【正文】 收集了 3 例復發(fā)的急性淋巴細胞白血?。?ALL）患者的骨髓，收集時間為二次緩解期的早期。免疫磁性處理過程為自身骨髓與連接在磁性微球上的一組單抗一起培養(yǎng)。移植前治療方案為全身照射（ TBl）（ ）和環(huán)磷酰胺（ CY）（ 50mg／ kg，每周 2 次，共 4 周）。自身骨髓移植后，在 3 例病人中都能觀測到血相重建。三人在術后的無病存活期分別為 2 2 27 個月。其中二人的無病存活期超過了先前的緩解期（ 20 月和 12 月）。 De Rosa 等人報告了 65 例急性白血病或 NHL 患者的 ABMT 結果。其中 ll 例應用 IMMS 進行骨髓凈化，3l 例用 Maphosphamide 進行骨髓凈化， 14 例沒有進行骨髓凈化。免疫磁性清除過程包括一次與三種單抗（ CDlO、 CDl CD22）的培養(yǎng)，兩次與磁性微球的培養(yǎng)。單核細胞與 CFUGH 在免疫磁性凈化后的恢復率分別為 40％和 45％，在 Maphosphamide 凈化后恢復率分別為 84％和 5％。除過 Maphosphamide 凈化后血小板的恢復率較慢外，白細胞、中性白細胞及血小板在三組病人中的恢復速度均類似。 246 Gruhn、 Trickettti 等人也對 IMMS 在急性淋巴細胞 性白血病中的應用進行了探討。 (4) 在其它腫瘤的骨髓凈化中的應用 Ball、 Myklebust 等人將 IMMS 應用于小細胞肺癌病人的自身骨髓移植。 Shpall、 Anderson 等人將 IMMS應用于乳腺癌病人的自身骨髓移植，對應用 IMMS 清除乳腺癌的最優(yōu)條件進行了探討。 (5) IMMS 與其它骨髓凈化方法的聯(lián)合使用 有多項研究表明，聯(lián)合應用免疫磁性微球與化學分離法會比單一應用任何一種技術更能有效地從骨髓中清除掉癌細胞，當然，這對骨髓造血細胞的損傷也較大。 Anderson 等人聯(lián)合應用免疫磁性微球 和化學分離法從正常骨髓中清除 CAMAl 乳腺癌細胞。結果表明，免疫磁性分離后運用 40μ g/mL 的 4HC 清除殘余的癌細胞可獲得 個對數(shù)級的癌細胞清除率。 免疫磁性微球用于骨髓中癌細胞的清除也有一些缺點，主要是在方法學、靶細胞種類、檢測方法的靈敏度等方面變異性較大，但仍不失為一種安全、簡便、有效的方法。 5．免疫磁性微球在其它方面的應用 (1) 異體骨髓移植時清除 T 細胞 自身骨髓移植時為防止移植物抗宿主反應（ GVHD），需要從骨髓中有效地清除 T 細胞。 Vartdal 等對直接 T 細胞清除法作了改進，磁珠 首先與羊抗鼠 IgG 相聯(lián)，然后再與抗 CD2 和 CD3 的單克隆抗體結合。用此方法清除了三個數(shù)量級的 T 細胞。 Champlin 等用免疫磁珠在異體骨髓移植前只清除其中的 CD8+細胞，結果發(fā)現(xiàn)既可以防止 GVHD，又保留了移植物抗白血病的能力。應用免疫磁性微球分離 T 細胞的還有 A1eixo 等人。 (2) 反相分離干細胞 直接移植骨髓干細胞是克服異體骨髓移植時 GVHD 和 ABMT 時癌癥復發(fā)的一種可能的選擇，但最大的困難是如何分離出純的造血干細胞。 CottlerFox 等采用反相分離技術，即用聯(lián)有二抗的免疫磁珠和抗 CD3，CD4， CDl4， CDl6 的單克隆抗體清除掉所有非干細胞。可以獲得不到 2％的細胞，但其中保留了所有原先存在的造血干細胞。正相分離干細胞的方法也受到重視。如 Smeland 等采用直接聯(lián)有抗 CD34+細胞的單克隆抗體的免疫磁珠來分離干細胞，分離后用抗 Fab 段血清將磁珠從細胞上洗脫下來，用此方法可以獲得 40%~70％的 CD34+細胞，純度可達 95％以上。應用免疫磁性微球分離造血干細胞的文獻非常多，如 Law， Silvestri，Nakamura， Bigas 等等。 (3) 組織分型 器官移植中的 HLAl 和 HLA2 組織分型一般采用微量細胞毒實驗，首先要采用密度離心法將細胞從外周血中分離出來，步驟煩瑣費時。 Vartdal 等發(fā)展了基于免疫磁珠技術的 HLA 分型方法，結果表明，磁珠不影響后續(xù)的的微量細胞毒分祈。 Lie 等發(fā)現(xiàn)用此方法也可進行血清的 BoLA 分型，并且明顯優(yōu)于傳統(tǒng)方法。Hanen 和 Hannestad 更發(fā)展了應用免疫磁珠的直接分型方法。在磁珠上連接抗人多態(tài)型 HLA 決定族，通過評價細胞和磁珠之間形成花環(huán)的程度來直接進行分型。 (4) 分離其它細胞 免疫磁珠在從血液中分離、定量、分型各細胞亞類方面的應用與日 俱增。 Brinchmann 等設計了一種快速、 247 直接從血中定量各個淋巴細胞亞類絕對數(shù)目的方法。用免疫磁珠分離出 CD2+， CD4+， CD8+， CDl9+后用血球計數(shù)板測定形成花環(huán)的靶細胞數(shù)目，這種方法可用于臨床檢測 AIDS 病人的 T4 和 T8 的比例。 Brinchmann同時應用免疫磁珠成功地從自然感染的 CD4+細胞中分離出了人類免疫缺陷病毒 (HIV)，并發(fā)現(xiàn)活化的 CD8+細胞對自然感染的 CD4+細胞中的 HIV 的復制有抑制作用，表明 CD84+細胞可以分泌一種可溶性的 HIV 復制抑制因子。 Egeland 等用聯(lián)有免疫復合物的 免疫磁珠從外周血中分離產(chǎn)生類風濕因子的 B 淋巴細胞。獲得了l04~l06 倍富集的特異性 B 細胞。分離后， B 細胞直接用 EpsteinBarr 病毒轉化，大量擴增，隨后檢測抗體的產(chǎn)生情況。這項技術可以用來生產(chǎn)人單克隆抗體。從單一的抗原特異 B 淋巴細胞群開始可以增加克隆成功的機會并提高雜交后相關雜和體的幾率。 Ossendorp 等用聯(lián)有 Thyroglobulin 的免疫磁珠來與 B 細胞雜交瘤系形成花環(huán)， Throglobulin 特異細胞濃集了 300 倍。其它的應用還包括分離滋養(yǎng)層細胞、嗜酸性細胞、郎罕氏細胞、NK 細胞、內皮細胞等 等。 (5) 分離細胞器 [34] 傳統(tǒng)上，分離細胞器都是基于細胞器大小和密度的差異，在細胞勻漿后應用密度梯度離心來實現(xiàn)的。但是，許多平滑膜泡沒有密度差異，很難用此方法分開。另外，許多新發(fā)展起來的細胞和分子生物學技術必須用體外培養(yǎng)的細胞。這些細胞往往不易勻漿。應用免疫磁珠技術則可避免這類缺陷。在海得堡的歐洲分子生物實驗室（ EMBL）發(fā)展了一種應用免疫磁珠分離細胞器的“磁性自由流式系統(tǒng)”（ Magic Free Flow System，MFFS），在整個分離和后續(xù)洗滌過程中，磁珠始終分散在整個稀釋懸 浮液中。調節(jié)磁場至一個合適的強度，使洗滌液自由流下的同時磁珠及其吸附物維持于瓶中。這種方式可以避免對所要分離的膜泡的損傷，因為它省去了反復濃集和重新懸浮的的過程。 EMBL 用一對簡單的抗原 /抗體模型對 MFFS 的條件進行了優(yōu)化，結果表明，它相對于傳統(tǒng)的分離方法具有收率高、非特異吸附少、對結合物損傷小等優(yōu)點。他們用此方法進行了高爾基體、內質網(wǎng)等的分離。 (6) 用免疫磁珠清除自身免疫型精子 Foresta、 Shulmand 等應用免疫磁性微球來清除自身免疫不育病患者精液中帶有自身抗體的精子，希望用凈化的精于 進行體外或體內受精來治療自身免疫不育癥。 Vigano 發(fā)現(xiàn)，這種方法可以清除掉 50%的 IgA 標記的精子，精子運動和完整性實驗證明磁珠對精子的性質沒有影響。 Ohashi 等則用免疫磁珠進行了分離頂體反應精于的嘗試。 (7) 用 IMBPCR 檢測循環(huán)系統(tǒng)中的癌細胞 血液是癌擴散的一個重要途徑，對血液中癌細胞的檢測可能成為臨床醫(yī)生預測癌癥復發(fā)、選擇更加合適的輔助治療方法的重要工具。 Hardingham 等發(fā)展了用 IMBPCR 來檢測血液中癌細胞的技術。首先用聯(lián)有抗上皮細胞抗體的免疫磁珠從血液中分離出癌細胞，用 PCRRFLP 檢測細胞 kras 基因的第 12 密碼子的突變情況?？梢灾貜偷貦z測出樣品中小于 10pg 的 DNA（ l cell）。在隨后的臨床實驗中，用此方法對 27 例編碼突變病人的血液進行了檢測。 9 例發(fā)現(xiàn)有癌細胞的病人中， 7 人因為復發(fā)或轉移而死亡。其余 18 例中， 16 或 18人沒有復發(fā)（中期檢查： 16 月，范圍 742 月）。 KaplanMeier 分析表明血液中 Kras 突變細胞的檢測結果與無病存活期顯著相關（ p）。 Mass 等則用 IHBRTPCR 對人乳腺癌細胞中廣譜抗藥基因 l（ MDR1）的信使 RNA 水 平進行了檢測。 248 磁性脂質體作為基因輸送的載體 隨著人類基因組計劃的初步完成，基因治療漸漸走進了臨床應用，使得基因的輸送變成了無法回避的問題。目前已有人將 RNA、 DNA 這些遺傳基因包載在陽離子脂質體中，并進行了臨床研究與評價，這為基因治療提供了新的途徑和方法。據(jù)報道 RNA 包入脂質體內的包封率可達 43%~60%。一般認為 [35]，采用脂質體比利用病毒進行基因轉染具有以下優(yōu)點：①脂質體與基因的復合過程比較容易；②脂質體是非病毒性載體，與細胞膜融合將目的基因導入細胞后，脂質即被降解，無毒，無免 疫原性；③脂質體攜帶的基因可能轉運到特定的部位；④轉染過程方便易行，重現(xiàn)性好等。并且與陰離子脂質體、 pH 敏感脂質體、免疫脂質體、融合脂質體相比，陽離子脂質體在基因治療中具有穩(wěn)定性好，貯存時間較長，轉染率較高以及能夠轉運復雜的大分子物質的特點等。磁導向脂質體的應用將提高基因傳遞的靶向性，從面提高轉染效率。 磁性納米粒的其它應用 磁性納米粒也可以用來固定化酶，例如已知大腸桿菌天冬酰胺酶對急性淋巴白血病有明顯療效，注射入體內后，可迅速清除血清中的天冬酰胺 — 敏感性腫瘤細胞的必需營養(yǎng)成分。但是天 冬酰胺酶在血液中容易被體內的一些蛋白酶降解；同時這種外源性的酶會激發(fā)免疫反應而產(chǎn)生抗體，也會導致酶的迅速清除，因此延長天冬酰胺酶在血液循環(huán)系統(tǒng)中的半衰期，使酶分子易于轉移至癌變的靶組織和降低其免疫原性，是這種療法的關鍵。徐慧顯等 [36]用葡聚糖磁性納米粒作為天冬酰胺酶的載體，使固定化天冬酰胺酶在制備過程中可用磁場分離；并能像自由酶那樣腹膜注射；有可能延長其載體循環(huán)中的半衰期。另有報道含有 75%~80%鐵氧化物的超順磁性多糖納米粒子（ 200nm~400nm）與納米尺寸的二氧化硅相互作用，可以提高顆?；w的強度 ，它可以應用于 DNA 自動提純，蛋白質檢測、分離和提純，生物物料中逆轉錄病毒檢測，內病毒清除和雌性細胞分離等。磁性納米粒還是目前國內外高分子材料研究領域的熱門方向之一。 磁性納米載體是目前國內外大力研究的一種新型靶向給藥系統(tǒng)，它的應用前景十分廣泛。理論上，理想的磁性藥物載體應該具備以下幾個條件：具有較好的磁場響應性，在靶部位置外磁場后，載體能夠 100%地滯留在靶部位；粒徑足夠小能夠自由通過最小內徑的毛細血管，不會發(fā)生異位栓塞和滯留；不被網(wǎng)狀內皮系統(tǒng)和其它正常細胞攝取或吞噬；藥物載體具有較高的載藥能力，并可以 進入靶細胞內，并達到藥物的控釋。但目前能夠滿足上述要求的磁性藥物載體還不多，并且有關磁性介質體內蓄積、代謝、排泄等問題還尚待深入研究。 參考文獻 1 Gregoriadis G, Senior J, Trouet A. Targeting of Drugs. New York : Plenum Press, 1982 2 張津輝，蔣中華，王仁芝，陳惠鵬．磁性微球的制備、理化性質及初步應用．化學通報， 1997，9： 55~57 249 3 張陽德，彭 ?。d阿霉素磁性白蛋白納米粒 —— 種高效靶向抗腫瘤系統(tǒng)．中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志，2022， 11（ 3）： 39~42 4 石可瑜，李朝興，何炳林．磁導向阿霉素 —— 羧甲基葡聚糖磁性納米粒的研究．生物醫(yī)學工程學雜志， 2022， 17（ 1）： 21~24 5 常 津．具有復合靶向抗癌功能的納米高分子材料 —— 阿霉素免疫磁性納米粒的制備及體外試驗．中國生物醫(yī)學工程學報， 1996， 15（ 2）： 97~101 6 奚念珠主編．藥劑學（第三版）．北京：人民衛(wèi)生出版社， P372 7 Kiwada H, Sato J, Yamada S, et al. Feasibility of magic lipsomes as a targeting device for drugs. Chem. Pharm. Bull., 1986, 34(10): 4253~4258 8 Viroonchatapan E, Ueno M, Sato H, et al. Preparation and characterization of dextran magiteincorporated thermosensitive liposomes: an online flow system of quantifying magic responsiveness. Pharm. Res., 1995, 12(8): 1176~1183 9 Viroonchatapan E, Sato H, Ueno M, et al. Magic targeting of thermosensitive magoliposomes to mouse tumors in an in situ online perfusion system. Life Sciences, 1996, 158(24): 2251~2261 10 Margel S, Kreuter J. Polyacrolein microspheres as a new tool