【正文】 脂等膜材溶于有機(jī)溶劑如氯仿、乙醚等，加入待包封藥物的水溶液進(jìn)行短時(shí)超聲，直至形成穩(wěn)定的 W/O 型乳劑。此法適合于包裹水溶性藥物、大分子生物活性物質(zhì)。 8．熔融法：將磷脂、表面活性劑加少量水相溶解，膽固醇熔融后與之混合，然后滴入 65℃左右的水相溶液中保溫制得。 9．表面活性劑處理法：脂質(zhì)薄膜、多層脂質(zhì)體或單層脂質(zhì)體與膽酸鹽、脫氧膽酸鹽等表面活性劑混合，通過(guò)離心法或凝膠過(guò)濾法或透析法除去表面活性劑，就可獲得中等大小的單層脂質(zhì)體。另外，本法通過(guò)控制除去表面活性劑的操作條件，可以改變粒徑， 233 并可獲得高度均一粒徑的脂質(zhì)體。當(dāng)反相膠團(tuán)經(jīng)過(guò)接口時(shí)，就披上第二層類(lèi)脂外衣形成雙層膜。對(duì)磁性脂質(zhì)體的制備有兩種方法比較常用：即脂膜水化法（ lipid film hydration method）和反相蒸發(fā)法（ reverse phase evaporation method）。將卵磷脂和α 維生素 E（ tocopherol）適量溶解于氯仿中，而 Fe3O4 納米粒則混懸于甲醇中，同時(shí)加入 14C膽固醇作為內(nèi)標(biāo)物，將上述體系混合超聲分散，除去有機(jī)溶劑后形成含有 Fe3O4 納米材料的脂質(zhì)薄膜，而后加入含有 3H菊粉（ inulin）的 PBS 水化脂質(zhì)膜，經(jīng)柱分離得到了平均粒徑為 m的磁性脂質(zhì)體。 由于前述磁性介質(zhì)引入方法的改進(jìn)，磁性納米脂質(zhì)體的制備工藝有了較大的提高。 ） μ m 的溫敏磁性脂質(zhì)體，并且對(duì)其體內(nèi)主動(dòng)靶向性進(jìn)行了深入的考察 [9]。 磁性微球的制備 磁性微球可由磁性納米粒和高分子骨架材料制備而成。有天然的也有合成的，可以單獨(dú)應(yīng)用也可以合用作骨架材料。 制備磁性微球的方法可分為一步法和二步法：一步法是在成球前即加入磁性納米粒，成球時(shí)聚合物將其包裹于其中；二步法是先制備非磁性小球，然后通過(guò)處理使磁性材料進(jìn)入其中 , 最后磁性納米粒以分散的形式存在于微球的骨架材料中。合成高分子 材料作為骨架的磁性微球多用此法制備。以天然高分子材料為骨架的磁性微球多用此法制備。所制硅烷磁性微球可以分散在水性介質(zhì)中，而不會(huì)快速沉淀，可用磁場(chǎng)方便地進(jìn)行回收。 234 聚合反應(yīng)是由從磁鐵礦顆粒中擴(kuò)散出來(lái)并通過(guò)對(duì)過(guò)硫酸的還原而成為自由基的鐵離子引發(fā)的。 二步法文獻(xiàn)較少。由于需要在磁性微 球的表面結(jié)合上適當(dāng)?shù)目贵w，因此要求所用的磁性微球能通過(guò)其表面的化學(xué)基團(tuán)與單抗結(jié)合，或有較大的表面吸附力能與單抗牢固結(jié)合。 微球與抗體的連接有吸附結(jié)合與共價(jià)結(jié)合兩種形式，吸附結(jié)合依靠微球表面對(duì)抗體的非特異吸附力，而共價(jià)結(jié)合依靠微球表面的活性基團(tuán)與抗體共價(jià)反應(yīng)。這樣，對(duì)于表面比較平整的微球，就要通過(guò)對(duì)其表面進(jìn)行處理來(lái)提高它的抗體結(jié)合力，以保證 IMMS表面有足夠量的抗 體 [12]。 磁性納米粒或磁性脂質(zhì)體也可以繼續(xù)在其表面通過(guò)氧化還原等方法或者通過(guò)簡(jiǎn)單的吸咐等制備成免疫磁性納米?；蛞呙獯判灾|(zhì)體。一般而言，磁性載體的粒子表面形態(tài)應(yīng)該圓整，平均粒徑按需要不同可控制在不同的水平，磁性納米粒最小可在 10nm 以下，粒徑分布范圍應(yīng)該較窄，粒度一般呈正態(tài)分布。 一般理化特性的檢測(cè) 可采用 U 型管電泳法測(cè)定樣品表面動(dòng)電位；按照最大泡壓法測(cè)定樣品表面張力；在一定波長(zhǎng)處測(cè)定樣品溶液的吸收度，從 而判定樣品的濁度，后者可在一定程度上反映納米材料的分散性；采用烏氏粘度計(jì)或轉(zhuǎn)筒粘度計(jì)等裝置測(cè)定樣品的粘度；使用阿貝折射儀測(cè)定折射率；采用比重天平儀測(cè)定樣品溶液的密度；使用酸度計(jì)測(cè)定樣品的 pH 值，等等。磁性納米粒一般要經(jīng)過(guò)預(yù)處理，如磁性脂質(zhì)體要先用適量的 Triton 溶液（ 5%）破壞脂質(zhì)體，釋放出磁性 235 物質(zhì)，用濃鹽酸將 Fe3O4 離子化后再進(jìn)行操作；由高分子材料制備的磁性納米粒則要經(jīng)高溫處理，如將磁 性納米粒放在坩堝中，于煤氣燈上加蓋灼燒 30min，再置于馬弗爐中于 600℃下灼燒 2h，冷卻后加 的 6mol/L 鹽酸溶液，微熱使充分溶解后備用。將上述溶液體積調(diào)節(jié)到 10mL，于 509nm 下測(cè)定樣品液 的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算，從而確定鐵的含量。 原子吸收分光光度法的主要操作過(guò)程如下：取上述用樣品適量，加入 1mol/L 的 HCl 溶液定容后，以空白溶液為參比，測(cè)定吸收度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算鐵的含量。 質(zhì)量磁化率和磁化強(qiáng)度 采用法拉第天平測(cè)定樣品的質(zhì)量磁化率（ Xm） ,結(jié)果應(yīng)該符合實(shí)驗(yàn)要求。一般用磁強(qiáng)計(jì)進(jìn)行測(cè)定。一般磁性納米粒的含鐵量越高，磁響應(yīng)性（可用飽和磁場(chǎng)強(qiáng)度表示）越強(qiáng)，剩磁也越大。 導(dǎo)向定位裝置還可以根據(jù)試驗(yàn)要求自行設(shè)計(jì)，選擇合適的介質(zhì)和流速，考察樣品在自然狀態(tài)下和附加磁場(chǎng)作用下流出方式的不同，從而判別樣品的磁定位性能的強(qiáng)弱。如采用蠕動(dòng)泵控制流速（ 3L/h），使制劑通過(guò)平行多口裝置，相鄰的出口距離為 2cm，一側(cè)靠近一個(gè)一定強(qiáng)度的磁場(chǎng)，分別收集在磁場(chǎng)作用下每個(gè)出口吸附及未吸附制劑的量，干燥后稱(chēng)重。 還可以采用離體腎模型磁定位實(shí)驗(yàn)來(lái)考察制劑的磁導(dǎo)向定位性能。 2．體內(nèi)磁導(dǎo)向定位 可選擇小鼠或家兔為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采用對(duì)稱(chēng)器官對(duì)比試驗(yàn)的方法，考察在自 然狀態(tài)下和附加磁場(chǎng)時(shí)樣品的聚集情況。石可瑜等 [4]選擇小鼠腎臟作為磁定位器官，將小鼠固定，左腎置于外加磁場(chǎng)中，尾靜脈注射阿霉素 羧甲基葡聚糖磁性納米粒。 X 衍射測(cè)定 用 X 衍射測(cè)定儀可以分析磁性納米粒的結(jié)構(gòu)，判定磁性物質(zhì)的類(lèi)型等。此方法可用于對(duì)不同條件和手段所制備的磁性納米粒的結(jié)構(gòu)類(lèi)型進(jìn)行分析。這些資料將作為判斷樣品毒性的重要依據(jù)。結(jié)果應(yīng)該滿(mǎn)足試驗(yàn)設(shè)計(jì)或生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)的要求。一般包括化學(xué)穩(wěn)定性、物理穩(wěn)定性和生物學(xué)穩(wěn)定性三方面。在這里面要考慮溫度、脂質(zhì)體類(lèi)型、抗氧劑、金屬離子、輻射和電離輻射等因素對(duì)氧化反應(yīng)的影響，以及脂質(zhì)體膜材的水解反應(yīng)。 3．在血漿中的穩(wěn)定性 含藥脂質(zhì)體進(jìn)入血循環(huán)達(dá) 到靶部位之前，必須保持完整形態(tài)。 其它方面 對(duì)于具有不同特性的磁性納米粒還要進(jìn)行其它方面的質(zhì)量評(píng)價(jià)。 磁性納米載體在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用 作為抗癌藥物載體的應(yīng)用 通常而言，治療物質(zhì)都普遍存在毒副作用，而抗 腫瘤藥物則更是存在嚴(yán)重的全身毒副作用，因而長(zhǎng)期以來(lái)人們就期望能夠?qū)⒅委熚镔|(zhì)特異性的遞送到特定的病變組織或器官，實(shí)現(xiàn)局部病變（ Local diseases）局部治療（ Local therapy）的目的。經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的研究，科學(xué)家們提供了許多種方法來(lái)實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)，其中磁導(dǎo)向給藥系統(tǒng)就占有了很大比重 。當(dāng)磁力大于動(dòng)脈（ 10cm/s）或毛細(xì)管（ ）的線(xiàn)性血流速率時(shí)，磁性載體（ ＜ 1μ m＝ 被截留在靶部位，并可能被靶組織的內(nèi)皮細(xì)胞吞噬。一般當(dāng)磁性物質(zhì)的直徑為 10nm~30nm 時(shí)，就具有較好的靶向定位作用。其中磁性微球可以看作是由磁性納米粒與高分子骨架材料制備而成，而且作為抗癌藥物的載體研究較多 [1316]。磁性納米粒對(duì)治療離表皮較近的癌癥如乳腺癌、食管癌、膀胱癌、皮膚癌等已經(jīng)表現(xiàn)出了較大的優(yōu)勢(shì)。 一般認(rèn)為磁性納米粒作為抗腫瘤藥物的載體，至少發(fā)揮了以下作用： ① 由于納米粒在磁場(chǎng)的作用下被磁化而相互聚集，引起腫瘤組織的血管栓塞，造成腫瘤組織缺血、缺氧，對(duì)化療藥物敏感性增加；② 部分未發(fā)生聚集的納米粒進(jìn)入腫瘤組織間隙或被腫瘤細(xì)胞攝取，從而在細(xì)胞間隙活細(xì)胞內(nèi)釋放化療藥物； ③ 良好的磁靶向性以及腫瘤組織與正常組織結(jié)構(gòu)上的差別，使納米?？蛇x擇性地聚集于腫瘤組 238 織，大大提高了治療部位藥物的水平。 影響磁性納米粒在靶部位滯留和藥物靶向輸送效果的因素很多，如磁性載體的大小、釋藥速率、磁場(chǎng)強(qiáng)度、磁場(chǎng)梯度和磁場(chǎng)使用時(shí)間、腫瘤部位的血管分布、通過(guò)性、腫瘤部位離磁場(chǎng)的距離等等。 磁性納米粒可以用于載藥磁性納米?；蜉d藥磁性脂質(zhì)體的制備。磁性納米粒的加入未增加 NP 的毒性。這些研究結(jié)果充分表明，磁性介導(dǎo)的納米給藥系統(tǒng)可使藥物有效地靶向作用部位。 Alexiou 等人 [20]首先用癌細(xì)胞植入新西蘭白兔的腿后，再將蒽環(huán)類(lèi)抗腫瘤藥物米托蒽琨（ Metoxantrone）與表面經(jīng)包衣處理的磁性納米粒相聯(lián)接，當(dāng)腫瘤長(zhǎng)到約 3500mm3 時(shí)，將這種載抗癌藥的磁性納米粒經(jīng)股骨動(dòng)脈或耳靜脈給藥，然后在體外腫瘤部位加上一個(gè)磁場(chǎng)。組織解剖或磁共振成像都證實(shí)了磁性納米粒存在于腫瘤組織中。 Lubbe 等人 [21]試驗(yàn)了大鼠和裸小鼠對(duì)空白及載藥磁性納米粒的耐受性，以及載藥磁性納米粒的藥效。而且在移植的腎癌和結(jié)腸癌模型上，載藥磁性納米粒能使腫瘤完全地緩解。其中 3 位病人接受了一個(gè)療程， 9 位接受了二個(gè)療程，另 2 位接受了三個(gè)療程的治療。結(jié)果病人對(duì)表阿霉素磁性納米粒耐受良好。表阿霉素磁性納米粒的人體試驗(yàn)研究表明，用磁性納米粒介導(dǎo)抗癌藥物具有較好的應(yīng)用前 景。目前國(guó)內(nèi)、外正在研究的熱介質(zhì)射頻誘導(dǎo)加溫方式十分引人注目。將氧化鐵的磁性納米粒制備成含藥的磁性脂質(zhì)體或磁性的溫敏脂質(zhì)體，即所謂的磁性靶向制劑 [8， 9， 21， 23]，用體外磁場(chǎng)使之定位于腫瘤部位，然后用體外立體導(dǎo)向磁場(chǎng)聚 239 集定位設(shè)備誘導(dǎo)氧化鐵磁性納米粒發(fā)熱，同時(shí)抗癌藥物在 局部釋放，這樣就使得腫瘤的化療和熱療同步進(jìn)行。目前的研究表明，單純的含有 Fe3O4 的脂質(zhì)體就可以應(yīng)用于腫瘤的局部升溫治療，并且有望成為腫瘤治療的新手段。因此氧化鐵納米粒又被稱(chēng)為超順磁性氧化鐵（ superparamagic iron oxide， SPIO）納米粒。隨著磁共振血管成像（ Magic Resonance Angiography， MRA）的應(yīng)用與發(fā)展， GdDTPA 又成為了增強(qiáng) MR 血管成像的主要對(duì)比劑。 科學(xué)家們開(kāi)發(fā)出了一系列的磁性納米粒 — 超順磁性氧化鐵（ SPIO），它是一種新型的磁共振陰性對(duì)比劑，其體內(nèi)具有組織特異性高，安全性好的特點(diǎn) [24]，目前在臨床上已有較多的應(yīng)用。 1．超順磁性氧化鐵納米粒的一般性能 科學(xué)家 從 80 年代以來(lái)對(duì)超順磁性氧化鐵進(jìn)行了廣泛 、深入的研究，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，開(kāi)發(fā)了一系列不同的 SPIO 產(chǎn)品。 SPIO 的粒度大小不同將影響 到其體內(nèi)分布特異性和磁化特性。根據(jù) SPIO 產(chǎn)品的顆粒大小可分為兩種類(lèi)型 [25]。一個(gè)常見(jiàn)的有代表性的制劑是 Schering 公司開(kāi)發(fā)的 SHU555A（商品名為 Resovist）。但臨床上目前用得較多的是 Advanced Magics 公司開(kāi)發(fā)的 AMI25（ Ferumoxides，商品名為 Feridex），直徑為（ 50?29） nm，其核心氧化鐵納米粒的直徑約為 20nm。另外還有 Nyed 公司開(kāi)發(fā)的 MSM 和 NSP430 等。粒度的改變使 USPIOs 具有一些特殊的性能。這主要是由于人體的網(wǎng) 狀內(nèi)皮系統(tǒng)（ RES）具有十分豐富的吞噬細(xì)胞，這些吞噬細(xì)胞是人體細(xì)胞免疫系統(tǒng)的組成部分，當(dāng)超順磁性氧化鐵納米粒通過(guò)靜脈注 240 射進(jìn)入人體后，與血漿蛋白結(jié)合，并在調(diào)理素作用下被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)識(shí)別，吞噬細(xì)胞就會(huì)把超順磁性氧化鐵納米粒作為異物而攝取，從而使超順磁性氧化鐵集中在網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞豐富的組織和器官中。吞噬細(xì)胞吞噬超順磁性氧化鐵顆粒后使相應(yīng)區(qū)域信號(hào)減低，而腫瘤組織因不含正常的吞噬細(xì)胞而保持信號(hào)不變。如 Feridex 的血漿半衰期小于 10min，靜注后數(shù)分鐘內(nèi)， 83%分布于肝臟， 6%~10%分布于脾臟。 USPIOs 由于顆粒小，主要進(jìn)入淋巴結(jié)組織及骨髓組織中。 3．超順磁性氧化鐵的毒副作用 鐵是人體內(nèi)的正常成分，但如果人體內(nèi)鐵的含量太大時(shí)，就會(huì)有毒性問(wèn)題。正常人每克肝組織內(nèi)鐵含量達(dá)到 200μ g 時(shí)，就會(huì)發(fā)展成為肝硬化和肝細(xì)胞癌；另一方面，人體內(nèi)鐵的總量達(dá) 15g 以上時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)亞急性和慢性中毒反應(yīng)。超順磁性氧化鐵在常規(guī)的臨床劑量之下，如 果緩慢注射給藥，副作用是極小的。在小鼠模型上應(yīng)用 AMI25達(dá)到 3000μ mol Fe/kg，也未見(jiàn)明顯的急性中毒反應(yīng)。從 1988 年 AMI25 進(jìn)入臨床研究以來(lái)，其常用劑量為（ 10~15）μ mol Fe/kg，輕度副作 用的發(fā)生率為 10%~15%，其中腰痛比較常見(jiàn)，發(fā)生率約為 3%~4%，其它副反應(yīng)還包括潮紅、皮疹和呼吸困難等，但都是可逆的，無(wú)需治療可自行恢復(fù)；低血壓等中度中毒反應(yīng)則相當(dāng)少見(jiàn)。有人報(bào)道副作用的發(fā)生率為 20%，包括：心動(dòng)過(guò)速、心率不齊、熱感、腰腹痛、頭痛、臉紅、低血壓等，但都比較輕微，可在 25min 內(nèi)自行恢復(fù)。 4．超順磁性氧化鐵對(duì)比劑的增強(qiáng)原理 超順磁性氧化鐵也能增強(qiáng)質(zhì)子弛豫，但其增強(qiáng)的原理與順磁性 MR 對(duì)比劑有所不同。 由于其特殊的化學(xué)結(jié)構(gòu)，超順磁性氧化鐵納米粒即使在較弱的磁場(chǎng)中也可產(chǎn)生較大的磁性，而外磁場(chǎng)撤消后磁性也迅速消失，即具有所謂超順磁性。 SPIOs 由于粒徑較大，主要促進(jìn)組織的 T2 弛豫，使組織信號(hào)降低，而對(duì) T1 弛豫影響較小。 5．超順磁性氧化鐵在磁共振成像中的臨床應(yīng)用 (1) 肝癌的檢出和診斷 用超順磁性氧化鐵進(jìn)行肝癌的檢出與診斷的原量在于：超順磁性氧化鐵納米粒在體內(nèi)被吞噬細(xì)胞攝取后，主要存在于富含吞噬細(xì)胞的正常肝組織中，使正常肝組織的 T2WI 信號(hào)減弱， 而肝轉(zhuǎn)移瘤和原發(fā)性肝細(xì)胞癌等惡性肝腫瘤組織中都缺乏吞噬細(xì)胞， T2WI 信號(hào)不降低，因此出現(xiàn)相對(duì)的高信號(hào)區(qū)，這樣就增加了肝癌組織與肝正常組織之間的對(duì)比度。對(duì)超順磁性氧化鐵納米粒在肝腫瘤檢出效率的臨床研究發(fā)現(xiàn)， SPIOs 不僅可以明顯提高腫瘤與正常組織的對(duì)比度噪聲比（ CNR），而且在不同場(chǎng)強(qiáng)下，經(jīng)過(guò)對(duì)比