【正文】 劑增 強后均能檢出更多的病灶組織 [28]。腫瘤細胞也可攝入超順磁性氧化鐵納米粒，并且特征性地在腫瘤部位表現(xiàn)為 T1WI 信號增強，而 T2WI 信號降低，故可與其它良性肝臟腫瘤相區(qū)別。 USPIOs 由于血漿半衰期較長，而且 T1 效應(yīng)明顯，還可提供腫瘤的血管特性， 因此比 SPIOs 更有助于肝血管瘤的檢出和定性。 (3) 在肝磁共振血管成像（ MRA）中的應(yīng)用 有人對臨床疑診肝細胞癌的病人靜注 SHU 555A， 然后通過計算機重建得到了三維 MRA 影像，結(jié)果圖像上清楚地顯示了肝細胞癌、門脈及肝靜脈。 Stark等人 [27]給動物靜脈注射 3 種劑量的 SHU 555A，然后進行增強前后門脈系統(tǒng)成像的比較，實驗結(jié)果表明，靜注超順磁性氧化鐵納米粒明顯改善了門脈系統(tǒng)的顯示。 有人用三種劑量的 AMI227 在 16 例病人身上進行了臨床試驗。由于 AMI227 的血漿半衰期相對較長， AMI227 作為血池對比劑時，注射時間就變得不是那么重要了，這樣在實施時比較方便，也可減少時間的耽誤。 FeOBPA 是 一種直徑小于＜ 20nm 的新型 242 USPIOs 血池對比劑，比 AMI227 的 R2/R1 值更低， T1 效應(yīng)更強，可能更適用于 MRA。 作為理想的 MRA 對比劑，超順磁性氧化鐵納米粒應(yīng)該具有一個較長的血漿半衰期，使得在成像過程中血中的對比劑濃度盡量保持不變。從這個意義上講， USPIOs 可能更適合作 MRA 對比劑。 6．其它磁性納米載休在疾病診斷中的應(yīng)用 納米粒子包裹造影劑或γ放射性物質(zhì)（如放射性的碘、銦、锝等）已經(jīng)在對腫瘤和身體其它部位的定位中用作顯影劑。脂質(zhì)體作為一種藥物載體，在磁共振造影中應(yīng)用可以降低造影劑的毒性，并依其顆粒的大小將造影劑變成網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)造影劑或血池造影劑。 免疫磁性納米粒和免疫磁性微球在生物醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用 表面連接有特異性抗體的免疫磁性納米粒可應(yīng)用于清除骨髓中癌細胞；也可以作為雙重靶向藥物遞送系統(tǒng)應(yīng)用于人體，進一步提高靶向給藥的精度；此外在細胞器的分離、微生物的分離檢查、分子生物學(xué)移植耐受和生物體內(nèi)痕量物質(zhì)的分析方面得到越來越多的應(yīng)用。免疫磁性納米粒和免疫磁性微球的應(yīng)用有很多相似之處。 1．免疫磁性微球的性能與作用原理 免疫磁性微球主要用于細胞分離等方面。 用于細胞分離的免疫磁性微球應(yīng)具備以下條件：化學(xué)性能穩(wěn)定，不產(chǎn)生凝聚；不與細胞發(fā)生非特異性的結(jié)合；磁性微球與抗體的結(jié)合牢固；磁性微球的大小均勻，磁響應(yīng)性好，磁性納米粒的含量均勻一致；磁性微球大小適當(dāng)，不易被細胞所吞噬。直接法是指抗體直接連在磁性微球上，然后與靶細胞結(jié)合。使磁性微球間接地與靶細胞結(jié)合。間接法與直接法相比，除適用范圍廣外，還可以使用一組單克隆抗體，因而會獲得更好的細胞清除效果。 針對單核細胞的單克隆抗體的發(fā)展使得分離帶有特異表面標(biāo)記的細胞成為可能。這些技術(shù)都有各自的缺點。相對而言，免疫磁性微球具有操作簡便、分離迅速完全、細胞純度高等優(yōu)點，尤其在操作簡便省時方面，其它分離方法很難比擬。原理與免疫磁珠相似，只不過將抗原一抗體反應(yīng)換為 配體一配基反應(yīng)，可以稱作親和磁珠。解鏈、提取、雜交（用堿或升溫 ） 等都不會干擾DNA 和磁珠之間的連接。親和磁珠在分子生物學(xué)上的應(yīng)用可歸納于下面幾個方面 [31]。 Gabrielsen 等用親和磁珠 純化 DNA 結(jié)合蛋白（酪母轉(zhuǎn)錄因子 IIIC），通過磁性分離，洗滌和沉脫，可以得到高純蛋白，三次吸附過程僅用 1hr。優(yōu)點是不應(yīng)用可能發(fā)生堵塞的柱子，終體積和終濃度可以控制。這種方法特別適于自動化，可以很快地制備大量樣品，供應(yīng)給裝有加熱 /冷卻系統(tǒng)的 工作站進行測序。 (4) 固相克隆 應(yīng)用親和磁珠的固相克隆可以克隆任何片斷、任何位點，不需限制性內(nèi)切酶和連接酶，可以得到較高收率的重組片斷。 (5) 體外誘變 體外誘變有很多方法，大部分采用核苷酸介導(dǎo)的誘變，可以使 DNA 特定部位精確改變。這種誘變方法的優(yōu)越性是無論用否 PCR 均可得到相同的結(jié)果，考慮到 在克隆 PCR 產(chǎn)品時，累計聚合酶錯誤是一個必須注意的問題，這種用非 PCR 方法獲得 vector 的固相方法非常有吸引力。 3．免疫磁性微球在微生物學(xué)上的應(yīng)用 免疫磁珠在微生物學(xué)上也有廣泛的用途，通過免疫反應(yīng)結(jié)合于磁珠上的微生物通?？杀３只钚裕峁┙o適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)就可以大量擴增 [32]。在注入合適的培養(yǎng)基前可以進行洗滌，單抗和多抗都可以應(yīng)用。 結(jié)合于磁珠上的細菌可以直接在顯微鏡下進行分析，如對脆弱鏈泡囊菌、大腸桿菌 O157： H沙門氏菌等的檢測；也可以與其它檢測方法結(jié)合起來進行分析。兩種方法的全部檢測時間，包括制樣時間在內(nèi)不超過 26h。陽性率高于 ISO， IMSPlating， SalmonellaTek ELISA 等方法。 而越來越多的人將免疫磁珠技術(shù)與 PCR 結(jié)合起來，稱為 IMBPCR 技術(shù)。在應(yīng)用 PCR 前先用免疫磁珠進行處理就可以解決這個問題。對某些樣品來講，前處理可以增加靶生物的數(shù)量，從而提高 PCR 的靈敏度。應(yīng)用 IMBPCR 進行檢測的微生物包括：牙齦卟啉單孢菌、小腸結(jié)腸炎耶爾氏菌、沙門氏菌、幽門螺桿菌等。最近， Ludnerbrg 等人運用免疫磁珠設(shè)計了一種固相分析技術(shù)，通過比色來檢測 DNA，稱作固定型放大核酸檢測（ Dectection of Immobilized Amplified Nueleic Acid， DIAANA）。如果在靶區(qū)加入內(nèi)標(biāo)乳糖操縱子，然后同時擴增，即可進行定量分析。 Gatto 等用它來檢測各種生物毒素和細菌芽孢，分析 A 型肉毒桿菌毒素、霍亂β亞基、蓖麻毒素、葡萄球菌內(nèi)毒素 B 等的檢測限可達 fenmtogram（ 1015g）。 4．免疫磁性微球在自身骨髓移植中的應(yīng)用 在過去 l0 多年中，高劑量化療后給予自身骨髓移植（朋 MT）已經(jīng)成為某些患有急性白血病、何杰金氏病或非何杰金氏淋巴瘤（ NHL）、神經(jīng)母細胞瘤及 wilms 腫瘤的可選療法。但是，朋 MT 也有限制條件，那就是腫瘤轉(zhuǎn)移細胞有可能累及骨髓。體外凈化骨髓已發(fā)展起來多種方法。免疫磁性微球技術(shù)發(fā)展起來的原因之一，就是越來越多的證據(jù)表明，腫瘤細胞亞類可以排斥補體介導(dǎo)的細胞溶解反應(yīng)。自免疫磁性微球問世以來，至今已經(jīng)應(yīng)用于幾乎所有的需要進行骨髓凈化的癌癥類型。 (1) 用于清除神經(jīng)母細胞瘤細胞 IMMS 最早應(yīng)用于神經(jīng)母細胞瘤細胞 的清除。清除過程為：將磁性微球與 IgGl 族的 6 個單克隆抗體（ UJl3A、 、 、 、Thyl 和 H11）在 4℃、不斷振搖狀態(tài)下培養(yǎng) 30min，離心 l0min，用磷酸鹽緩沖液及 5％ PPF（ purified protein faction）洗滌除去所有沒有與細胞結(jié)合的抗體。 4℃、轉(zhuǎn)動狀態(tài)培養(yǎng) 2h 后，混合物放在傳送裝置上通過一系列的磁場。結(jié)果表明，在有核骨髓細胞中混有 1％的神經(jīng)母細胞瘤細胞（ cell line CHPl00） 時，用 IMMS可清除掉 ％的腫瘤細胞。集落分析證明， BFUE、 CFUC、 CFUGEM 和 CFUE 均無顯著降低。首先，將骨髓與 4 種單克隆抗體（ CDl0、CDl CD CD 22）一起培養(yǎng)，再與包有二抗的 磁性微球一起培養(yǎng)，最后通過分離裝置。清除后，單核細胞的恢復(fù)率分別為 56％和 40％， CFUGM 恢復(fù)率分別為 45％和 38％。 l 例 4 個月后復(fù)發(fā)，另 l 例在 5 個月后依然處于緩解期。 Combaret 等人建立了應(yīng)用免疫磁性微球凈化感染了 BMrkitt 淋巴瘤或神經(jīng)母細胞瘤的骨髓移植的模型系統(tǒng)。對123 例患神經(jīng)母細胞瘤的兒童病人在自身骨髓移植時應(yīng)用免疫磁性微球進行骨髓凈化，結(jié)果表明：該過程會導(dǎo)致單核細胞的顯著損失，但對骨髓造血細胞無毒。在 20 例病人中，應(yīng)用聯(lián)合免疫熒光法證明自身骨髓移植包含有能夠被免疫磁性微球清除的惡性細胞。 (3) 用于清除白血病細胞 KorblingLl 等人收集了 3 例復(fù)發(fā)的急性淋巴細胞白血病（ ALL）患者的骨髓，收集時間為二次緩解期的早期。移植前治療方案為全身照射（ TBl）（ ）和環(huán)磷酰胺（ CY）（ 50mg／ kg，每周 2 次，共 4 周）。三人在術(shù)后的無病存活期分別為 2 2 27 個月。 De Rosa 等人報告了 65 例急性白血病或 NHL 患者的 ABMT 結(jié)果。免疫磁性清除過程包括一次與三種單抗（ CDlO、 CDl CD22）的培養(yǎng)，兩次與磁性微球的培養(yǎng)。除過 Maphosphamide 凈化后血小板的恢復(fù)率較慢外，白細胞、中性白細胞及血小板在三組病人中的恢復(fù)速度均類似。 (4) 在其它腫瘤的骨髓凈化中的應(yīng)用 Ball、 Myklebust 等人將 IMMS 應(yīng)用于小細胞肺癌病人的自身骨髓移植。 (5) IMMS 與其它骨髓凈化方法的聯(lián)合使用 有多項研究表明，聯(lián)合應(yīng)用免疫磁性微球與化學(xué)分離法會比單一應(yīng)用任何一種技術(shù)更能有效地從骨髓中清除掉癌細胞，當(dāng)然，這對骨髓造血細胞的損傷也較大。結(jié)果表明，免疫磁性分離后運用 40μ g/mL 的 4HC 清除殘余的癌細胞可獲得 個對數(shù)級的癌細胞清除率。 5．免疫磁性微球在其它方面的應(yīng)用 (1) 異體骨髓移植時清除 T 細胞 自身骨髓移植時為防止移植物抗宿主反應(yīng)（ GVHD），需要從骨髓中有效地清除 T 細胞。用此方法清除了三個數(shù)量級的 T 細胞。應(yīng)用免疫磁性微球分離 T 細胞的還有 A1eixo 等人。 CottlerFox 等采用反相分離技術(shù)，即用聯(lián)有二抗的免疫磁珠和抗 CD3，CD4， CDl4， CDl6 的單克隆抗體清除掉所有非干細胞。正相分離干細胞的方法也受到重視。應(yīng)用免疫磁性微球分離造血干細胞的文獻非常多，如 Law， Silvestri，Nakamura， Bigas 等等。 Vartdal 等發(fā)展了基于免疫磁珠技術(shù)的 HLA 分型方法，結(jié)果表明，磁珠不影響后續(xù)的的微量細胞毒分祈。Hanen 和 Hannestad 更發(fā)展了應(yīng)用免疫磁珠的直接分型方法。 (4) 分離其它細胞 免疫磁珠在從血液中分離、定量、分型各細胞亞類方面的應(yīng)用與日 俱增。用免疫磁珠分離出 CD2+， CD4+， CD8+， CDl9+后用血球計數(shù)板測定形成花環(huán)的靶細胞數(shù)目，這種方法可用于臨床檢測 AIDS 病人的 T4 和 T8 的比例。 Egeland 等用聯(lián)有免疫復(fù)合物的 免疫磁珠從外周血中分離產(chǎn)生類風(fēng)濕因子的 B 淋巴細胞。分離后， B 細胞直接用 EpsteinBarr 病毒轉(zhuǎn)化，大量擴增，隨后檢測抗體的產(chǎn)生情況。從單一的抗原特異 B 淋巴細胞群開始可以增加克隆成功的機會并提高雜交后相關(guān)雜和體的幾率。其它的應(yīng)用還包括分離滋養(yǎng)層細胞、嗜酸性細胞、郎罕氏細胞、NK 細胞、內(nèi)皮細胞等 等。但是，許多平滑膜泡沒有密度差異，很難用此方法分開。這些細胞往往不易勻漿。在海得堡的歐洲分子生物實驗室（ EMBL）發(fā)展了一種應(yīng)用免疫磁珠分離細胞器的“磁性自由流式系統(tǒng)”（ Magic Free Flow System，MFFS），在整個分離和后續(xù)洗滌過程中，磁珠始終分散在整個稀釋懸 浮液中。這種方式可以避免對所要分離的膜泡的損傷，因為它省去了反復(fù)濃集和重新懸浮的的過程。他們用此方法進行了高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等的分離。 Vigano 發(fā)現(xiàn)，這種方法可以清除掉 50%的 IgA 標(biāo)記的精子，精子運動和完整性實驗證明磁珠對精子的性質(zhì)沒有影響。 (7) 用 IMBPCR 檢測循環(huán)系統(tǒng)中的癌細胞 血液是癌擴散的一個重要途徑，對血液中癌細胞的檢測可能成為臨床醫(yī)生預(yù)測癌癥復(fù)發(fā)、選擇更加合適的輔助治療方法的重要工具。首先用聯(lián)有抗上皮細胞抗體的免疫磁珠從血液中分離出癌細胞，用 PCRRFLP 檢測細胞 kras 基因的第 12 密碼子的突變情況。在隨后的臨床實驗中，用此方法對 27 例編碼突變病人的血液進行了檢測。其余 18 例中， 16 或 18人沒有復(fù)發(fā)（中期檢查： 16 月，范圍 742 月）。 Mass 等則用 IHBRTPCR 對人乳腺癌細胞中廣譜抗藥基因 l（ MDR1）的信使 RNA 水 平進行了檢測。目前已有人將 RNA、 DNA 這些遺傳基因包載在陽離子脂質(zhì)體中，并進行了臨床研究與評價，這為基因治療提供了新的途徑和方法。一般認為 [35]，采用脂質(zhì)體比利用病毒進行基因轉(zhuǎn)染具有以下優(yōu)點：①脂質(zhì)體與基因的復(fù)合過程比較容易；②脂質(zhì)體是非病毒性載體，與細胞膜融合將目的基因?qū)爰毎?，脂質(zhì)即被降解，無毒，無免 疫原性；③脂質(zhì)體攜帶的基因可能轉(zhuǎn)運到特定的部位；④轉(zhuǎn)染過程方便易行，重現(xiàn)性好等。磁導(dǎo)向脂質(zhì)體的應(yīng)用將提高基因傳遞的靶向性，從面提高轉(zhuǎn)染效率。但是天 冬酰胺酶在血液中容易被體內(nèi)的一些蛋白酶降解；同時這種外源性的酶會激發(fā)免疫反應(yīng)而產(chǎn)生抗體，也會導(dǎo)致酶的迅速清除，因此延長天冬酰胺酶在血液循環(huán)系統(tǒng)中的半衰期，使酶分子易于轉(zhuǎn)移至癌變的靶組織和降低其免疫原性，是這種療法的關(guān)鍵。另有報道含有 75%~80%鐵氧化物的超順磁性多糖納米粒子（ 200nm~400nm）與納米尺寸的二氧化硅相互作用，可以提高顆?；w的強度 ，它可以應(yīng)用于 DNA 自動提純，蛋白質(zhì)檢測、分離和提純，生物物料中逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測，內(nèi)病毒清除和雌性細胞分離等。 磁性納米載體是目前國內(nèi)外大力研究的一種新型靶向給藥系統(tǒng)，它的應(yīng)用前景十分廣泛。但目前能夠滿足上述要求的磁性藥物載體還不多，并且有關(guān)磁性介質(zhì)體內(nèi)蓄積、代謝、排泄等問題還尚待深入研究