多重不對稱擴增介紹-在線瀏覽
2025-07-18 01:38本頁面
【正文】 于成組病原體的檢測，如肝炎病毒，腸道致病性細菌，性病，無芽胞厭氧菌等同時檢測 。 多重 PCR技術(shù)難點 ? 反應 原理，反應試劑和操作過程與一般 PCR相同 . ? 難點主要體現(xiàn)在前期引物設計過程中 —— 反應體系的平衡 反應體系不平衡 ? 反應體系的 不平衡導致 在前期的幾輪反應中某些優(yōu)勢引物及其模板迅速擴增，獲得大量的擴增產(chǎn)物，而這些擴增產(chǎn)物同時又是 DNA聚合酶的良好抑制劑（ SantaLucia, 2021）。正所謂 強者更強、弱者更弱 。 ? 嚴格 blast驗證 最佳退火溫度不一致 ? 將多對引物放臵入一個體系中擴增，由于進行PCR反應的退火溫度相同，所以要求每一對引物的最佳退火溫度接近。 為宜。 ? 針對不同對引物之間二聚體，目前可以采用 Visual OMP6軟件（ 7天試用版）進行驗證。引物的擴增效率到目前為止，還沒有一個可以明確的定量計算方法 。 不對稱 PCR ? 用不等量的一對引物進行模板的擴增， PCR擴增后產(chǎn)生大量的單鏈 DNA。 ? 在擴增過程前 1020個循環(huán)，其擴增產(chǎn)物主要是雙鏈 DNA，但當限制性引物 (低濃度引物 )
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