【正文】 度（ Ms）和剩磁（ Mr）的測(cè)定值。 磁化強(qiáng)度是評(píng)價(jià)磁性納米粒磁響應(yīng)性的重要指針。原子吸收分光光度計(jì)的測(cè)定條件為：波長(zhǎng)為 ，狹縫為 ，燈電流為 5mA，能量補(bǔ)償為 70%，阻尼為 2，助燃?xì)?400Pa，乙炔為 。 磺基水楊酸法的主要操作過(guò)程如下：取上述用樣品適量，加入 10%的 NH4Cl 溶液 ， 10%的磺基水楊酸溶液 ，滴加氨水至溶液變成黃色，再加補(bǔ)加氨水 ，用蒸餾水定容后，以空白溶液為參比，于 445nm 處測(cè)定吸收度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算鐵的含量。 可以采用經(jīng)典的基于亞鐵離子的菲啶測(cè)定法，主要操作過(guò)程如下：取上述用樣品（ ）用 的氯化羥胺溶液（ 10%）來(lái)還原三價(jià)鐵離子， 15 分鐘后加入 的菲啶溶液（ %）混勻，再用 的 NaOH 溶液（ 12mol/L）中和上述溶液，最后用 30%的枸櫞酸鈉溶液調(diào)節(jié)溶液 pH 到 。 鐵含量的測(cè)定 測(cè)定鐵含量的一般方法包括磺基水楊酸法、鄰二氮菲（菲啶）法和原子吸收分光光度法等。同時(shí)可以采用多分散指數(shù)來(lái)作為參數(shù)判斷磁性納米粒的分布范圍。 磁性納米載藥系統(tǒng)的質(zhì)量評(píng)價(jià) 對(duì)于得到的磁性納米載體 系統(tǒng) 要從如下一些方面考察其理化性能： 顆粒形態(tài)和粒徑檢測(cè) 采用掃描電鏡對(duì)樣品進(jìn)行表面形態(tài)的觀察（包括形狀、圓整度等）；將樣 品適當(dāng)稀釋?zhuān)?jīng)除塵或染色處理后，采用激光散射粒徑分析儀、圖像分析儀或光子相關(guān)光譜儀進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)得樣品的平均粒徑和粒徑分布，后者可以用粒徑分布概率圖的形式給出。經(jīng)過(guò)表面處理的磁性微球與單抗在適當(dāng)?shù)木彌_液中培養(yǎng)，抗體通過(guò)物理吸附很快地與磁性微球結(jié)合，如果微球表面有活性基團(tuán)，則接下來(lái)就會(huì)通過(guò)較慢的化學(xué)反應(yīng)共價(jià)結(jié)合在磁性微球的表面。吸附結(jié)合只有在微球具有非常大的表面積時(shí)才有可能比較牢固。交聯(lián)聚苯乙烯微球強(qiáng)度高，表面易進(jìn)行化學(xué)修飾，是比較理想的制備免疫磁性微球的骨架材料。 免疫磁性微球的制備 免疫磁性微球（ Immunomagic microspheres， IMMS），或稱(chēng)免疫磁珠（ Immunomagic Beads， IMB），是表面結(jié)合有單克隆抗體的磁性微球。用此方法可以制得一種包含丙烯酸樹(shù)脂的水性凝膠磁性微球。 ④ 將磁鐵礦本身作為（亞鐵一過(guò)硫酸）氧化一還原系統(tǒng)的一部分，聚合物可以完全包裹在磁鐵礦周?chē)? ③ 首先在堿性溶液中沉淀 Fe2+和 Fe3+使成超順磁氧化鐵，然后用硅烷包衣成為微球。 ② 將磁性納米粒分散在高分子骨架材料的水溶液中，加入適當(dāng)?shù)谋砻婊钚詣?，在一種疏水性溶劑中乳化成為 W/O 型乳劑，用熱固化法或交聯(lián)固化法使高分子骨架材料固化成磁性微 球 [11]。 一步法發(fā)展較早，有很多種方法，如以下幾種： ① 將磁性納米粒（如四氧化三鐵納米粒等）分散于水中，加入高分子聚合物的單體，再加入引發(fā)劑，在適當(dāng)條件下引發(fā)聚合反應(yīng)，使單體在四氧化三鐵納米粒的周?chē)酆闲纬纱判晕⑶?[10]。這些骨架材料應(yīng)該性質(zhì)穩(wěn)定、強(qiáng)度較 高、無(wú)毒副作用。其中的高分子材料包括聚苯乙烯、硅烷、聚乙烯、聚丙烯酸、淀粉、葡聚糖、明膠、白蛋白、乙基纖維素等。 上述方法得到磁性脂質(zhì)體又可以選擇不同的脂質(zhì)材料制備成為磁性溫敏脂質(zhì)體。 1995 年 Ekapop等人 [8]就利用了 Meito Sangyo 公司（ Nagoya， Japan）生產(chǎn)的表面經(jīng)右旋糖酐修飾的磁性納米粒（ dextran magite，核心直徑為 5nm~10nm）作為磁性介質(zhì)，以 DPPC 為主要的磷脂材料 溶解于異丙醚：氯仿（ 1:1）的有機(jī)溶劑中，采用反相蒸發(fā)法制備了平均粒徑為（ 177。但是上述方法對(duì)于 Fe3O4 的包載量?jī)H為 133μ g/mL。 1986 年 Hiroshi 等 [7]對(duì)磁性脂質(zhì)體作為藥物靶向載體進(jìn)行了研究，采用的制備方法是脂膜水化法。 此外，還有前體脂質(zhì)體法、鈣融合法、加壓擠 出法、 pH 梯度法、噴霧干燥法等。 10．離心法：通過(guò)反相膠團(tuán)經(jīng)高速離心，從有機(jī)相、水透過(guò)接口而制得小單層脂質(zhì)體。此法適合于制備脂溶性蛋白類(lèi)藥物的脂質(zhì)體。如 黃芪多糖脂質(zhì)體是用本法制備的。 7．復(fù)乳法：將少量水相與較多量的磷脂油相進(jìn)行乳化（第 1 次）形成 W/O 的反相膠團(tuán)，減壓除去部分溶劑，然后加較大量的水相進(jìn)行乳化（第 2 次），形成 W/O/W 型復(fù)乳，減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，即得脂質(zhì)體。然后減壓蒸發(fā)除去有機(jī) 溶劑，達(dá)到膠態(tài)后，滴加緩沖液，旋轉(zhuǎn)幫助器壁上的凝膠脫落，然后在減壓下繼續(xù)蒸發(fā)，制得水性混懸液，通過(guò)凝膠色譜法或超速離心法，除去未包封的藥物，即得到大單層脂質(zhì)體。 5．凍融法：先制備未包封藥物的小單室脂質(zhì)體，在凍干前將待包封的藥物加入，在快速冷凍過(guò)程中，由于冰晶的形成，使形成的脂質(zhì)體膜破裂，形成冰晶的片層與破碎的膜同時(shí)存在，此狀態(tài)不穩(wěn)定，在緩慢融化過(guò)程中，暴露出的脂膜互相融合重新形成脂質(zhì)體。此法尤適用于過(guò)熱不穩(wěn)定的藥 物。本法制備的大多為單室脂質(zhì)體。將其混懸液通過(guò)高壓乳勻機(jī)兩次，所得成品大多為單室脂質(zhì)體，少量為多室脂質(zhì)體，粒徑絕大多數(shù)在 2μ m 以下。 1．薄膜分散法：磷脂與膽固醇等類(lèi)脂質(zhì)及脂溶性藥物溶于氯仿（或其它有機(jī)溶劑）中，將該氯仿液于玻璃瓶中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) ,使在玻璃瓶的內(nèi)壁上形成一薄膜；將水溶性藥物溶于磷酸鹽緩沖液中，加入玻璃瓶后不斷攪拌，即得。國(guó)外的報(bào)道較多，而國(guó)內(nèi)對(duì)這個(gè)領(lǐng)域中的研究還不夠深入。 磁性脂質(zhì)體的制備 磁性脂質(zhì)體的研究 開(kāi)始于二十世紀(jì)八十年代中后期。 ③ 接口聚合（ Interfacial polymerization method）：就是將藥物與氰基丙烯酸烷烴酯溶于乙醚中 ，在攪拌下慢慢滴入含有表面活性劑的水溶液中而制得。這些方法包括 [6]： ① 膠束聚合法（ Micell polymerization method）：就是將聚合物水溶性單體及藥物溶解于水中，與表面活性劑存在下經(jīng)攪拌分散至大量疏水介質(zhì)中（如正己烷），然后加入引發(fā)劑或在 γ 射線、 X射線、紫外光或可見(jiàn)光照射下發(fā)生聚合而得。 CDM MNPs 和 Dextran MNPs 相比，粒子表面的羧甲基較羥基而言具有更好的親水性 能，而通過(guò)羧甲基化處理，磁性納米粒表面帶有一定的負(fù)電性，有利于抑制血液組分對(duì)它的調(diào)理作用，從而減少RES 的被動(dòng)靶向作用，因而作為磁導(dǎo)向藥物載體，具有更好的表面性能。還可以將所制得的 Dextran MNPs 進(jìn)行羧甲基化處理制備羧甲基葡聚糖磁性納米粒（ CDM MNPs）。 將 Dextran T40 水溶液和含有 FeCl3? 6H2O 及 FeCl2? 4H2O 的水溶液混合均勻，攪拌下加入氨水溶液，加熱至 70℃反應(yīng) 1h。 1）滴 /min 的速度滴入預(yù)熱振蕩的棉籽油中，振蕩加熱維持 10min，然后置于冰塊中冷卻至25℃ , 用 60mL 無(wú)水乙醚洗滌 4 次，磁性納米粒經(jīng)凍干，在 4℃儲(chǔ)存?zhèn)溆?。其制備工藝流程如下：取人血清白蛋?125mg， Fe3O4（顆粒直徑在10nm~20nm 之間） 36mg，純化鹽酸阿霉素 10mg，加入 蒸餾水充分混勻，然后將這三種物質(zhì)的混合液加入 30mL 棉籽油中，在 125w 的功率， 4℃條件下超聲混合 2min。控制實(shí)驗(yàn)條件，可得到直徑不同的磁性納米?；虼判晕⑶?。 目前，制備磁性納米粒的方法很多，現(xiàn)就較常使用的方法列舉如下： 1．輻射聚合法 [2]： 利用前述制備的超細(xì)磁流體作為磁性介質(zhì)，采用輻射聚合法制備磁性納米粒。在靶部位釋放藥物的速度適宜，保證在該部位能夠釋放出大部分藥物。 ④ 遞送體系應(yīng)該具有最大的生物兼容性（ Biopatibility）和最小的抗原性（ Antigenicity）。使得外磁場(chǎng)對(duì)其能夠產(chǎn)生足夠的吸引力，從而將其靶向于治療部位及其周?chē)M織。 磁性納米粒和磁性納米載體的制備方法 磁性納米粒的制備 制備用于藥物載體的磁性納米粒應(yīng)考慮如下問(wèn)題： ① 作為載體的骨架物質(zhì)在體內(nèi)能夠代謝，代謝產(chǎn)物無(wú)毒，并在一定時(shí)間內(nèi)經(jīng)皮膚、膽汁、腎等排出體外?？梢栽O(shè)想，隨著納米科技的進(jìn)展和納米生物新材料的不斷出現(xiàn)，磁性納米粒將給生物醫(yī)藥帶來(lái)新的變革和快速的發(fā)展。目前一些磁性納米粒和免疫磁性微球已經(jīng)成為產(chǎn)品。 為了討論方便，本章將磁性納米粒制備的上述各種給藥系統(tǒng)統(tǒng)稱(chēng)為磁性納米載藥系統(tǒng)。其中磁性微球又包含磁性淀粉微球（ Magentic starch microspheres）、磁性白蛋白微球 (Magic albumin nanospheres)等 [1]，這些磁導(dǎo)向給藥系統(tǒng)可用于抗腫瘤等的靶向給藥 。 230 第 8 章 磁性納米載體 磁性納米粒（ Magic Nanomaterials）是指大小在納米尺度的磁性材料，如三氧化二鐵或四氧化三鐵的納米粒。 磁性納米粒經(jīng)過(guò)表面處理后，可以直接用于臨床的磁共振成像；磁性納米粒也可作為磁性介質(zhì)，與各種載體材料結(jié)合，制備成各種不同的磁導(dǎo)向給藥系統(tǒng)，如磁性微球（ Magic microspheres）、磁性微囊 (Magic capsules)、磁性納米球 (Magic nanospheres)、磁性納米粒 (Magic nanoparticles)、磁性脂質(zhì)體 (Magic liposomes)、磁性微乳 (Magic emulsions)等。 磁性納米粒和磁性微球還可進(jìn)一步與抗體結(jié)合，制備成免疫磁性納米?；蛎庖叽判晕⑶颍鼈?cè)谂R床和生物醫(yī)藥學(xué)實(shí)驗(yàn)中有很多應(yīng)用，主要是用于細(xì)胞的分離，如用于清除血液中的癌細(xì)胞等。 隨著納米科技的迅速發(fā)展，各種納米材料的研究日新月異，磁性納米粒的研究與應(yīng)用也是如此。有的磁性載藥系統(tǒng)已進(jìn)入臨床研究階段；有更多的磁性納米粒以及磁性載體系統(tǒng)正處于不同的試驗(yàn)研究階段。 下面對(duì)磁性納米粒、磁性納米載體（如磁性納米粒、磁性脂質(zhì)體等）的制備方法、質(zhì)量評(píng)價(jià)及其在醫(yī)藥領(lǐng)域 的應(yīng)用等進(jìn)行介紹。 ② 磁性介質(zhì)粒子大小應(yīng)合適，一般在 10nm~20nm 之間，最大不能超過(guò) 100nm。 ③ 在整個(gè)療程中鐵磁 性物質(zhì)的用量，不能超過(guò)貧血病人的常規(guī)補(bǔ)鐵總量。 ⑤ 系統(tǒng)應(yīng)具有足夠的載藥能力（ Loading capacity），具有一定的機(jī)械強(qiáng)度和生物降解速度。 ⑥ 給藥途徑和劑型設(shè)計(jì)要合理，并且盡量避免網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)（ RES）的清除作用。具體操作步驟如下： 231 向 磁流體中加入 十二烷基硫酸鈉、 丙烯酰胺、 甲叉雙丙烯酰胺，攪勻通氮?dú)夂筮M(jìn)行照射，總輻射劑量達(dá) 8000Gy 后向反應(yīng)體系中補(bǔ)加 丙烯酰胺、 甲叉雙丙烯酰胺和 烯丙胺，繼續(xù)照射 8000Gy，用水反復(fù)洗滌。 2．熱固化法 [3] 載阿霉素磁性白蛋白納米粒是由阿霉素、磁性物質(zhì)（ Fe3O4）和白蛋白組成的平均粒徑為100nm~1000nm 的球形顆粒。取棉籽油 100mL 并加熱至 100℃ ~150℃之間，加熱后置于 1500rpm 的加熱振蕩器上，維持溫度進(jìn)行振蕩，將超聲后的混懸液以（ 100177。 3．共沉淀法 石可瑜和常津等 [4， 5]采用共沉淀法制備葡聚糖磁性納米粒（ Dextran MNPs）。反應(yīng)產(chǎn)物冷卻后經(jīng)離心除去體系中的大粒子和聚集物，用 Sephacryl S300 凝膠柱進(jìn)行分離，棄去非磁 性部分，磁性組分即 Dextran MNPs，用去離子水透析后凍干封存。而后可以采用高碘酸鈉氧化Dextran MNPs 和 CDM MNPs，然后與 ADR（阿霉素）藥物分子通過(guò) Schiffs’反應(yīng)偶聯(lián)，制備 ADRCDM MNPs 和 ADRCDM MNPs，得到的載藥納米粒的平均直徑分別為 67nm 和 56nm。 此外制備普通納米粒的方法也可以借鑒用以制備磁性納米粒，只是在適當(dāng)?shù)臅r(shí)候加入磁性納米粒。 ② 乳化聚合法（ Emulsion polymerization method）：就是將含有葡聚糖或表面活性劑的酸性溶液中，機(jī)械攪拌下加入水不溶性單體如氰基丙烯酸烷烴酯（ Cyanoacrylate）而制得，其聚合機(jī)理是水中OH— 與氰基丙烯酸烷烴酯發(fā)生親核反應(yīng)而聚合。 ④ 鹽析固化法（ Salting out coagulation method）：就是將藥物和包封材料如明膠溶于水中，在表面活性劑存在下，高速攪拌，徐徐加入鹽類(lèi)沉淀劑（如硫酸鈉溶液）使鹽析，加少量溶劑化劑（ Resolving 232 agent）如乙醇、異丙醇等，至混濁剛消失，繼續(xù)攪拌并加入適量固化劑（如戊二醛水溶液）固化，經(jīng)過(guò)透析或經(jīng)葡聚糖凝膠柱除去鹽類(lèi)而制成。磁性脂質(zhì)體就是在脂質(zhì)體中摻入一定數(shù)量、一定粒徑的磁性納米粒制成的脂質(zhì)體。 制備脂質(zhì)體的方法原則都可用于制備磁性脂質(zhì)體。 2．注入法：將磷脂與膽固醇等類(lèi)脂質(zhì)及脂溶性藥物溶入有機(jī)溶劑中（多用乙醚），該溶液經(jīng)注射器緩緩注入加熱至 50℃（并用磁力攪拌）的磷酸鹽緩沖溶液（或含水溶性藥物）中，不斷攪拌至乙醚除盡為止，即得大多孔脂質(zhì)體。 3．超聲波分散法：水溶性藥物溶于磷酸鹽緩沖液，加入磷脂與膽固醇及脂溶性藥物成共溶于有機(jī)溶劑的溶液，攪拌蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，殘留液經(jīng)超聲波處理 ,然后分離出脂質(zhì)體。 4．冷凍干燥法：將類(lèi)脂高度分散在水溶液中，冷凍干燥，然后再分散到含藥的水性介質(zhì)中，形成脂質(zhì)體。另外，還可使用重建凍干法制備脂質(zhì)體，將類(lèi)脂乙醇液與PBS 混合并制成空白脂質(zhì)體，滅菌、超聲波粉碎，加入藥物和凍結(jié)保護(hù)劑，冷凍干燥 ,即得。 6．逆相蒸發(fā)法：將磷