷中的應(yīng)用 納米粒子包裹造影劑或γ放射性物質(zhì)（如放射性的碘、銦、锝等）已經(jīng)在對腫瘤和身體其它部位的定位中用作顯影劑。由于 AMI227 的血漿半衰期相對較長， AMI227 作為血池對比劑時(shí)，注射時(shí)間就變得不是那么重要了，這樣在實(shí)施時(shí)比較方便，也可減少時(shí)間的耽誤。 USPIOs 由于血漿半衰期較長，而且 T1 效應(yīng)明顯，還可提供腫瘤的血管特性， 因此比 SPIOs 更有助于肝血管瘤的檢出和定性。 SPIOs 由于粒徑較大，主要促進(jìn)組織的 T2 弛豫，使組織信號降低，而對 T1 弛豫影響較小。從 1988 年 AMI25 進(jìn)入臨床研究以來，其常用劑量為（ 10~15）μ mol Fe/kg，輕度副作 用的發(fā)生率為 10%~15%，其中腰痛比較常見，發(fā)生率約為 3%~4%，其它副反應(yīng)還包括潮紅、皮疹和呼吸困難等，但都是可逆的，無需治療可自行恢復(fù)；低血壓等中度中毒反應(yīng)則相當(dāng)少見。 3．超順磁性氧化鐵的毒副作用 鐵是人體內(nèi)的正常成分，但如果人體內(nèi)鐵的含量太大時(shí)，就會有毒性問題。這主要是由于人體的網(wǎng) 狀內(nèi)皮系統(tǒng)（ RES）具有十分豐富的吞噬細(xì)胞，這些吞噬細(xì)胞是人體細(xì)胞免疫系統(tǒng)的組成部分，當(dāng)超順磁性氧化鐵納米粒通過靜脈注 240 射進(jìn)入人體后，與血漿蛋白結(jié)合，并在調(diào)理素作用下被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)識別，吞噬細(xì)胞就會把超順磁性氧化鐵納米粒作為異物而攝取，從而使超順磁性氧化鐵集中在網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞豐富的組織和器官中。一個(gè)常見的有代表性的制劑是 Schering 公司開發(fā)的 SHU555A（商品名為 Resovist）。 科學(xué)家們開發(fā)出了一系列的磁性納米粒 — 超順磁性氧化鐵（ SPIO），它是一種新型的磁共振陰性對比劑，其體內(nèi)具有組織特異性高，安全性好的特點(diǎn) [24]，目前在臨床上已有較多的應(yīng)用。將氧化鐵的磁性納米粒制備成含藥的磁性脂質(zhì)體或磁性的溫敏脂質(zhì)體，即所謂的磁性靶向制劑 [8， 9， 21， 23]，用體外磁場使之定位于腫瘤部位，然后用體外立體導(dǎo)向磁場聚 239 集定位設(shè)備誘導(dǎo)氧化鐵磁性納米粒發(fā)熱，同時(shí)抗癌藥物在 局部釋放，這樣就使得腫瘤的化療和熱療同步進(jìn)行。其中 3 位病人接受了一個(gè)療程， 9 位接受了二個(gè)療程，另 2 位接受了三個(gè)療程的治療。 Alexiou 等人 [20]首先用癌細(xì)胞植入新西蘭白兔的腿后，再將蒽環(huán)類抗腫瘤藥物米托蒽琨（ Metoxantrone）與表面經(jīng)包衣處理的磁性納米粒相聯(lián)接，當(dāng)腫瘤長到約 3500mm3 時(shí)，將這種載抗癌藥的磁性納米粒經(jīng)股骨動脈或耳靜脈給藥，然后在體外腫瘤部位加上一個(gè)磁場。 影響磁性納米粒在靶部位滯留和藥物靶向輸送效果的因素很多，如磁性載體的大小、釋藥速率、磁場強(qiáng)度、磁場梯度和磁場使用時(shí)間、腫瘤部位的血管分布、通過性、腫瘤部位離磁場的距離等等。一般當(dāng)磁性物質(zhì)的直徑為 10nm~30nm 時(shí)，就具有較好的靶向定位作用。 其它方面 對于具有不同特性的磁性納米粒還要進(jìn)行其它方面的質(zhì)量評價(jià)。結(jié)果應(yīng)該滿足試驗(yàn)設(shè)計(jì)或生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)的要求。石可瑜等 [4]選擇小鼠腎臟作為磁定位器官，將小鼠固定，左腎置于外加磁場中，尾靜脈注射阿霉素 羧甲基葡聚糖磁性納米粒。 導(dǎo)向定位裝置還可以根據(jù)試驗(yàn)要求自行設(shè)計(jì)，選擇合適的介質(zhì)和流速，考察樣品在自然狀態(tài)下和附加磁場作用下流出方式的不同，從而判別樣品的磁定位性能的強(qiáng)弱。 原子吸收分光光度法的主要操作過程如下：取上述用樣品適量，加入 1mol/L 的 HCl 溶液定容后，以空白溶液為參比，測定吸收度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算鐵的含量。一般而言，磁性載體的粒子表面形態(tài)應(yīng)該圓整，平均粒徑按需要不同可控制在不同的水平，磁性納米粒最小可在 10nm 以下，粒徑分布范圍應(yīng)該較窄，粒度一般呈正態(tài)分布。由于需要在磁性微 球的表面結(jié)合上適當(dāng)?shù)目贵w，因此要求所用的磁性微球能通過其表面的化學(xué)基團(tuán)與單抗結(jié)合，或有較大的表面吸附力能與單抗牢固結(jié)合。以天然高分子材料為骨架的磁性微球多用此法制備。 磁性微球的制備 磁性微球可由磁性納米粒和高分子骨架材料制備而成。對磁性脂質(zhì)體的制備有兩種方法比較常用：即脂膜水化法（ lipid film hydration method）和反相蒸發(fā)法（ reverse phase evaporation method）。 8．熔融法：將磷脂、表面活性劑加少量水相溶解，膽固醇熔融后與之混合，然后滴入 65℃左右的水相溶液中保溫制得。 4．冷凍干燥法：將類脂高度分散在水溶液中，冷凍干燥，然后再分散到含藥的水性介質(zhì)中，形成脂質(zhì)體。磁性脂質(zhì)體就是在脂質(zhì)體中摻入一定數(shù)量、一定粒徑的磁性納米粒制成的脂質(zhì)體。而后可以采用高碘酸鈉氧化Dextran MNPs 和 CDM MNPs，然后與 ADR（阿霉素）藥物分子通過 Schiffs’反應(yīng)偶聯(lián)，制備 ADRCDM MNPs 和 ADRCDM MNPs，得到的載藥納米粒的平均直徑分別為 67nm 和 56nm。 2．熱固化法 [3] 載阿霉素磁性白蛋白納米粒是由阿霉素、磁性物質(zhì)（ Fe3O4）和白蛋白組成的平均粒徑為100nm~1000nm 的球形顆粒。 ③ 在整個(gè)療程中鐵磁 性物質(zhì)的用量，不能超過貧血病人的常規(guī)補(bǔ)鐵總量。 隨著納米科技的迅速發(fā)展，各種納米材料的研究日新月異，磁性納米粒的研究與應(yīng)用也是如此。其中磁性微球又包含磁性淀粉微球（ Magentic starch microspheres）、磁性白蛋白微球 (Magic albumin nanospheres)等 [1]，這些磁導(dǎo)向給藥系統(tǒng)可用于抗腫瘤等的靶向給藥 。 磁性納米粒和磁性納米載體的制備方法 磁性納米粒的制備 制備用于藥物載體的磁性納米粒應(yīng)考慮如下問題： ① 作為載體的骨架物質(zhì)在體內(nèi)能夠代謝，代謝產(chǎn)物無毒，并在一定時(shí)間內(nèi)經(jīng)皮膚、膽汁、腎等排出體外。 目前，制備磁性納米粒的方法很多，現(xiàn)就較常使用的方法列舉如下： 1．輻射聚合法 [2]： 利用前述制備的超細(xì)磁流體作為磁性介質(zhì)，采用輻射聚合法制備磁性納米粒。 將 Dextran T40 水溶液和含有 FeCl3? 6H2O 及 FeCl2? 4H2O 的水溶液混合均勻，攪拌下加入氨水溶液，加熱至 70℃反應(yīng) 1h。 ③ 接口聚合（ Interfacial polymerization method）：就是將藥物與氰基丙烯酸烷烴酯溶于乙醚中 ，在攪拌下慢慢滴入含有表面活性劑的水溶液中而制得。將其混懸液通過高壓乳勻機(jī)兩次，所得成品大多為單室脂質(zhì)體，少量為多室脂質(zhì)體，粒徑絕大多數(shù)在 2μ m 以下。然后減壓蒸發(fā)除去有機(jī) 溶劑，達(dá)到膠態(tài)后，滴加緩沖液，旋轉(zhuǎn)幫助器壁上的凝膠脫落，然后在減壓下繼續(xù)蒸發(fā)，制得水性混懸液，通過凝膠色譜法或超速離心法，除去未包封的藥物，即得到大單層脂質(zhì)體。 10．離心法：通過反相膠團(tuán)經(jīng)高速離心，從有機(jī)相、水透過接口而制得小單層脂質(zhì)體。 1995 年 Ekapop等人 [8]就利用了 Meito Sangyo 公司（ Nagoya， Japan）生產(chǎn)的表面經(jīng)右旋糖酐修飾的磁性納米粒（ dextran magite，核心直徑為 5nm~10nm）作為磁性介質(zhì)，以 DPPC 為主要的磷脂材料 溶解于異丙醚：氯仿（ 1:1）的有機(jī)溶劑中，采用反相蒸發(fā)法制備了平均粒徑為（ 177。 一步法發(fā)展較早，有很多種方法，如以下幾種： ① 將磁性納米粒（如四氧化三鐵納米粒等）分散于水中，加入高分子聚合物的單體，再加入引發(fā)劑，在適當(dāng)條件下引發(fā)聚合反應(yīng)，使單體在四氧化三鐵納米粒的周圍聚合形成磁性微球 [10]。用此方法可以制得一種包含丙烯酸樹脂的水性凝膠磁性微球。經(jīng)過表面處理的磁性微球與單抗在適當(dāng)?shù)木彌_液中培養(yǎng)，抗體通過物理吸附很快地與磁性微球結(jié)合，如果微球表面有活性基團(tuán)，則接下來就會通過較慢的化學(xué)反應(yīng)共價(jià)結(jié)合在磁性微球的表面。 可以采用經(jīng)典的基于亞鐵離子的菲啶測定法，主要操作過程如下：取上述用樣品（ ）用 的氯化羥胺溶液（ 10%）來還原三價(jià)鐵離子， 15 分鐘后加入 的菲啶溶液（ %）混勻，再用 的 NaOH 溶液（ 12mol/L）中和上述溶液，最后用 30%的枸櫞酸鈉溶液調(diào)節(jié)溶液 pH 到 ?？蓪悠贩湃氪艔?qiáng)計(jì)的樣品管中，在一定條件下測定磁性納米粒的磁滯回曲線，并自動打印出飽和磁場強(qiáng)度（ Ms）和剩磁（ Mr）的測定值。如取家兔腎臟，動脈血管接在蠕動泵的輸出端，靜脈血管接在乳膠管上，尿管扎緊，將腎臟置于磁場或無磁場中，觀察流出液中磁 236 性制劑的量，從而定性觀察，在離體器官水平制劑的磁導(dǎo)向定位性能。 組織分布試驗(yàn) 在自然狀態(tài)下小鼠靜脈注射樣品后，在不同時(shí)刻，分批處死，觀察各主要臟器（如心、肝、脾、肺、腎等）物理形態(tài)的變化情況，并測定藥物或磁性物質(zhì)的含量。 2．物理穩(wěn)定性 脂質(zhì)體屬于膠體分散體系，屬于熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，其物理穩(wěn)定性的研究主要包括以下幾方面： 237 脂質(zhì)體中藥物的滲漏率考察、凝聚速率的考察、相轉(zhuǎn)化溫度的測定、沉降分析等；還包括觀察脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)形態(tài)、粒徑大小分布在不同時(shí)間的變化情況，來了解脂質(zhì)體的穩(wěn)定程度。 磁性遞藥體系（ Magic delivery system）將藥物靶向的過程主要是通過血液作用于納米粒的力與磁場產(chǎn)生的磁力之間的競爭來完成的。這種給藥系統(tǒng)的特點(diǎn)在于可人為控制給藥部位，使藥物在靶部位蓄積并緩慢釋放，達(dá)到抑制腫瘤生長乃至消除腫瘤的效果；另一方面，減少非病變部位的藥量，從而減少了化療藥物對正常人體組織的破壞作 用。 小鼠 iv 給藥之后，在其左腎外加一個(gè)磁場（ 850mT，保持 10min），結(jié)果左腎的放射活性比作為對照的右腎高出 3 倍；另外有人 [19]制備了含吲哚美辛的聚甲基氰基丙烯酸甲酯的 NP，經(jīng)動脈脈或靜脈給大鼠注射后，在大鼠的尾部外加一個(gè)磁場，到注射給藥后 60min 時(shí)，在大鼠尾部的藥物濃度比對照高出 60 倍，不加磁場時(shí)，含吲哚美辛的聚甲基氰基丙烯酸甲酯 NP 在肝脾的濃度較高。結(jié)果在實(shí)驗(yàn)條件下動物對不同濃度的空白及載藥磁性納米粒未表現(xiàn)出任何毒副作用，也不能測定出 LD50 值，只有在非常高的劑量下，動物在一、二天內(nèi)表現(xiàn)出嗜睡。 值得注意的是近年來由于科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，腫瘤的治療方法也更為豐富，其中全身和局部加熱治療已成為腫瘤治療過程中繼手術(shù)和化療之后的第三個(gè)重要手段，研究表明，腫瘤對 40℃以上的溫度的耐受性很差。 臨床上使用較多的磁共振（ MR）對比劑是二乙二胺五醋酸釓（ GdDTPA），它能有效地提高磁共振成像的診斷水平。 SPIO 產(chǎn)品之間的差別主要表現(xiàn)在粒度大小的不同上面。 另一類是超微型超順磁性氧化鐵納米粒（ Ultrasmall superparamagic iron oxides， USPIOs）：最大直徑不超過30nm，如 Advanced