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多重不對(duì)稱擴(kuò)增介紹-免費(fèi)閱讀

  

【正文】 LATEPCR(LinearAfterTheExponential PCR) 多重不對(duì)稱 PCR重要影響因素 ? 引物二聚體 ? 引物特異性 主要是導(dǎo)致不對(duì)稱 PCR限制性引物和非限制性引物比例的改變,或者限制性引物絕對(duì)量的改變,從而導(dǎo)致擴(kuò)增差異化或者擴(kuò)增失敗。 ? 不對(duì)稱擴(kuò)增對(duì)于低拷貝樣本的擴(kuò)增較難,對(duì)于病原體檢測(cè)需要更詳盡的 PCR設(shè)計(jì)和優(yōu)化。引物的擴(kuò)增效率到目前為止,還沒(méi)有一個(gè)可以明確的定量計(jì)算方法 。正所謂 強(qiáng)者更強(qiáng)、弱者更弱 。 ? 經(jīng)濟(jì) 簡(jiǎn)便 性 : 多種 病原體在同一反應(yīng)管內(nèi)同時(shí)檢出,將大大的節(jié)省時(shí)間,節(jié)省試劑,節(jié)約經(jīng)費(fèi)開支,為臨床提供更多更準(zhǔn)確的診斷 信息 。 引物二聚體 ? 包括引物間的二聚體以及引物自身所形成的發(fā)卡結(jié)構(gòu),還有一類是第三方 DNA介導(dǎo)的二聚體,這些二聚體和非特異引物一樣都會(huì)干擾引物與目標(biāo)結(jié)合位點(diǎn)的競(jìng)爭(zhēng),影響擴(kuò)增效率 。 不對(duì)稱 PCR優(yōu)缺點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn) ? 可以獲得大量 SSDNA,快速進(jìn)行下游操作。 ? 設(shè)臵限制性引物量后,再通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證限制性引物濃度和非限制性引物濃度的比例,目前常用比例 1:1: 1: 1:1 1
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