【正文】 PolyA+mRNA，分離后的 mRNA 可以用洗脫液或加熱的方法解離下來。已經(jīng)應用于巨細胞病毒、沙眼衣原體、惡性瘧原蟲、 HIVl 型病毒，人類基因等。 Hultman 等描述了一種運用磁性分離技術的體外誘變方法。過程一般是將免疫磁珠與樣品混合，培養(yǎng) l0min~30min，外加磁場提取結合 244 有活微生物的磁珠。 Cudjoe 等首先用免疫磁珠分離出培養(yǎng)基和臨床樣品中的毒素， 然后在免疫磁珠上直接用 ELISA（ IMBELISA）進行檢測，他建立了用 IMB隊 ISA 檢測食物中的沙門氏桿菌的系統(tǒng)，對于熱處理后的熟食品，增菌后的培養(yǎng)基中僅含微量競爭性腸道菌群，濃縮后可直接用 IMBPCR 進行檢測；對于未經(jīng)過熱加工的生食品，其中含有較多的競爭微生物，要先用免疫磁珠進行分離，然后在 M培養(yǎng)基中短時增菌，濃縮，最后用 IMBELISA 檢測。 Ben 等則對用 IMBELISA 分離檢測食品中的大腸桿菌 O157 進行了評價。在將樣品中的細菌濃集至合適體積的同時也除掉了非特異的 Taq 酶抑制因子。 Grindede 等則將免疫磁珠和反轉(zhuǎn)錄 PCR(RTPCR)結合起來用以檢測環(huán)境樣品中的 A 型反轉(zhuǎn)錄病毒。 最近，市場上出現(xiàn)了一種將免疫磁珠和電化學發(fā)光傳感器（ IMBECL）結合起來的自動檢測系統(tǒng) ORIGEN，首先用免疫磁珠捕獲靶物質(zhì)，再用夾心的方法聯(lián)上釕的三（二吡啶）螯和物 [Ru(bpy) 3]2+標記的 reporter 抗體，用磁場濃集后用電壓激發(fā)出電化學發(fā)光。最近，朋 MT 用于小細胞肺癌、睪丸癌和乳腺癌也取得了令人鼓舞的結果。其中，運用免疫磁性微球物理 地清除癌細胞的方法具有安全、效果好、操作簡便的特點，得到廣泛應用。如神經(jīng)母細胞瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤、小細胞肺癌、乳腺癌等 [33]。然后加入預先和羊抗鼠免疫球蛋白培養(yǎng)過的磁性微球。而對正常細胞的損害極小，通過分離裝置后，細胞的活性超過了 98％。微球與靶細胞比例為 50:1。實驗證明，應用免疫磁性微球在自身骨髓移植前清除癌細胞是一種安全、簡單、可重復的技術。病人表現(xiàn)出嚴重的 T 細胞缺陷，在移植后一年內(nèi)不能檢測出 IL2 的分泌，但 NK 細胞的功能在移植后一個月正常，在第二和第三個月甚至超出一般水平。免疫磁性處理過程為自身骨髓與連接在磁性微球上的一組單抗一起培養(yǎng)。其中二人的無病存活期超過了先前的緩解期（ 20 月和 12 月）。單核細胞與 CFUGH 在免疫磁性凈化后的恢復率分別為 40％和 45％，在 Maphosphamide 凈化后恢復率分別為 84％和 5％。 Shpall、 Anderson 等人將 IMMS應用于乳腺癌病人的自身骨髓移植，對應用 IMMS 清除乳腺癌的最優(yōu)條件進行了探討。 免疫磁性微球用于骨髓中癌細胞的清除也有一些缺點，主要是在方法學、靶細胞種類、檢測方法的靈敏度等方面變異性較大，但仍不失為一種安全、簡便、有效的方法。 Champlin 等用免疫磁珠在異體骨髓移植前只清除其中的 CD8+細胞，結果發(fā)現(xiàn)既可以防止 GVHD，又保留了移植物抗白血病的能力?？梢垣@得不到 2％的細胞，但其中保留了所有原先存在的造血干細胞。 (3) 組織分型 器官移植中的 HLAl 和 HLA2 組織分型一般采用微量細胞毒實驗，首先要采用密度離心法將細胞從外周血中分離出來，步驟煩瑣費時。在磁珠上連接抗人多態(tài)型 HLA 決定族，通過評價細胞和磁珠之間形成花環(huán)的程度來直接進行分型。 Brinchmann同時應用免疫磁珠成功地從自然感染的 CD4+細胞中分離出了人類免疫缺陷病毒 (HIV)，并發(fā)現(xiàn)活化的 CD8+細胞對自然感染的 CD4+細胞中的 HIV 的復制有抑制作用，表明 CD84+細胞可以分泌一種可溶性的 HIV 復制抑制因子。這項技術可以用來生產(chǎn)人單克隆抗體。 (5) 分離細胞器 [34] 傳統(tǒng)上，分離細胞器都是基于細胞器大小和密度的差異，在細胞勻漿后應用密度梯度離心來實現(xiàn)的。應用免疫磁珠技術則可避免這類缺陷。 EMBL 用一對簡單的抗原 /抗體模型對 MFFS 的條件進行了優(yōu)化，結果表明，它相對于傳統(tǒng)的分離方法具有收率高、非特異吸附少、對結合物損傷小等優(yōu)點。 Ohashi 等則用免疫磁珠進行了分離頂體反應精于的嘗試。可以重復地檢測出樣品中小于 10pg 的 DNA（ l cell）。 KaplanMeier 分析表明血液中 Kras 突變細胞的檢測結果與無病存活期顯著相關（ p）。據(jù)報道 RNA 包入脂質(zhì)體內(nèi)的包封率可達 43%~60%。 磁性納米粒的其它應用 磁性納米粒也可以用來固定化酶，例如已知大腸桿菌天冬酰胺酶對急性淋巴白血病有明顯療效，注射入體內(nèi)后，可迅速清除血清中的天冬酰胺 — 敏感性腫瘤細胞的必需營養(yǎng)成分。磁性納米粒還是目前國內(nèi)外高分子材料研究領域的熱門方向之一。 參考文獻 1 Gregoriadis G, Senior J, Trouet A. Targeting of Drugs. New York : Plenum Press, 1982 2 張津輝，蔣中華，王仁芝，陳惠鵬．磁性微球的制備、理化性質(zhì)及初步應用．化學通報， 1997，9： 55~57 249 3 張陽德，彭 健．載阿霉素磁性白蛋白納米粒 —— 種高效靶向抗腫瘤系統(tǒng)．中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志，2022， 11（ 3）： 39~42 4 石可瑜，李朝興，何炳林．磁導向阿霉素 —— 羧甲基葡聚糖磁性納米粒的研究．生物醫(yī)學工程學雜志， 2022， 17（ 1）： 21~24 5 常 津．具有復合靶向抗癌功能的納米高分子材料 —— 阿霉素免疫磁性納米粒的制備及體外試驗．中國生物醫(yī)學工程學報， 1996， 15（ 2）： 97~101 6 奚念珠主編．藥劑學（第三版）．北京：人民衛(wèi)生出版社， P372 7 Kiwada H, Sato J, Yamada S, et al. Feasibility of magic lipsomes as a targeting device for drugs. Chem. Pharm. Bull., 1986, 34(10): 4253~4258 8 Viroonchatapan E, Ueno M, Sato H, et al. Preparation and characterization of dextran magiteincorporated thermosensitive liposomes: an online flow system of quantifying magic responsiveness. Pharm. Res., 1995, 12(8): 1176~1183 9 Viroonchatapan E, Sato H, Ueno M, et al. Magic targeting of thermosensitive magoliposomes to mouse tumors in an in situ online perfusion system. Life Sciences, 1996, 158(24): 2251~2261 10 Margel S, Kreuter J. Polyacrolein microspheres as a new tool in 。理論上，理想的磁性藥物載體應該具備以下幾個條件：具有較好的磁場響應性，在靶部位置外磁場后，載體能夠 100%地滯留在靶部位；粒徑足夠小能夠自由通過最小內(nèi)徑的毛細血管，不會發(fā)生異位栓塞和滯留；不被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)和其它正常細胞攝取或吞噬；藥物載體具有較高的載藥能力，并可以 進入靶細胞內(nèi)，并達到藥物的控釋。徐慧顯等 [36]用葡聚糖磁性納米粒作為天冬酰胺酶的載體，使固定化天冬酰胺酶在制備過程中可用磁場分離；并能像自由酶那樣腹膜注射；有可能延長其載體循環(huán)中的半衰期。并且與陰離子脂質(zhì)體、 pH 敏感脂質(zhì)體、免疫脂質(zhì)體、融合脂質(zhì)體相比，陽離子脂質(zhì)體在基因治療中具有穩(wěn)定性好，貯存時間較長，轉(zhuǎn)染率較高以及能夠轉(zhuǎn)運復雜的大分子物質(zhì)的特點等。 248 磁性脂質(zhì)體作為基因輸送的載體 隨著人類基因組計劃的初步完成，基因治療漸漸走進了臨床應用，使得基因的輸送變成了無法回避的問題。 9 例發(fā)現(xiàn)有癌細胞的病人中， 7 人因為復發(fā)或轉(zhuǎn)移而死亡。 Hardingham 等發(fā)展了用 IMBPCR 來檢測血液中癌細胞的技術。 (6) 用免疫磁珠清除自身免疫型精子 Foresta、 Shulmand 等應用免疫磁性微球來清除自身免疫不育病患者精液中帶有自身抗體的精子，希望用凈化的精于 進行體外或體內(nèi)受精來治療自身免疫不育癥。調(diào)節(jié)磁場至一個合適的強度，使洗滌液自由流下的同時磁珠及其吸附物維持于瓶中。另外，許多新發(fā)展起來的細胞和分子生物學技術必須用體外培養(yǎng)的細胞。 Ossendorp 等用聯(lián)有 Thyroglobulin 的免疫磁珠來與 B 細胞雜交瘤系形成花環(huán)， Throglobulin 特異細胞濃集了 300 倍。獲得了l04~l06 倍富集的特異性 B 細胞。 Brinchmann 等設計了一種快速、 247 直接從血中定量各個淋巴細胞亞類絕對數(shù)目的方法。 Lie 等發(fā)現(xiàn)用此方法也可進行血清的 BoLA 分型，并且明顯優(yōu)于傳統(tǒng)方法。如 Smeland 等采用直接聯(lián)有抗 CD34+細胞的單克隆抗體的免疫磁珠來分離干細胞，分離后用抗 Fab 段血清將磁珠從細胞上洗脫下來，用此方法可以獲得 40%~70％的 CD34+細胞，純度可達 95％以上。 (2) 反相分離干細胞 直接移植骨髓干細胞是克服異體骨髓移植時 GVHD 和 ABMT 時癌癥復發(fā)的一種可能的選擇，但最大的困難是如何分離出純的造血干細胞。 Vartdal 等對直接 T 細胞清除法作了改進，磁珠 首先與羊抗鼠 IgG 相聯(lián)，然后再與抗 CD2 和 CD3 的單克隆抗體結合。 Anderson 等人聯(lián)合應用免疫磁性微球 和化學分離法從正常骨髓中清除 CAMAl 乳腺癌細胞。 246 Gruhn、 Trickettti 等人也對 IMMS 在急性淋巴細胞 性白血病中的應用進行了探討。其中 ll 例應用 IMMS 進行骨髓凈化，3l 例用 Maphosphamide 進行骨髓凈化， 14 例沒有進行骨髓凈化。自身骨髓移植后，在 3 例病人中都能觀測到血相重建。 Ogniben 等人對 IMMS 在 NHL 病人自身骨髓移植中的應用也作了研究。能夠可重現(xiàn)地清除 3~4 個對數(shù)級的惡性細胞，此結果與應用 Burkitt 淋巴瘤的補體溶 解方法所得類似。兩例病人移植順利并無并發(fā)癥。 (2) 用于清除淋巴瘤細胞 De Rosa 等人將 IMMS 應用于 2 例淋巴瘤病人的自身骨髓移植。則神經(jīng)母細 胞瘤細胞被滯留，“干凈”的骨髓自然流下。 1984 年， Treleaven 等人建立了運用 IMMS 從骨髓中清除癌細胞的模型系統(tǒng)。而 IMMS 凈化骨髓不需要特異的 ISOTYPE 抗體，也不受正常骨髓中抗補體因子的影響，可以清除低水平抗 245 原表達的腫瘤細胞。因此，在體外清除骨髓中的癌細胞是保證 ABMT 成功的必要條件。分析碳疽桿菌芽孢時，可檢測到 l00 個芽孢。運用這種技術可以省略去通常為排除背景干擾所要 進行的電泳、內(nèi)切酶譜、雜交等步驟。另外，凍存過的樣品中可能包含死菌，不適合 培養(yǎng)，而應用 PCR 則可以很好地進行檢測。影響 PCR 直接應用于臨床診斷的一個因素是樣品，如糞便和血液中的某些成分會影響 Taq 酶的靈敏度。最低檢測限可達 l05/mL 樣品。免疫磁 珠技術有很多優(yōu)點：將靶細菌從環(huán)境中分離出來，從很大的體積濃集至適于培養(yǎng)的體積；將樣品中的生長抑制因子從細菌中清除去，有利于細菌的生長；當樣品中既有病原菌，又有大量非致病性變種時，選擇性培養(yǎng)基在分離靶生物時經(jīng)常無能為力，而免疫磁珠在選擇性分離擁有與致病力有關的特異抗原決定族的菌種方面具有很大的潛力。另外，磁珠還用于單鏈 DNA 探針的標記和 genomic Walking 等。用此方法從人染色體克隆人類阿樸脂蛋白 E 基因片斷，可以獲得 90％以上的正確重組體。 (3) DNA 序列分析 將親和磁珠和 PCR 結合起來可以進行 DNA 測序。 (1) 純化 DNA 結合蛋白 連接有特異核苷酸序列的親和磁珠與樣品反應，提取出結合蛋白，再加入高鹽溶液就可以將純化蛋白洗脫下來，磁珠可以反復使用。親和素一生物素之間的結合力非常強（ Kd＝ l015），有利于操作。 FACS 價格昂貴，技術復雜，經(jīng)常會被所分選細胞的容量、活性、無菌度等問題所困擾；紅細胞花 環(huán)技術無法處理大量的細胞，另外，至今尚無一成熟、簡便的方法能夠?qū)⒖贵w偶聯(lián)至紅細胞膜上； Panning 技術也有很多局限性，它難于放大操作，步驟煩瑣，不能定量，靶細胞經(jīng)?；祀s著非特異吸附在培養(yǎng)板底部的其它細胞。但要經(jīng)過多次的洗滌步驟，特異性也會有所降低。間接法是指先將細胞與特異抗體混合培養(yǎng)，使特異抗體結合在細胞表面，然后加入預先用抗鼠IgG（二抗）處理的磁性微球。由于它能特異性地與靶物質(zhì)結合并使之具有磁響應性，因此將免疫磁性微球與含有靶物質(zhì)（欲分離的物質(zhì)）的復雜混合物共同培養(yǎng)，則免疫磁性微球可以通過抗原抗體反應選擇性地與靶物質(zhì)結合，當此混合物通過一個磁場裝置時，與免疫磁性微球結合的靶物質(zhì)就會被磁場滯留，從而與其它復雜 物質(zhì)分離開來。 另外，用磁性納米粒制備的免疫磁性微球 在生物醫(yī)藥方面的應用也非常廣泛，而且發(fā)展較快，國外已有產(chǎn)品上市。其中磁性脂質(zhì)體較早地應用